Een protocol voor de oprichting van een genetisch gemanipuleerde muismodel van colorectale kanker door middel van segmentale adeno-cre infectie en zijn bewaking via hoge resolutie colonoscopie wordt gepresenteerd.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een genetisch ontwikkeld muis model van sporadische colorectale kanker
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Ondanks de voordelen van makkelijke toepasselijkheid en kosteneffectiviteit, hebben muskelkankermuizenmodellen op basis van tumorcelinjectie ernstige beperkingen en worden de tumorbiologie en tumorcel-verspreiding niet nauwkeurig gesimuleerd. Genetisch gemanipuleerde muismodellen zijn geïntroduceerd om deze beperkingen te overwinnen; Dergelijke modellen zijn echter technisch veeleisend, met name in grote organen zoals de dikke darm waarin slechts een enkele tumor gewenst is.
Als gevolg daarvan werd een immunocompetent, genetisch gemanipuleerd muismodel van colorectale kanker ontwikkeld die zeer uniforme tumoren ontwikkelt en kan gebruikt worden voor tumorbiologie studies en therapeutische proeven. Tumorontwikkeling wordt geïnitieerd door chirurgische, segmentale infectie van de distale dikke darm met adeno-cre-virus in samengestelde voorwaardelijke mutante muizen. De tumoren kunnen gemakkelijk worden gedetecteerd en gecontroleerd via colonoscopie. Hier beschrijven we de chirurgische techniek van segmentale adeno-cre infectie vanDe dikke darm, het bewaken van de tumor via hoge resolutie colonoscopie en presenteren de resulterende colorectale tumoren.
Inleiding
Colorectale kanker (CRC) blijft een van de belangrijkste oorzaken van kankerverwante dood in westerse landen. 1 Terwijl de prognose van patiënten met vroegtijdige ziekte goed is, worden veel tumoren gediagnosticeerd in latere fasen, waarbij de prognose ondanks talrijke behandelingsopties beperkt is. 2 , 3 , 4 , 5
De meerderheid van de huidige muismodellen van CRC zijn gebaseerd op de implantatie van tumorcellen afgeleid van cellijnen of patiënttumoren in immunodeficiënte muizen. 6 , 7 , 8 Dit leidt tot lokale en, afhankelijk van de injectieplaats en de tumorcellen die worden gebruikt voor injectie, soms metastatische tumoren. 9 , 10 Maar de resulterende xenograftmodellen hebben majoBeperkingen. Ze moeten worden vastgesteld in immunodeficiënte muizen, waardoor de complexe interactie tussen de tumor en het immuunsysteem van de gastheer wordt opgeheven. Bovendien, aangezien het tumorstroma afgeleid is van gastheercellen, is de interactie tussen humane tumorparenchyma en muizenstroma defect en derhalve niet representatief voor de ziekte. Deze tekortkomingen kunnen vermeden worden door het gebruik van muizencellijnen voor injectie. Echter, er zijn maar weinig muizen CRC-cellijnen beschikbaar en, vergelijkbaar met de meeste beschikbare humane CRC-cellijnen, zijn monoklonale en zeer anaplastische. 11 Kortom, de meeste beschikbare CRC-muismodellen zijn zeer kunstmatig en niet volledig representatief voor de menselijke ziekte.
