Methodenartikel
* These authors contributed equally
De gepresenteerde protocollen beschrijven het uitvoeren van een hemagglutination inhibitie-test om te kwantificeren van influenza-specifieke antilichamen titers van serummonsters van influenza vaccinontvangers. De eerste bepaling bepaalt optimale virusantigeen concentraties door hemagglutination. De tweede test kwantificeert influenza-specifieke antilichamen titers door inhibitie van de hemagglutination.
Antilichamen titers worden vaak gebruikt als surrogaat markers voor serologische bescherming tegen influenza en andere ziekteverwekkers. Gedetailleerde kennis van de productie van het antilichaam pre-en post vaccinatie is vereist voor het begrijpen van de vaccin-geïnduceerde immuniteit. Dit artikel beschrijft een betrouwbaar punt-voor-punt protocol om te bepalen van influenza-specifieke antilichamen titers. Het eerste protocol beschrijft een methode om op te geven van de bedragen van de antigeen vereist voor hemagglutination, die standaardiseert de factor van de concentraties voor latere gebruik in het tweede protocol (hemagglutination assay, HA assay). Het tweede protocol beschrijft de kwantificering van influenza-specifieke antilichamen titers tegen verschillende virale stammen met behulp van een seriële verdunning van menselijk serum of cel cultuur supernatant (hemagglutination inhibitie assay, HI assay).
Als een toegepaste voorbeeld tonen wij de antistofrespons van een gezonde cohort, waaraan een driewaardig geïnactiveerd influenzavaccin aan te leggen. Bovendien, de Kruisallergie tussen de verschillende influenzavirussen wordt weergegeven en methoden om te minimaliseren Kruisallergie met behulp van verschillende soorten dierlijke rode bloedcellen (RBC) worden uitgelegd. De discussie benadrukt de voordelen en nadelen van de gepresenteerde tests en hoe de bepaling van influenza-specifieke antilichamen titers kan de verbetering van het inzicht van de vaccin-gerelateerde immuniteit.
Infectie met influenzavirus wordt geassocieerd met aanzienlijke morbiditeit, mortaliteit en hoge kosten van de gezondheidszorg1,,2,,3,4. Met name lopen ouderen, pasgeborenen, zwangere vrouwen en patiënten met chronische ziekte risico voor meer ernstige klinische resultaten. Daarom is vaccinatie tegen circulerende influenzastammen virus de primaire maatregel tot vermindering van de ziektelast in deze risicovolle populaties. De toename van de individuele immune reactie na vaccinatie, bijvoorbeeld, griep-specifieke antilichamen boven e....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De studie protocollen werden goedgekeurd door de lokale ethische review board (www.EKNZ.ch) en geïnformeerde toestemming is verkregen van alle deelnemers.
1. serum collectie
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Pre-en post vaccinatie geïnduceerde antistofrespons tegen Influenza A H3N2
De vaccin-geïnduceerde antilichaamrespons in 26 gezonde vrijwilligers die een geïnactiveerd driewaardig subeenheid influenzavaccin aan te leggen met Influenza A/H1N1/Californië/2009, A/H3N2/Texas/2012 en B/Massachusetts/02/2012 voorafgaand aan de 2014 ontvangen evalueerden / 2015 griep seizoen. Figuur 6 ziet u een representatief voorbeeld van 2 vaccinontvangers. Int.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Kwantificering van vóór en na vaccinatie influenza virus specifieke antilichamen titers is een belangrijk instrument voor vaccin studies nodig. Op basis van de surrogaat maatregelen ter bescherming tegen virusbesmetting, zoals seroprotection (> 1:40) of seroconversie (4-fold titer toename), vaccinatie strategieën kunnen worden geoptimaliseerd9. Met de meegeleverde protocollen kunt bepalen: (i) het hemagglutination potentieel van een bepaald virus, en (ii) de antilichamen titers voor een virus van .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
A.E. werd ondersteund door een onderzoek geeft vanuit de "SNSF Ambizione Score"-programma (PZ00P3_154709), "Forschungsfond, Förderung strategischer Projekte" Universiteit van Bazel, Basel van Stiftungsinfektionskrankheiten en Bangeter Rhyner Stiftung. L.K. werd gesteund door een subsidie van de Technische Universiteit van Graz, Oostenrijk. J.L. erkent ondersteuning door een iPhD fellowship van het initiatief van de SystemsX.ch in systemen biologie programma (9th oproep).
