In deze studie wordt de methode gepresenteerd over het uitvoeren van multi-site in vivo elektrofysiologische opnamen van de hyperdirecte weg onder urethaananesthesie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
In deze studie wordt de methode gepresenteerd over het uitvoeren van multi-site in vivo elektrofysiologische opnamen van de hyperdirecte weg onder urethaananesthesie.
Convergeert bewijs blijkt dat veel neuropsychiatrische ziekten moeten worden begrepen als aandoeningen van grootschalige neuronale netwerken. Om de pathofysiologische basis van deze ziekten beter te begrijpen, is het noodzakelijk om precies te karakteriseren op welke wijze de verwerking van informatie verstoord raakt tussen de verschillende neuronale delen van het circuit. Met behulp van extracellulaire in vivo elektrofysiologische opnamen is het mogelijk om neuronale activiteit nauwkeurig te definiëren binnen een neuronaal netwerk. De toepassing van deze methode heeft meerdere voordelen ten opzichte van alternatieve technieken, zoals functionele magnetische resonantiebeeldvorming en calciumbeeldvorming, omdat het een unieke temporale en ruimtelijke resolutie mogelijk maakt en niet vertrouwt op genetisch gemanipuleerde organismen. Het gebruik van extracellulaire in vivo opnames is echter beperkt omdat het een invasieve techniek is die niet universeel toegepast kan worden. In dit artikel wordt een eenvoudige en makkelijk te gebruiken methode gepresenteerd wMet welke het mogelijk is om extracellulaire potenties tegelijkertijd op te nemen, zoals lokale veldpotenties en multiunitactiviteit op meerdere sites van een netwerk. Het is gedetailleerd hoe een precieze targeting van subcortische kernen kan worden bereikt met behulp van een combinatie van stereotactische chirurgie en online analyse van multi-unit opnames. Zo wordt aangetoond hoe een compleet netwerk, zoals de hyperdirecte cortico-basale ganglia-lus, kan worden onderzocht in verdovende dieren in vivo .
Recente cumulatieve bewijzen over verschillende neuropsychiatrische stoornissen zoals de ziekte van Parkinson en schizofrenie stellen sterk voor dat hun pathofysiologie is gebaseerd op een kritische disfunctie van verlengde neuronale circuits die vaak corticale en subcortische structuren 1 , 2 , 3 betreffen . Volgens deze theorie ontstaan de klinische manifestaties van de ziekten als gevolg van een verminderde informatieverwerkingscapaciteit van een netwerk van cellen in plaats van enkele cellen of specifieke neuronale elementen 1 , 2 , 3 . Om het begrip van deze complexe groep neuropsychiatrische ziekten te vergroten en nieuwe behandelingsopties te vinden, is het verplicht om de neuronale dynamiek van deze gedwongen netwerken in menselijke patiënten en in diermodellen in detail te karakteriseren. Een uitstekendMethode om grootschalige netwerken in levende onderwerpen te bestuderen, is elektrofysiologische opnames van extracellulaire potenties 4 . Met behulp van deze methode is het mogelijk om lokale veldpotentialen (LFP's) gelijktijdig te beoordelen, die voornamelijk de temporale summatie vormen van excitatoire en remmende postsynaptische stromingen en multi-unit activiteit (MUA), die wordt gegenereerd door presynaptische mogelijkheden 5 . De opname van extracellulaire potenties heeft meerdere voordelen ten opzichte van alternatieve methoden om netwerken te bestuderen, bijvoorbeeld functionele magnetische resonantiebeeldvorming en calciumbeeldvorming, omdat het een hogere temporale en ruimtelijke resolutie biedt en omdat het niet afhankelijk is van genetisch gemanipuleerde organismen 5 . Het gebruik van extracellulaire in vivo opnames is echter beperkt omdat het een invasieve techniek is die niet universeel toegepast kan worden.
In vivo elektrofysiologische recOrdeningen kunnen zowel wakker als in verdovende dieren worden uitgevoerd 6 . Beide methoden worden gepaard gegaan met specifieke voor- en nadelen. Studies in wakker dieren maken het mogelijk om hersensignalen op te nemen tijdens de uitvoering van bepaalde gedragstaken, maar zijn gevoelig voor bewegingsgerelateerde en andere artefacten 7 , 8 . Opnames in verdovende dieren daarentegen bieden de mogelijkheid om LFP's en MUA te beoordelen met een minimum van artefacten bij zeer gedefinieerde corticale synchronisatiestaten, maar de resultaten verschillen ook tot op zekere hoogte in wat wakker is in vakken 9 , 10 , 11 .
