Noninvasive bemonstering van Mucosal voering vloeistof voor de kwantificering van In Vivo bovenste luchtwegen immuun-bemiddelaar niveaus

Samenvatting

Dit protocol beschrijft een noninvasive techniek voor de bemonstering van ongestoord mucosal voering vloeistof uit de bovenste luchtwegen. Het kan worden gebruikt voor het uitvoeren van de kwantificering van in vivo niveaus van proteïne bemiddelaars, zoals cytokines en chemokines, bij patiënten van alle leeftijden.

Samenvatting

Dit protocol beschrijft noninvasive bemonstering van ongestoord bovenste luchtwegen mucosal voering vloeistof. Het geeft ook de extractie procedure gebruikt voorafgaand aan de analyse van immuun bemiddelaars in vloeibare eluaten voor de studie van de actuele immuun handtekening airway, zonder de behoefte aan stimulatie-procedures (vaak gebruikt door andere technieken). De mucosal voering vloeistof wordt bemonsterd op een strook van filtreerpapier geplaatst op het voorste deel van het inferieur turbinate en links voor 2 min van absorptie. Analyten worden geëlueerd van de papieren filters, en de uitgepakte eiwit gebaseerde eluaten worden geanalyseerd door een electrochemiluminescence gebaseerde immunoassay, waardoor voor de kwantificering van de hoge gevoeligheid van laag - en hoog - niveau analyten in hetzelfde monster. Wij de niveaus in vivo 20 voorgeselecteerde immuun bemiddelaars aan specifieke immuun signalering trajecten in de mucosa van de bovenste luchtwegen gerelateerde gemeten, maar de techniek is niet beperkt tot die specifieke deelvenster of bemonstering site. De techniek werd voor het eerst geïmplementeerd in de 7-jarige kinderen van de prospectieve Studies van Kopenhagen op astma in jeugd₂₀₀₀ (COPSAC₂₀₀₀) cohort met allergische rhinitis. Daarna werd het gebruikt in de lengterichting COPSAC₂₀₁₀ geboortecohort, bemonsterd op 1 maand, 2 jaar en 6 jaar oud en in gevallen van acute respiratoire symptomen. Wij met succes verkregen en monsters van 620 (89%) van 700 kinderen van 1-maand-oude geanalyseerd; een paar monsters waren onder de detectiegrens van de assay (gerapporteerd als de mediaan (inter kwartiel bereik (IQR)). Het aantal monsters onder de detectiegrens (d.w.z. van 0 tot het punt van de reeks voor de ondergrens voor detectie) voor elke bemiddelaar was 29 (7.25-119,5). Deze techniek mogelijk maakt van de kwantificering van de in vivo airway mucosal immune profiel vanaf de geboorte, overlangs kan worden toegepast, en kan worden toegepast op studies over het effect van genetica en milieu posities van jeugd, pathofysiologie, endotyping, en monitoring van aandoeningen van de luchtwegen, en ontwikkeling en evaluatie van nieuwe therapieën.

Inleiding

De vloeistof van de mucosal voering van de neus maakt het vloeibare deel van het systeem van de bovenste luchtwegen. Het bestaat uit een complexe matrix van bemiddelaars/mediators afgeleid van het samenspel tussen het epithelium en de immuuncellen die deel van de eerste lijn van verdediging uitmaken tegen invasie van micro-organismen. De nasale mucosa is gemakkelijk bereikbaar en er is een sterke functionele en immunologische relatie tussen de neus en de bronchiën¹. Dit compartiment is van bijzonder belang met betrekking tot ziekten van de luchtwegen die in de kindertijd, zoals astma en allergische rhinitis, maar ook aan een aantal andere respi....

Protocol

De studies werden uitgevoerd overeenkomstig de leidende beginselen van de verklaring van Helsinki. Goedkeuringen van de ethische commissie voor Kopenhagen (KF 01-289/96 COPSAC₂₀₀₀ ) en H-B-2008-093 voor COPSAC₂₀₁₀en het Deense Agentschap voor de bescherming van de gegevens werden verkregen en schriftelijke geïnformeerde toestemming werd verkregen van beide ouders van elk onderwerp vóór inschrijving.

1. experimentele opstelling

1. Gebruik van vellen filtreerpapier (vezelig gehydroxyleerde-polyester vellen, zie de Tabel van materialen)^6,7.
   1. Knip str....

Resultaten

Basiskenmerken van de immuunprofielen van de luchtwegen:
Volledige gegevens over de niveaus van immuunmediatoren in het slijmvlies van de bovenste luchtwegen op de leeftijd van 1 maand werden verkregen bij 620 (89%) van de 700 kinderen die deelnamen aan de COPSAC.₂₀₁₀ cohort. Tien pasgeborenen werden geïncludeerd voordat de techniek was vastgesteld, en 19 waren niet aanwezig bij het bezoek na 1 maand. Daarnaast werden 47 monsters uitgesloten omdat deze ware.......

Discussie

Met de techniek die hier gepresenteerd, konden we om te bepalen van het in vivo Opper-airway mucosal immune profiel bij kinderen vanaf zo spoedig 1 maand oud, die niet eerder is gebeurd. We hebben vastgesteld dat aanwezigheid van specifieke airway bacteriën en picornaviruses^7,11, evenals andere pre en perinatale posities, werden weerspiegeld in de luchtweg immuun Profiel van de pasgeborenen. Bovendien, we deze airway immuun profielgegevens gebruikt bij h.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Fibrous hydroxylatedpolyester sheets	Accuwik Ultra	SPR0730	Filterpapier
Milliplex Assay Buffer	Millipore	L-AB	Buffer
Low-protein binding storage plates	Thermo Scientific	CLS8161	Platen
Protease Inhibitor	Roche	11873580001	Complete EDTA-vrije protease-remmercocktail
Reader of multi-spot plates	Mesoscale	NA	Sector imager 6000
Assays	Mesoscale		Human 10-plex TH1/TH2 cytokine assay en 9-plex chemokine assay, en singleplex IL-17A, TGF-β1en TSLP. Een beschrijving is online te vinden op www.mesoscale.com