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 25 ml Disposable Multichannel Pipette Reservoirs | Integra | 4312 | |
| 8-well PCR tubes | Brand GMBH | 781332 | Voor serum aliquots |
| 96-well microtiter plate, U-shaped | TPP | 92097 | Voor HI-test bij gebruik van zoogdier-RBC's |
| 96-well microtiter plate, V-shaped | Corning Costar | 3897 | Voor HI-test bij gebruik van vogel-RBC's |
| Aqua ad iniect. Steril | Bichsel AG | 1000004 | Voor het bereiden van influenza-antigen en cholera filtrate-oplossingen |
| Chicken RBC (10%) | Cedarlane | CLC8800 | 10% suspensie van kippenrode bloedcellen in Alsever's oplossing |
| Cholera filtrate | Sigma-Aldrich | C8772 | Gebruikt als receptor vernietigend enzym (RDE) |
| Dulbecco's PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Voor het verdunnen van de serummonsters, RBC's en antigenen |
| Eppendorf Multichannel pipette, 12-channel, 10-100 µl | Sigma-Aldrich | Z683949 | |
| Eppendorf Multichannel pipette, 8-channel, 10-100 µl | Sigma-Aldrich | Z683930 | |
| Guinea Pig RBC (10%) | Cedarlane | CLC1800 | 10% suspensie van caviarode bloedcellen in Alsever's oplossing |
| Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum | NIBSC | 14/134 | Gebruikt als positieve controle bij de HI-test |
| Influenza Anti-A/Switzerland/9715293/2013-like HA serum | NIBSC | 14/272 | Gebruikt als positieve controle bij de HI-test |
| Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum | NIBSC | 13/178 | Gebruikt als positieve controle bij de HI-test |
| Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum | NIBSC | 13/254 | Gebruikt als positieve controle bij de HI-test |
| Influenza Anti-B/Massachusetts/02/2012 HA serum | NIBSC | 13/182 | Gebruikt als positieve controle bij de HI-test |
| Influenza antigen A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) | NIBSC | 12/168 | Ingeactiveerd, gedeeltelijk gezuiverd A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) virus (ca. 46µgHA/ml) |
| Influenza antigen A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) | NIBSC | 14/254 | Ingeactiveerd, gedeeltelijk gezuiverd A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) virus (ca. 55µgHA/ml) |
| Influenza antigen A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) | NIBSC | 13/112 | Ingeactiveerd, gedeeltelijk gezuiverd A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) virus (ca. 74µgHA/ml) |
| Influenza antigen B/Brisbane/60/2008 | NIBSC | 13/234 | Ingeactiveerd, gedeeltelijk gezuiverd B/Brisbane/60/2008 virus (ca. 42µgHA/ml) |
| Influenza antigen B/Massachusetts/02/2012 | NIBSC | 13/134 | Ingeactiveerd, gedeeltelijk gezuiverd B/Massachusetts/02/2012 virus (ca. 35µgHA/ml) |
| Serum-Tubes | S-Monovette, Sardstedt | 01.1601.100 | Voor serumextractie met stollingsactivator |
| Single Donor Human RBC, Type 0 | Innovative Research | IPLA-WB3 | Suspensie van enkele donor menselijke rode bloedcellen in Alsever's oplossing (ca. 26%) |
| Turkey RBC (10%) | Cedarlane | CLC1180 | 10% suspensie van kalkoenrode bloedcellen in Alsever's oplossing |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Gibco |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen