Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Dissectie en Cultuur van Muis Embryonale Nier

11.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55715

⸱

17 mei 2017

 , 
1Department of Neuroscience, Uppsala University, 2Department of Organismal Biology, Evolutionary Biology Center, Uppsala University

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een methode voor het isoleren en cultiveren van metanefrische rudimenten uit muisembryo's.

Samenvatting

Het doel van dit protocol is om een ​​methode te beschrijven voor de dissectie, isolatie en cultuur van muismetanefrische rudimenten.

Tijdens de ontwikkeling van zoogdierontwikkeling, communiceren de twee voorvaderweefsels, de ureterische knop en het metanefrische mesenchym, cellulaire mechanismen en vormen zij uiteindelijk het verzamelstelsel en de nefronen van de nier. Aangezien de embryo's van de zoogdier intracuterine groeien en derhalve ontoegankelijk zijn voor de waarnemer, is er een orgelcultuur ontwikkeld. Met deze methode is het mogelijk om epitheliale mesenchymale interacties en cellulaire gedragingen tijdens nierorganogenese te bestuderen. Bovendien kan de oorsprong van aangeboren nier- en urogenitale tract misvormingen worden onderzocht. Na zorgvuldige dissectie worden de metanefrische rudimenten overgebracht op een filter dat op cultuurmedium drijft en gedurende enkele dagen in een celcultuur-incubator kan worden gehouden. Men moet echter bewust zijn dat de voorwaarden zijnKunstmatig en kan het metabolisme in het weefsel beïnvloeden. Ook kan de penetratie van teststoffen beperkt worden door de extracellulaire matrix en het basale membraan aanwezig in de explant.

Een belangrijk voordeel van orgelcultuur is dat de experimentator direct toegang tot het orgaan kan krijgen. Deze technologie is goedkoop, eenvoudig en maakt een groot aantal wijzigingen mogelijk, zoals de toevoeging van biologisch actieve stoffen, de studie van genetische varianten en de toepassing van geavanceerde beeldvormingstechnieken.

Inleiding

De zoogdiernier is afgeleid van twee primordiale structuren met mesodermale oorsprong: de tubulaire epitheliale ureterknop en het metanefrische mesenchym. Tijdens de nefrogeneze dringt de ureterknop het metanefrische mesenchym binnen en vertakken om het verzamelsysteem te vormen. Het metanefrische mesenchym geeft aanleiding tot de epitheliale elementen van de nefronen. Deze processen vinden plaats op een precies getimede en ruimtelijk gecoördineerde manier en worden geïnitieerd door wederzijdse inductieve mechanismen. Beide weefselcomponenten communiceren en beïnvloeden de celmorfogenese van de ander.

In de jaren 1920 was het Boyden die de in vivo obstructie van de mesonefrosductus bij kippen uitvoerde en daarmee de eerste indicatie gaf van inductieve interacties, aangezien gescheiden nefrische blastema niet kon differentiëren1. Rond dezelfde tijd werden de eerste succesvolle pogingen gepubliceerd om nierrudimenten van kippen in een hangende druppel te kweken. Vervolgens werd de orgaancultuur ontwikkeld om weefselinteracties in de orgaanontwikkeling bij zoogdieren te bestuderen. In de jaren 1950 ontwikkelde Grobstein een techniek waarbij metanefrische rudimenten op een filter konden worden gekweekt. Deze techniek werd gewijzigd door Saxén, die het filter op een Trowell-type scherm in een kweekschaal plaatste1. In de loop der jaren zijn er veel aanpassingen en toepassingen voor orgaancultuur ontstaan. De hier beschreven methode is gebaseerd op Saxén's techniek, maar is vereenvoudigd, aangezien de filters vrij op het medium drijven en de diameter van de kweekput slechts iets groter is dan de diameter van het filter, wat ongewenste beweging van het filter beperkt.

Hele orgaancultuur is een klassiek, goedkoop en eenvoudig, maar krachtig hulpmiddel om cellulaire processen en intercellulaire communicatie tijdens de orgaanontwikkeling te onderzoeken. Orgaancultuur maakt behandeling mogelijk met biologische middelen, zoals groeifactoren, antilichamen, antisense-oligonukleotiden, virussen en peptiden, evenals met farmaceutische verbindingen en andere chemicaliën. Ook kan de genfunctie worden bestudeerd met behulp van explantaten afkomstig van genetisch gemodificeerde muizen of met behulp van inductieve geninactivatietechnologie, zoals het Cre-loxP systeem. Dit maakt de studie mogelijk van genetische mutaties die embryonale letaliteit veroorzaken vóór de ontwikkeling van de nier. Orgaancultuur kan ook worden gecombineerd met fluorescente tagging voor genfunctie of lijntracering en moderne beeldtechnieken, die real-time monitoring van celgedrag mogelijk maken2.

In het specifieke voorbeeld dat hier wordt gegeven, werd het effect van EphrinB2-geactiveerde Eph-receptorsignalering op de vertakkingsmorfologie van de ureterknop onderzocht. De morfologie van de EphA4/EphB2 dubbel-knockout muizen suggereerde verschillende ernstige defecten in de nierontwikkeling, die al op embryonale dag 11 (E11) detecteerbaar waren en de ureterknop, de ureter en de gemeenschappelijke nefrische ductus betrokken3. Signalering via Eph-receptoren vereist de clustering van het ligand-receptor dimeer4. Om Eph-signalering te overactiveren, werden de nierrudimenten van E11.5 muis embryo's gekweekt in aanwezigheid van geclusterd recombinant EphrinB2-Fc. EphrinB2 is een bekende ligand voor de EphA4 receptor, die in de uiteinden van de ureterknop wordt uitgedrukt3.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Muizen werden gehandhaafd volgens de Zweedse regelgeving en de wetgeving van de Europese Unie (2010/63 / EU). Alle procedures werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van het Zweedse Etiekkomitee (vergunningen C79 / 9, C248 / 11 en C135 / 14). Procedures bij de Universiteit van Heidelberg met betrekking tot diergeneeskunde zijn goedgekeurd door het Regierungspräsidium Karlsruhe en de dierenwelzijnsambtenaren aan de Universiteit van Heidelberg.

1. Bereiding van reagentia en materialen voor cultuur

OPMERKING: Gebruik een laminaire afzuigkap om de vervuiling te minimaliseren.

  1. Op de dag van dissectie wordt pre-cluster menselijk Fc alleen of recombinant chimere ephrin eiwit gefuseerd aan humaan Fc door het te mengen met anti-humane Fc geit antilichamen bij een molverhouding van 1: 5 in steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Incubeer gedurende 1 uur bij 37 ° C 5 .
  2. Bereid het kweekmedium door Dulbeccos Modified Eagle Medium: Nutrient aan te vullenMengsel F-12 (DMEM / F12) met 1% penicilline / streptomycine (v / v), 1% glutamine (v / v), 1% insuline transferrin selenium (v / v), 50 μg / ml humaan holo- Transferrine en 1,5 μg / ml amphotericine.
    OPMERKING: 10 ml medium is voldoende voor 16 embryo's.
  3. Voeg clusterde recombinant ephrinoplossing toe bij een uiteindelijke concentratie van 20 μg / ml aan het kweekmedium. Gebruik geclusterde menselijke Fc als controle.
  4. Bereid kweekplaten door 500 μl kweekmedium toe te voegen aan elke putje van een steriele, niet-beklede, platte bodem polystyreen 4-putjesplaat.
  5. Met behulp van steriele tang, plaats een polycarbonaat membraanfilter met een poriegrootte van 5 μm per putje bovenop het medium. Breng de voorbereide plaat over naar de incubator (37 ° C / 5% CO 2 ). Zorg ervoor dat het filter droog blijft op het bovenvlak en drijft.
    OPMERKING: Eén filter is voldoende voor twee nieranlagen.
  6. Gebruik een scheermesje, snijd ongeveer 30 pipetjes (volume: 100 μL) bij benaderingY 1 mm van de punt om een ​​bredere opening te geven. Plaats de tips terug in een pipetstickrek.