Genetisch gemanipuleerde muismodellen (GEMM's) van CRC kunnen deze nadelen vermijden aangezien zij echte muistumoren bevatten die worden gecreëerd via inductie van belangrijke mutaties van CRC in de dikke darm. 12 , 13 ,14 Dit kan worden bereikt door de activatie van conditional (floxed) germline mutaties door cre recombinase binnen de colorectale mucosa. Terwijl in GEMM's van veel andere tumorentiteiten kiemlijn (induceerbare) cre-expressie wordt aangedreven door weefselspecifieke promotors, kan germline cre niet in de dikke darm worden gebruikt, aangezien dit leidt tot een groot aantal adenomen in de dikke darm waardoor de dood door goedaardige tumorbelasting bij Een zeer jonge leeftijd. Daarom wordt in het hier beschreven model een adenovirale vectoruitdrukkende cre gebruikt om een kort darmsegment te infecteren. Dit leidt tot de inductie van tumorigenese binnen dit segment van de slijmvliezen op een tijdstip bepaald door de onderzoeker, waardoor adenomen uiteindelijk naar invasieve en metastatische carcinoom gaan. De tumoren zijn echte muistumoren, groeien in een intacte microomgeving en kunnen daarom het geheel van colorectale oncogenese simuleren, waaronder tumor-gastheerinteractie en de metastatische cascade. Dit model isDaarom een aantrekkelijk platform voor studies van kankerbiologie en preklinische therapeutische proeven.
Een belangrijk nadeel van genetisch gemanipuleerde muismodellen van CRC is hun technische complexiteit. Lokale bezorging met behulp van rectale adeno-cre enemas in muizen die gevlochten Apc allelen heeft, is eerder beschreven; Echter, de incidentie, multipliciteit en plaats van de darm tumoren kunnen zeer variabel zijn met deze techniek. 15 Daarom is de techniek om de adeno-cre infectie te beperken door chirurgische klemmen van het te induceren segment te ontwikkelen. 13 Wij hebben deze procedure aangepast om het dierenwelzijn te verbeteren, evenals de sterfte en het aantal resulterende tumoren te verminderen. Met dit protocol moeten alle laboratoria met ervaring in kleine knaagdierchirurgie het model kunnen reproduceren en tumoren produceren die zeer reproduceerbaar en gemakkelijk toegankelijk zijn voor colonoscopie. Afhankelijk van de voorwaardelijke mUitingen die worden gebruikt voor tumorigenese, kan het volledige spectrum van adenoom, invasieve carcinoom en metastasen waargenomen worden. Aangezien de tumoren zich in de distale dikke darm bevinden, is seriële endoscopische beoordeling eenvoudig in dit model mogelijk.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De hier gepresenteerde dierproeven werden onafhankelijk beoordeeld en goedgekeurd door een institutioneel en een overheidsdier voor dierenwelzijn en gebruik en werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Federatie van Laboratorium Diervoederverenigingen (FELASA). Alle mogelijke maatregelen werden genomen om het lijden te verminderen, met inbegrip van verdoving en analgesie of, indien nodig, vroegtijdige euthanasie.
1. Lokale tumorinductie via chirurgische adeno-cre infectie
- Voorbereiding van dieren voor operatie
OPMERKING: Vrijwel elke voorwaardelijke ("floxed") mutatie kan worden geïnduceerd via de hier beschreven methode. Het gebruik van mutaties in genen die relevant zijn voor colorectale kanker zoals Apc, Kras of Tp53 wordt aanbevolen. De efficiëntie van cre-recombinatie is afhankelijk van de grootte van het te elimineren construct. Grote gevlochten sequenties worden minder efficiënt gesneden. De recombinatie van alle allelen moet door de pc in de tumoren worden bevestigdR.- Voor de ontwikkeling van colorectale tumoren, gebruik een kruis van de volgende voorwaardelijke allelen voor een basismodel van CRC (MGI databanknummer tussen haakjes):
Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16
Kras tm4Tyj (MGI: 2429948) 17
Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 - Als een fluorescentieverslaggever allele nodig is ( bijvoorbeeld om micrometastasen te detecteren), gebruik dan de volgende allel:
Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19
OPMERKING: Alle bovenstaande stammen zijn verkrijgbaar via de NCI Mouse Repository of het Jackson Laboratory. Geen vasten is nodig aangezien alle overgebleven fecale stoffen vóór de adenovirale infectie kunnen worden afgespoeld. Preoperatieve vasten leidt tot hogere perioperatieve sterfte en vormt enorme stress voor kleine knaagdieren. - Gebruik sevofluraan bij 3 - 3,5 vol% voor algemene verdoving. Een verlies van tHij geeft een nippelreflex aan.