In de afgelopen jaren is aangetoond dat de bemonstering van LFP's bijzonder nuttig is om pathologische veranderingen van netwerkactiviteit te definiëren. Een prominente voorbeeld hiervan is onderzoek naar de pathofysiologie van PD in de menselijke patiëntS en diermodellen van de ziekte, waaruit bleek dat verbeterde bètoscillaties in de cortico-basale ganglia-lus gekoppeld zijn aan parkinsonische motorische symptomen 12 , 13 . Als gevolg van deze onderzoekslijn wordt momenteel onderzocht of bèta-oscillaties gebruikt kunnen worden als een online-feedback biomarker voor de gesloten-loop diepe hersenstimulatie 14 , 15 .
In de onderhavige studie wordt een gedetailleerde beschrijving gegeven van acute multi-site in vivo elektrofysiologische opnames van LFP's en MUA bij ratten die met urethaan zijn verdoofd. Er wordt aangetoond hoe een volledig netwerk, zoals de hyperdirecte cortico-basale ganglia-route, elektrofysiologisch kan worden gekenmerkt door gebruik te maken van standaard en aangepaste elektroden en hoe deze elektroden kunnen worden gebouwd. Het wordt vooral benadrukt hoe een nauwkeurige targeting van basale ganglia kernen kan worden bereikt door coMbining stereotactische operatie samen met de online registratie van MUA's.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Duitse dierenwelzijnswet (laatst gewijzigd in 2014) en Europese regelgeving (2010/63 / EU). Experimenten werden goedgekeurd door de lokale dierenwelzijnsautoriteit (LaGeSo, Berlijn) en conform de lokale afdeling en internationale richtlijnen.
OPMERKING: In de gepresenteerde methode worden twee modellen van elektroden gebruikt om te registreren vanuit de hyperdirecte cortico-basale ganglia-route die de primaire motorcortex (M1) verbindt met de subthalamische kern (STN) en het substantia nigra pars reticulate (SNr). Voor epiduraal elektrocorticogram (ECoG) worden opnamen van de M1 op maat gemaakte laagimpedantie Ag / AgCl elektroden gebruikt. De opnames van de STN en SNr worden uitgevoerd met in de handel verkrijgbare hoogimpedantie wolframelektroden.
1. Constructie van Epidurale Elektroden Epidurale Ag / AgCl
2. Bevestigen van de elektroden aan een stereotaxische houder
OPMERKING: Gebruik tegelijkertijd MUA en LFP's, gebruik wolfraam microwire elektroden met een impedantie van 1,5 MΩ. Als de focus van de opnames is op hoge kwaliteit opnames van eenheden, kies dan microwire elektroden met een hogere impedantie (> 5 MΩ). Als het doel van de studie uitsluitend gericht is op LFP's, kunnen elektroden met lagere impedanties aanvaardbaar zijn. Voor kleine structuren, waarvoor dorsoventrale stereotaxische aanpassingen vaak nodig zijn, gebruik dan elektroden met een geschikte dorsoventrale tipscheiding (in dit geval 250 μm). Bovendien biedt dit het voordeel van een meer lokale referentieelektrode, indien nodig. De stereotaxische coördinaten worden altijd gemeten van de laagste elektrode en aOpnieuw berekend op basis van de bregma.
3. Chirurgie
4. Elektrofysiologische Mapping en opnamen
OPMERKING: Voor deze stap is een Faraday kooi en een multi-kanaals elektrofysiologisch opnamesysteem met opnameprogramma geschikt voor online-filtering en online spikesortering nodig. Gebruik bij voorkeur een systeem dat werkt met een voorversterker die zich dicht bij het hoofd van de dieren bevindt om elektrisch geluid en artefacten tot een absoluut minimum te houden. Naast de wolfraam microwire-elektroden zijn ten minste één epidurale en één referentieelektrode nodig om opnames van de hyperdirecte weg te kunnen uitvoeren. Het is aan te bevelen om epidurale en referentie te plaatsenE elektroden paarsgewijs zonder elkaar aan te raken, dit helpt bij storingen en zorgt voor verschillende soorten referenties in data analyse.
