We ontwikkelden een methode om succesvol te verwijderen, verwerken, delen en vlek voor histopathologische evaluatie, mammariumweefsel dat oorspronkelijk op glijbanen was vastgezet als gehele mounts. Deze methode kan de verzameling en evaluatie van de hele membraan van de borstklier bevorderen in onderzoeken voor reproductieve en ontwikkelingstest.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Sectie Mammary Gland Whole Mounts voor Lesion Identificatie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De normale ontwikkeling van de borstklier kan worden veranderd door blootstelling aan milieuspecifieke stoffen en farmaceutische producten, overmatige blootstelling aan hormonen en genetische veranderingen. Mammary gland complete mounts zijn een goedkope methode om de voortgang van morfologische veranderingen vast te stellen die na blootstelling kunnen ontstaan. Echter, in het latere leven, wanneer abnormaliteiten meer geneigd zijn om te ontwikkelen, kan alleen vertrouwen op deze methode niet altijd voldoende informatie verschaffen om een goede diagnose van de abnormaliteit te maken. Historisch, in chemische test richtlijnen studies, wordt een enkele mammierklier bij necropsy verwijderd en bereid als een hematoxyline en eosine (H & E) -verfde sectie. De incorporation van contralaterale mammary full-mount collectie en analyse vermindert de kans op een valse negatieve beoordeling. Evaluatie van de gehele berg wordt beperkt door de aanwezigheid van één of twee hele borstklippen op een dia, en in sommige gevallen zijn de abnormaliteiten waargenomen in de gehele berg, geenT uniform vertegenwoordigd in de H & E sectie. Het doel van deze studie was het ontwikkelen van een protocol voor het omzetten van de gehele membraan in de mantel naar H & E-gekleurde secties, zodat letsels die anders gemist of moeilijk te diagnosticeren kunnen worden geïdentificeerd. Hier worden we een methode beschreven om een hoogwaardige, paraffine-ingebedde H & E-sectie van een membraan te produceren die oorspronkelijk als een hele berg werd voorbereid. In vergelijking met een weefsel dat opzettelijk was voorbereid voor H & E sectie, vereist de hele berg extra voorbereiding op het verwijderen en verwerken van weefsels. Deze methode wordt echter beschouwd als goedkoop, aangezien het gebruikelijke laboratoriumreagentia en kleine extra tijd nodig heeft. Als resultaat kan deze methode onschatbare informatie verstrekken over hoe chemische en milieublootstelling de normale ontwikkeling van de borst verandert, evenals veranderingen die optreden als gevolg van genetische wijzigingen weergeven.
Inleiding
De mammary whole mountis is een nuttige en goedkope methode geïmplementeerd in veel ratten- en muisstudies om zowel normale als chemisch geïnduceerde, abnormale ontwikkeling te begrijpen. In het algemeen zal een membraan die op verschillende stadia wordt verzameld tijdens het ontwikkelen van knaagdieren (dat wil zeggen adolescentie, puberteit, midden- tot late-zwangerschap en invasiefase) morfologische veranderingen in weefsel- en cellulaire architectuur beïnvloeden, beïnvloed door paracrine, endocriene en autocrine factoren 1 . In de verouderende rat worden de epitheliale en stromale delen van de klier steeds dichter, waardoor de mor....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierengebruik en procedures voor deze studie werden goedgekeurd door het NIEHS Laboratory Animal
Zorg- en Gebruikskomitee en in een Vereniging voor Beoordeling en Akkreditering van
Laboratorium dierenzorg geaccrediteerde faciliteit.
1. Mammary Whole Mount Preparation 2 , 3 , 6 , 7
- Verwijder de ingewanden van de ingewanden van de ene kant van een niet-zwangere CD-1 vrouwelijke muis, zoals beschreven in referentie 3 , en plaats ze op een elektrostatisch geladen dia.
- Bed....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Deze methode is effectief om te helpen bij diagnoses die anders zouden zijn gemist als de originele contralaterale H & E sectie van het mammary pad geen histologische veranderingen vertoonde. Het resultaat is echter alleen nuttig als u tijdens de eerste voorbereiding van de volledige berging zorgvuldig gebruikt, evenals tijdens de bereiding van het weefsel voor de histologische evaluatie. Paraffine inbedding zorgt voor bescherming en zal helpen om het weefsel te behouden voor toekoms.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De volledige membraan van de borstklier is een krachtig hulpmiddel dat kan worden gebruikt om de normale ontwikkeling van de borstvoeding en morfologische veranderingen te illustreren die kunnen optreden en voortzetten na blootstelling aan chemicaliën, waaronder endocriene verstoringen. Wanneer een hele berg- en H & E-sectie van hetzelfde dier samen worden beoordeeld, kunnen ze een nauwkeurige visuele snapshot van vroege veranderingen verschaffen, die in een ziekere toestand kunnen komen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen tegenstrijdige belangen om te verklaren in verband met het onderzoek, auteurschap en / of publicatie van dit artikel.
Dankbetuigingen
De auteurs zouden Pam Ovwigho, Tenette Jones en Natasha Clayton, NIEHS, willen erkennen voor hun technische expertise en ondersteuning bij dit project.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Xyleen | Sigma-Aldrich | 214736 | |
| Permount | Thermo Fisher Scientific | SP15-100 | montage media voor coverslips van gehele preparaten en H&E secties |
| Leica geautomatiseerde processor | Leica Biosystems | Model # ST5020 | |
| HM 355S automatisch microtoom | Thermo Fisher Scientific | 905200 | |
| Paraffine | Leica Biosystems | EM-400 | |
| Superfrost plus microscoopglaasjes | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS-001 | elektrostatisch geladen |
| Fisher Finest 24x60x1 | Thermo Fisher Scientific | 12-548-5P | coverslips |
| Varistain Gemini ES automatische glasjeskleuring | Thermo Fisher Scientific | A78000014 | |
| Sta-On | Leica Biosystems | 3803107 | vloeibaar kleefmiddel; gebruikt in waterbad bij het doorsnijden |
| Gemodificeerd Harris Hematoxyline 72711 | Richard-Allan Scientific (onderdeel van Thermo Scientific) | 72711 | |
| Eosine | Leica Biosystems | 3801600 | |
| Lithiumcarbonaat | SkyTech Laboratories | LCQ500 | |
| IJsazijn | Thermo Fisher Scientific | A38-500 | nodig voor Carnoy's fixeermiddel |
| Chloroform | Macron Fine Chemicals | 4440-04 | nodig voor Carnoy's fixeermiddel |
| 100% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505001050000 | nodig voor Carnoy's fixeermiddel en het wassen van glasjes |
| 95% Ethanol | The Warner Graham Company | 6505011137320190 | |
| Carmine Alum | Sigma-Aldrich | C1022-25G | |
| Aluminiumkaliumsulfaat dodecahydraat, Sigma Ultra | Sigma-Aldrich | A7210-500G | |
| Automatiseringswasbuffer, 20X | Biocare Medical | TWB945 |
Referenties
- Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations. Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).
- Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