- Voor de eerste incisie injecteer 0,05 mg / kg buprenorfine subcutaan.
- Bedek de ogen van de verdoofde muis met oftalmische zalf om uitdroging van de hoornvlies te vermijden.
- Plaats de muis in een rugliggende positie op een kleine tafel. Gebruik niet-traumatische kleefbandjes om de muis te beperken.
- Scheer de buik met een elektrische scheerapparaat (afzettende crème kan alternatief worden gebruikt) en desinfecteren met alcoholwatten of jodium. Gebruik de door de fabrikant aanbevolen contacttijd.
- Bedek het chirurgische veld met steriele gordijnen.
OPMERKING: Het gebruik van perioperatieve antibiotica is facultatief en onderworpen aan institutionele richtlijnen. - Gebruik steriele single-use of gesteriliseerde instrumenten voor alle chirurgische procedures.
- Voor de ontwikkeling van colorectale tumoren, gebruik een kruis van de volgende voorwaardelijke allelen voor een basismodel van CRC (MGI databanknummer tussen haakjes):
- Midlijn laparotomie en blootstelling van de dikke darm
- Gebruik een schaar (scalpels kunnen alternatief worden gebruikt) om een middelste snede te maken(~ 15 mm) van de huid op de onderbuik.
- Pak de buikspiermuskulatuur op met pincet en zorg het voorzichtig met een schaar, zodat de buikholte wordt geopend.
- Identificeer de distale dikke darm, raak het alleen met atraumatische tang. Klem de dikke darm met een delicate klem ( bijv . Een Micro Serrefine vascular clamp) ongeveer 15 mm proximaal van de anus.
OPMERKING: Speciale aandacht besteden aan de kwetsbaarheid van de dikke darm. Perforatie leidt onvermijdelijk tot peritonitis en sepsis en vereist euthanasie van het dier.
- Segmentale dikke darm infectie met Adeno-cre virus
- Breng een flexibele Teflon buis transanaal in en zorg voorzichtig totdat het de lumen-okklusie bereikt door de klem die eerder bij 15 mm van de anale rand is geplaatst. Gebruik geen overmatige kracht, omdat dit kan leiden tot perforatie.
- Verbind de buis met een 30G kanyle, verbind een standaard 1 ml spuit en spoel de coloN met normale zoutoplossing om de resterende fecale stof te evacueren. Dit kan een aantal ml zoutoplossing vereisen.
- Zodra de distale dikke darm leeg is, verwijder de buis en vervang deze met een frisse Teflonbuis en plaats deze weer direct distaal aan de klem zoals hierboven beschreven.
- Zet de dikke darm bij een tweede klem ~ 3 mm distaal aan de proximale klem ( dwz over de ingebouwde buis, ~ 12 mm van de anale rand), waardoor er een geïnfecteerd 3 mm-segment is.
OPMERKING: Voor distale occlusie van het segment hebben Fogarty-coronaire klappen zich het meest geschikt aangezien ze gegumpeerd zijn, waardoor de dikke darm dicht wordt afgesloten ondanks de intraluminale buis tussen de takken van de klem. - Gebruik een tweede spuit (standaard 1 ml met een 30G canule) om 50 tot 80 μL 0,25% Trypsin-EDTA nauwkeurig in het geklemde darmsegment te injecteren en 10 minuten te incuberen. Laat de canule en de spuit aan de Teflonbuis vastzetten om te voorkomen dat de vloeistof terug lekt.
OPMERKING: De dikke darm moet opgeblazen worden om de mucosale barrière op te breken en de crypt stamcellen te bereiken, maar niet te veel opgeblazen om perforatie van het vastgeklemde segment te vermijden. - Verwijder eerst de distale klem en vervolgens de trypsinbuis.