2. Dissectie van Metanephric Rudiments in E11.5

  1. Een timed-zwangere muis op E11.5 door cervicale dislocatie opofferen (of gebruik maken van een methode die is goedgekeurd door de lokale ethische commissie).
  2. Verwijder de baarmoeder en de embryo's, zoals beschreven door Brown et al. 6 . Vanaf dit punt naar voren, werk onder een dissectiemicroscoop.
  3. Snijd het embryo direct onder de voorbenen met behulp van nr. 5 horlogemaker. Gebruik een vers petri dish voor elk embryo. Verwijder de benen en de staart van het embryo. Om dit te doen, grijp het weefsel met een paar nr. 5 horlogemakerpincetjes en gebruik de tips van een tweede paar om te snijden.
  4. Om de ventrale organenmassa te verwijderen, gebruik de tips van een paar tang om lateraal de lichaamswand van het embryo in een rostral-naar-caudale richting te openen.
    1. Snijd oppervlakkig, parallel aan tHij verdween aorta. Gebruik de bloedgevulde en dus zichtbare dorsale aorta voor oriëntatie. Zorg het ventrale deel van de lichaamswand voorzichtig van het dorsale gedeelte af met behulp van de uiteinden van de gesloten tang en draai het embryo om. Snijd de lichaamswand lateraal in een rostral-naar-caudale richting en gebruik de dorsale aorta voor oriëntatie, zoals voor de vorige kant.
  5. Zodra de ventrale lichaamswand is gescheiden van het dorsale lichaam, pak het met een paar tang en trek het zorgvuldig om het te verwijderen, samen met de orgaand massa.
    OPMERKING: De metanefrische anlagen blijven gewoonlijk aan de dorsale lichaamswand bevestigd. Zij zijn ovaal, ~ 200 μm lange structuren gelegen op het niveau van de achterste ledematen.
  6. Houd de dorsale lichaamswand vast met een paar tangjes, met de ventrale zijde naar boven gericht. Gebruik de andere paar tangen, pak de dorsale aorta aan het rostale uiteinde en schroef de dorsale aorta zorgvuldig af van de dorsale lichaamswand.
    OPMERKING: Beide metanefrische nieren blijven gewoonlijk bijgevenEd naar de dorsale aorta.
  7. Met een paar tangjes snijdt u radiaal naar de nierpunten om de aorta te verwijderen. Vervolgens zorgvuldig scheid de twee nierpunten met behulp van de tips van de tang.
  8. Vet het ongewenste weefsel voorzichtig af van de nierpunten met behulp van de tips van de tang. Wees voorzichtig om het mesenchym niet te beschadigen, aangezien schade kan leiden tot slechte groei en uitsluiting van de explant uit verdere analyse.
  9. Breng de nierplaten apart door met een microliterpipet en een wijd open pipettepunt in 10 μl PBS aan het polycarbonaatmembraanfilter in een 4-putjesplaat.
    OPMERKING: Vanwege de oppervlaktespanning wordt de explant bedekt met een dunne laag medium. Eén filter is voldoende voor twee nieranlagen.
    1. Plaats elk van de twee nieranlagen in het midden van elke respectieve helft van het filter. Breng het bord terug naar de incubator bij 37 ° C / 5% CO 2 . Laat de bord in de incubator tot aan de metanefrische rudIments uit het volgende embryo zijn klaar om op het filter te worden geplaatst.
  10. Herhaal stap 2.3-2.9.1 voor elk embryo.
    OPMERKING: Bij een bepaalde praktijk duurt de dissectieprocedure ongeveer 5 minuten per embryo.
  11. Incubeer de nieren anlagen gedurende 3 dagen bij 37 ° C / 5% CO 2 .

3. Bereiding van reagentia voor fixatie en kleuring

  1. Om 4% paraformaldehyde (PFA) in PBS zonder calcium en magnesium (w / v) op te bereiden, ontleed de PFA bij 60 ° C in PBS, continu roeren. Koel tot kamertemperatuur en gebruik een papieren filter om de resterende deeltjes te verwijderen. Aliquot en houd bij 4 ° C voor onmiddellijk gebruik of bevriezen voor langdurige opslag.
    VOORZICHTIG: PFA is giftig. Draag de persoonlijke beschermende uitrusting zoals gespecificeerd in de lokale veiligheidsnormen en werk in een afzuigkap. Verwijder afval volgens de institutionele richtlijnen en gebruik de aangegeven afvalcontainers.
  2. Om de permeabilisatieoplossing voor te bereiden, verdund Triton X-100In PBS zonder calcium en magnesium tot 0,3% (v / v).
  3. Voor het bereiden van een blokkerende oplossing, voeg 5% (v / v) geiten serum en 0,1% Triton X-100 toe aan PBS zonder calcium en magnesium. Voeg natriumazide toe aan een uiteindelijke concentratie van 0,02% (w / v). Bewaren bij 4 ° C.
    VOORZICHTIG: Natriumazide is giftig. Hanteer natriumazide in overeenstemming met de lokale veiligheids- en milieubeschermingsvoorschriften.
    OPMERKING: Als u antilichamen gebruikt voor het vullen, gebruik 5% serum uit de soort waarvan het secundaire antilichaam is afgeleid om blokkerende oplossing te maken.
  4. Verdun biotinyleerde Dolichorus biflorus agglutinine 1: 200 in blokkerende oplossing. Verdun Alexa488-geconjugeerde streptavidine 1: 200 in blokkerende oplossing.
  5. Voor gebruiksklaar inbewerkingsmedium (zie tabel van materialen) voeg 0,1 g wateroplosbare polyvinylalcohol gebaseerde mucoadhesive / mL toe aan 25% (w / v) glycerol in 0,1 M Tris-HCl (pH 8,5) . Verhit tot 50 ° C onder continue roering gedurende 1 uur, afkoelen en stel de pH op op 8,0-8,5 met 1M NaOH. Vermijd hogere NaOH concentraties. Voeg 100 μg / ml N-propylgallaat en thimerosal toe aan een uiteindelijke concentratie van 0,02% (w / v). Roer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur.
    VOORZICHTIG: Thimerosal is giftig. Hanteer het in overeenstemming met de lokale veiligheids- en milieubeschermingsvoorschriften.
    1. Vul het embeddingsmedium in 50 ml buizen, balans de rotor en centrifugeer bij 3.200 xg en kamertemperatuur gedurende 10 minuten. Dek de heldere oplossing in 15 ml buizen en gooi de pellet weg. Aliquot en opslaan bij -20 ° C gedurende enkele weken. Zodra het ontdooid is, houd de oplossing bij 4 ° C. Warm tot ~ 30 ° C onmiddellijk voor gebruik.
  6. Bereid zoveel glazen glijbanen als filters met explanteren op. Lijm hiervoor twee kleine deklijsten, 18 x 18 mm aan weerszijden van de glazen glijbaan met behulp van directe lijm. Laat een ruimte van 15 mm voor de filter tussenin.

4. Bevestiging en kleuring

  1. Na een kweekperiode van 3Dagen in vitro (div), verwijder de platen uit de incubator en aspirateer het kweekmedium zorgvuldig uit elke put met behulp van een micropipet. Zorg ervoor dat u het filter niet aanraakt en de tipopening naar de wand van de put houdt.
  2. Voeg 500 μl 4% PFA / PBS toe aan elke put. De filters zullen op de fixatie drijven. Gebruik een micropipet, voeg de PFA-fixatief voorzichtig toe om de filters te onderdompelen. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten.
    OPMERKING: Voor alle volgende stappen moet erop worden gezorgd dat de explantanten niet van het filter afgewassen worden. Houd de opening van de pipettip tegen de wand van de put.
  3. Verwijder de PFA en spoel tweemaal met 500 μL PBS, onderdompeling van het filter. Voeg 500 μl permeabilisatieoplossing toe aan elke put en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 uur.
  4. Spoel tweemaal met 500 μL PBS en voeg 500 μL blokkerende oplossing toe aan elke put. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 uur.
  5. Vervang de blokkerende oplossing met250 μl biotinylated Dolichorus biflorus agglutinine verdund 1: 200 in blokkerende oplossing en incuberen bij 4 ° C gedurende 24 uur.
  6. Verwijder de Dolichorus biflorus agglutinine oplossing en spoel tweemaal met 500 μL PBS per putje.
  7. Voeg 250 μL Alexa488-geconjugeerde streptavidine verdund 1: 200 in blokkeringsoplossing toe en incubeer bij 24 ° C gedurende 4 uur. Alternatief, incuberen bij kamertemperatuur gedurende 2 uur.
    OPMERKING: een beter signaal-ruisverhouding wordt bereikt bij incubatie bij 4 ° C.
  8. Spoel tweemaal met 500 μL PBS per putje. Met behulp van pincet, breng de filters over op de voorbereide glazen glijbanen, met de explanteren naar boven gericht. Monteer met ~ 50-100 μL embedding medium. Deksel met 60 mm lang nr. 1.5 deksels. Laat de embeddingmediumoplossing gedurende 2 uur bij kamertemperatuur in het donker stollen. Ga door naar afbeelden of sla de glijbanen op, in folie verpakt, bij 4 ° C tot klaar om op te slaan.
  9. Afbeelding met een widefield epifluorescentiemicroscoop 7 </ Sup> gekoppeld aan een Hg-lamp en gebruik een spiegel-eenheid voor blauwe excitatie (excitatie bandpas, 460 - 495 nm, dichromatische spiegel, 505 nm en emissie bandpas, 510 - 550 nm) en 20X Plan-Apochromat lenzen, 0,75 numerieke opening.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Metanephrische nier anlagen werden afgeleid van zwangere Black-6 inbloed muizen bij E11.5 en werden gekweekt. Na 3 dagen had de ureterische knop tot 5 maal vertakt, waardoor de initiële T-vormige ureterische knop werd verdubbeld. Elke explant werd gefotografeerd en de aantallen segmenten en eindpunten werden gekwantificeerd om de vertakkende generaties te bepalen en het aantal eindpunten per tak te berekenen ( Figuur 1 ). ImageJ ( rd generatie; de 4e