5. Einde van het experiment
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Met de hierin gebruikte opnameelektroden is het mogelijk om LFP's uit de primaire motorcortex, de subthalamische kern en de substantia nigra pars reticulata en MUA van de STN en SNr te proeven. Aanvankelijk worden LFP's en multi-unit activiteit samen in een breedband signaal opgenomen. Daarna worden LFP's en MUA's gescheiden door bandpassfilters (0,05-250 Hz voor LFP's en 300-4000 Hz voor MUA).
Voor de juis...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
In de onderhavige studie wordt aangetoond hoe u extracellulaire elektrofysiologische signalen tegelijkertijd op meerdere locaties van een bepaald netwerk opneemt met behulp van het hyperdirect cortico-basale ganglia-pad dat de M1 verbindt met de STN en SNr bij knaagdieren.
Een kritische stap in de opname van kleine subcortische structuren zoals de STN is de nauwkeurige begeleiding van de opnameelektroden in het doel. In de gepresenteerde methode zorgt er voor twee belangrijke stappen voor ee...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
Wij danken de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, om onze studie te financieren.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Ag/AgCl aangepaste epidurale elektroden | Goodfellow GmbH D-61213 Bad Nauheim, Duitsland info@goodfellow.com | Product-ID AG005127 voor 99,99% zilverdraad | Ag/AgCl elektroden zorgen voor een betere signaalkwaliteit, maar mogen alleen worden gebruikt in acute experimenten. Mogelijke vervanging: Roestvrijstalen elektroden |
| Stereotaxische houder met acrylblok | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, VS | Product ID Model 1770 Standard Electrode Holder | Zorg ervoor dat het acrylblok uitsparingen heeft die geschikt zijn voor de elektrodeopstelling voor het gewenste doel. Acrylblokken kunnen gemakkelijk worden aangepast met een vijl om de gewenste configuratie te verkrijgen. Mogelijke vervanging: Zelfgebouwde elektrodehouders |
| Wolfraam microdraadelektroden 1,5 MΩ impedantie | Microprobes.com 18247-D Flower Hill Way Gaithersburg, Maryland, 20879 VS | Product-ID WE3ST31.5A5-250um | De 1,5 MΩ is noodzakelijk om MUA en LFP tegelijkertijd op te nemen. Mogelijke vervanging: Microelektroden van verschillende materialen kunnen worden gebruikt. De elektroden moeten recht, robuust en zo dun mogelijk zijn. |
| Rat uitlijningsgereedschap | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, VS | Product ID Model 944 Rat Alignment Tool | Maakt de exacte oriëntatie van de hersenen mogelijk om overeen te komen met stereotaxische atlassen. Mogelijke vervanging: Stereotaxische houder met een canule |
| Tweekomponens tandheelkundig acryl | Associated Dental Products Ltd. Kemdent Works, Purton, Swindon Wiltshire, SN5 4HT, Verenigd Koninkrijk | Simplex Rapid Powder Clear 225g, Productcode: ACR803; Simplex Rapid Liquid 150ml, Productcode: ACR920 | Afhankelijk van de gebruikte elektroden kan superlijm een eenvoudige alternatief zijn, als de elektroden klein en licht van gewicht zijn. Mogelijke vervanging: Superlijm (Cyanacrylaat-gebaseerd) |
| Faraday kooi | Zelfbouw | Een goed gevormde Faraday-kooi zal de beste bescherming zijn tegen elektromagnetische artefacten, maar alles wat kan worden gevormd in een doosvorm of kan worden toegepast op een frame en is gemaakt van geleidend materiaal kan helpen. Mogelijke vervanging: Aluminiumfolie of kopergaas | |
| Elektrofysiologisch setup met opnamesoftware en online spike-sorting mogelijkheden | OmniPlex® Neural Data Acquisition System Plexon Inc 6500 Greenville Avenue, Suite 700 Dallas, Texas 75206 VS | Offline sorteersoftware is een potentiële alternatief, meerdere scripts en softwares zijn gratis te vinden in de open source-gemeenschap. |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.