- Spoel de distale dikke darm met ~ 500 μL normale zoutoplossing om resterende trypsine te verwijderen.
- Plaats een nieuwe Teflonbuis, plaats de distale klem terug en plaats het darmsegment met 50 - 80 μL adenovirale oplossing (10 11 plaque-forming units (PFU) / mL in fosfaatgebufferde zoutoplossing) en incubeer gedurende 30 minuten ( Figuur 2A ).
OPMERKING: Spoel geen virale oplossing omdat contact met adeno-cre kan leiden tot tumorontwikkeling in elk weefsel van voorwaardelijke mutante muizen. - Verwijder de klemmen en de buis.
- Sluiting van de buik en postoperatieve herstel
- Sluit de buikwand met 6-0 snel absorbeerbare hardloopTures ( bijvoorbeeld polydioxanon (PDS)).
- Sluit de huid met chirurgische wondklemmen.
- Plaats de muis op het verwarmingspaneel ingesteld op 38 ° C tot het volledig uit de anesthesie is hersteld.
- Geef een andere bolus van 0,05 mg / kg buprenorfine ip 12 uur na de operatie, gevolgd door extra buprenorfine bolussen om de 12 uur indien nodig.
- Monitor de muizen ten minste eenmaal per dag voor tekenen van nood als gevolg van tumorgroei.
2. Colonoscopie
OPMERKING: Afhankelijk van de gebruikte voorwaardelijke mutaties leidt adenovirale infectie tot endoscopisch zichtbare tumoren binnen 2 - 4 weken. Voer daarom de eerste postoperatieve colonoscopie 2 weken na de adenovirale inductie uit en herhaal elke 2 weken. Een commercieel verkrijgbaar systeem wordt aanbevolen voor muizen colonoscopie. 20
- Voorbereiding van dieren voor colonoscopie
OPMERKING: Geen vasten is required. Resterende fecale stof is meestal goed gevormd in de distale dikke darm en kan tijdens de colonoscopie buiten de tumor worden geduwd, waardoor het stressvolle proces van herhaalde vasten onnodig wordt.- Gebruik sevofluraan bij 3 - 3,5 vol% voor algemene verdoving. Een verlies van de teenvliesreflex geeft voldoende narkose aan.
- Bedek de ogen van de verdoofde muizen met oftalmische zalf om uitdroging van de hoornvlies te vermijden.
- Houd de muizen in een rugliggende positie op een kleine tafel.
- colonoscopie
- Plaats het bereik (diameter 1,9 mm, lengte 10 cm) in het darmkanaal door de anus en zorgvuldig insufflate lucht onder visuele controle om de dikke darm te verdelen. Maak geen lucht meer dan nodig voor het onderzoek.
OPMERKING: Voor luchtinsufflatie mag de anti-mist luchtpomp van het colonoscopiesysteem gebruikt worden. Als er geen anti-mist luchtpomp beschikbaar is, kan elke andere luchtpomp met zeer lage drukinstellingen gebruikt worden of voorafSsurized lucht met een delicate drukreductieklep. Kooldioxide (CO 2 ) leidt gemakkelijk tot acidose bij kleine knaagdieren en moet daarom vermeden worden. - Zet het bereik voorzichtig voorzichtig tot een mucosale letsel in de distale dikke darm kan worden geïdentificeerd ( Figuur 1A - 1D ).
- Bewaar endoscopische afbeeldingen voor latere evaluatie. Een endoscopisch scoringssysteem voor intraluminale tumoren is eerder beschreven. 20
- Verwijder het bereik zorgvuldig en plaats de muis op het verwarmingspaneel ingesteld op 38 ° C tot het volledig is hersteld van de verdoving.