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit manuscript beschrijft een methode om de ontwikkelende metanephrische anlagen van het muisembryo te isoleren en de orgaansrudimenten te cultiveren. Deze methode is een standaard techniek, zoals ontwikkeld door Grobstein 8 en Saxén 9 , 10 , en werd aangepast en aangepast door vele anderen 11 , 12 . Het succes van de methode hangt voornamelijk af van de duur van de dissectie, aan...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs bedanken Leif Oxburgh en Derek Adams om hun kennis, Leif Oxburgh, voor de handige opmerkingen over het manuscript te delen en Stefan Wölfl en Ulrike Müller voor hun technische ondersteuning en Saskia Schmitteckert, Julia Gobbert, Sascha Weyer en Viola Mayer voor hulp in de laboratorium. Dit werk werd ondersteund door Development, The Company of Biologists (aan CP).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMEM/F-12Thermo Fisher Scientific21331020
Penicillin-Streptomycin (10.000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15140148
GlutaMAX SupplementThermo Fisher Scientific35050061
DPBS, calcium, magnesiumThermo Fisher Scientific14040117gebruik voor dissectie
holo-Transferrin menselijkSigma-AldrichT0665
Insulin-Transferrin-Selenium (ITS -G) (100x)Thermo Fisher Scientific41400045
ParaformaldehydeSigma-Aldrich158127
Amphotericin B-oplossingSigma-AldrichA2942
Triton X-100Sigma-AldrichX100
NatriumaziedSigma-AldrichS8032
ThimerosalSigma-AldrichT5125
PropylgallaatSigma-Aldrich2370
Mowiol 4-88Sigma-Aldrich81381
GlycerolSigma-AldrichG5516
Biotinyleren Dolichorus Biflorus AgglutininVector LaboratoriesB-1035
Alexa488 geconjugeerd StreptavidinJackson Immuno Research016-540-084
Recombinant Mouse Ephrin-B2 Fc Chimera Eiwit, CFR&D Systems496-EB
Recombinant Human IgG1 Fc, CFR&D Systems110-HG-100
Geit Anti-Human IgG Fc AntilichaamR&D SystemsG-102-C
Fosfaat gebufferde zoutoplossingen tablettenSigma-AldrichP4417gebruik voor fixatie en immunokleuring
Dumont #5, biologie
tips, INOX, 11 cm		agnthos.se0208-5-PS2 paar pincetten zijn nodig
Iris schaar, recht, 12 cmagnthos.se03-320-120
Dressing Forceps,
recht, delicaat, 13 cm		agnthos.se08-032-130
Petrischalen Nunclo Delta behandeldThermo Fisher Scientific150679
TMTP01300 Isopore Membraanfilter, polycarbonaat, Hydrofiel, 5,0 µm, 13 mm, wit, gewoonMerckMilliporeTMTP01300
Nunclon Multidishes
4 putten, platte bodem		Sigma-AldrichD6789-1CS
Microscoop dekglas 24 x 50 mm dikte n. No.1.5H 0.17 +/-0.005 mmnordicbiolabs107222
Dekglazen No.1.5, 18 mm x 18 mmnordicbiolabs102032
Glijbanen ~76 x 26 x 1, 1/2-w. gemalen gewoonnordicbiolabs1030418
VWR ScheermessenVWR55411-055
50 mL centrifugebuizenSigma-AldrichCLS430828
15 mL centrifugebuizenSigma-AldrichCLS430055
Whatman prepleated kwalitatief filterpapier, Grade 113V, crêpeSigma-AldrichWHA1213125
Vaste onderzoek microscoopOlympusBX61WI
Zwarte 6 ingebrede muizen, mannelijk, C57BL/6NTacTaconicB6-M
Zwarte 6 ingebrede muizen, vrouwelijk, C57BL/6NTacTaconicB6-F
Greenough Stereo MicroscoopLeicaLeica S6 E