- Plaats het bereik (diameter 1,9 mm, lengte 10 cm) in het darmkanaal door de anus en zorgvuldig insufflate lucht onder visuele controle om de dikke darm te verdelen. Maak geen lucht meer dan nodig voor het onderzoek.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Als adequaat uitgevoerd, ontwikkelen> 85% van de dieren tumoren. De sterfte van de hier beschreven chirurgische procedure is <5%, de sterfte van de colonoscopie is vrijwel niet bestaand. In de meerderheid van de muizen wordt een enkele letsel gedetecteerd; In ongeveer 30% kunnen 2 tot 3 kleine adenomen worden gedetecteerd die binnen 2 tot 3 weken na een tumorinductie door een enkele tumor worden gesmolten.
Het fenotype e...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hoewel ze over het algemeen makkelijk te genereren en te onderhouden zijn, zijn klassieke CRC-muismodellen op basis van cellijninjectie kunstmatig en kunnen ze de menselijke ziekte niet volledig herhalen. Als gevolg hiervan zijn GEMM's ontwikkeld. De eerste CRC GEMM was de Apc Min muis, die een heterozygotische null mutatie in het Apc gen heeft, waardoor de menselijke erfelijke ziekte familiale adenomatische polyposis (FAP) nabootst. 21 Apc Min muizen ontwikkelen echter ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk is gewijd aan de herinnering van professor Moritz Koch.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Reagents / consumables | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsin-EDTA (0.25%, Phenol-Red) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| Normal saline 0.9% (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Gene Transfer Vector Core University of Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL centrifuge tubes | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Eppendorf tubes 1.5 mL/ 2 mL | Sarstedt AG & Co. | 72,695,400 | |
| Petri dish PS 100/15 mm (sterile, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| 1 mL Syringe (without dead volume) - Injekt-F SOLO | Braun/neoLab | 194291661 | |
| 30G injection needle | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Analgesia / anesthesia | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG | - | |
| Medical oxygen | Air Liquide Medical GmbH | - | |
| Buprenorphine (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - ophthalmic ointment | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Table Top Research Anesthesia Machine x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical Equipment | |||
| Cellulose swabs | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Insulin syringe EMG 1 mL (with 30G cannula) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Fine Bore Tubing (bore: 0.28 mm/ diameter: 0.61mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| Iris Scissor - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Olsen-Hegar Needle Holder | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| AutoClip Kit | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (surgical suture) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Curved Micro Serrefine Vascular Clamp | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Hot Plate 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Hair shaver | Aesculap - Braun | - | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Colonoscopy | |||
| Cold Light Fountain XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Fiber Optic Light Cable | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM Three-Chip Camera Head | Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM SLII Camera Control Unit | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| 15" Flat Screen Monitor EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz |
| HOPKINS Straight Forward Telescope diameter 1.9 mm; length 10 cm autoclavable fiber optic light transmission incorporated | Karl Storz | 64301AA | |
| Protection and Examination Sheath | Karl Storz | 61029C |
Referenties
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al. Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer. World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).
- Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer. Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).
- García, S. A., et al. LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer. Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).
- van Noort, V., et al. Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling. Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).
- Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells. Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).
- Taketo, M. M., Edelmann, W. Mouse models of colon cancer. Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).
- Schölch, S., et al. Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer. Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).
- Schölch, S., et al. Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors. Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).
- Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure. Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).
- Roper, J., Hung, K. E. Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development. Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).
- Hung, K. E., et al. Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment. Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).
- Sharpless, N. E., Depinho, R. A. The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development. Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).
- Shibata, H., et al. Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene. Science. 278 (5335), 120-123 (1997).
- Kuraguchi, M., et al. Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus. PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).
- Jackson, E. L., et al. Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras. Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).
- Olive, K. P., et al. Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome. Cell. 119 (6), 847-860 (2004).
- Madisen, L., et al. A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain. Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).
- Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).
- Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse. Science. 247 (4940), 322-324 (1990).
- de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer. Cell. 82 (2), 321-330 (1995).
- Reitmair, A. H., et al. Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice. Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).
- Ayala, J. E., et al. Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice. Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).
- Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. Fasting of mice: a review. Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Meer artikelen verkennen