Referenties

  1. Saxén, L. Organogenesis of the kidney. Developmental and Cell Biology Series. 19, Cambridge University Press. (1987).
  2. Lindström, N. O., et al. Integrated β-catenin, BMP, PTEN, and Notch signalling patterns the nephron. eLife. 4, e04000(2015).
  3. Peuckert, C., et al. Multimodal Eph/Ephrin signaling controls several phases of urogenital development. Kidney Int. 90 (2), 373-388 (2016).
  4. Pasquale, E. B. Eph receptor signalling casts a wide net on cell behaviour. Nat Rev Mol Cell Biol. 6 (6), 462-475 (2005).
  5. Bonanomi, D., et al. Ret Is a Multifunctional Coreceptor that Integrates Diffusible- and Contact-Axon Guidance Signals. Cell. 148 (2), 568-582 (2012).
  6. Brown, A. C., et al. Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney. J Vis Exp. (50), e2555(2011).
  7. Olympus Support. , Available from: http://www.olympusamerica.com/cpg_section/cpg_archived_product_details.asp?id=817 (2016).
  8. Grobstein, C. Inductive interaction in the development of the mouse metanephros. J Exp Zool. 130, 319-340 (1955).
  9. Saxén, L., Toivonen, S. Primary Embryonic Induction. , Academic Press. London. (1962).
  10. Saxén, L., Koskimies, O., Lahti, A., Miettinen, H., Rapola, J., Wartiovaara, J. Differentiation of kidney mesenchyme in an experimental model system. Adv Morphog. 7, 251-293 (1968).
  11. Dudley, A. T., Godin, R. E., Robertson, E. J. Interaction between FGF and BMP signaling pathways regulates development of metanephric mesenchyme. Genes Dev. 13, 1601-1613 (1999).
  12. Perälä, N., et al. Sema4C-Plexin B2 signalling modulates ureteric branching in developing kidney. Differentiation. 81 (2), 81-91 (2011).
  13. Thesleff, I., Ekblom, P. Role of transferrin in branching morphogenesis, growth and differentiation of the embryonic kidney. J Embryol exp Morph. 82, 147-161 (1984).
  14. Watanabe, T., Costantini, F. Real-time analysis of ureteric bud branching morphogenesis. Dev Biol. 271, 98-108 (2004).
  15. Sebinger, D. D. R., Unbekandt, M., Ganeva, V. V., Ofenbauer, A., Werner, C., Davies, J. A. A Novel, Low-Volume Method for Organ Culture of Embryonic Kidneys That Allows Development of Cortico-Medullary Anatomical Organization. PLoS One. 5 (5), e10550(2010).
  16. Ekblom, P., Miettinen, A., Virtanen, I., Wahlström, T., Dawnay, A., Saxén, L. In vitro segregation of the metanephric nephron. Dev Biol. 84 (1), 88-95 (1981).
  17. Davies, J. A., Unbekandt, M. siRNA-mediated RNA interference in embryonic kidney organ culture. Methods Mol Biol. 886, 295-303 (2012).
  18. Saxén, L., Lehtonen, E. Embryonic kidney in organ culture. Differentiation. 36 (1), 2-11 (1987).
  19. Bard, J. B. L. The development of the mouse kidney embryogenesis writ small. Curr Opin Genet Dev. 2, 589-595 (1992).
  20. Davies, J. A. A method for cold storage and transport of viable embryonic kidney rudiments. Kidney Int. 70 (11), 2031-2034 (2006).
  21. Batourina, E., et al. Distal ureter morphogenesis depends on epithelial cell remodeling mediated by vitamin A and Ret. Nat Genet. 32 (1), 109-115 (2002).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Metanefrische rudimentenvertakking van de ureterknoporgancultuurtechniekembryonale dag 11.5polycarbonaat membraanfiltercelcultuurencubatorimmunofluorescentiekleuringconfocale microscopie-imagingnierorganogenese
Dissectie en Cultuur van Muis Embryonale Nier
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.