Een Morfometrische en cellulaire analysemethode voor de lymfkliertest mandibulaire Condyle

Summary

Dit manuscript presenteert methoden voor het analyseren van Morfometrische en cellulaire veranderingen binnen de mandibulaire condyle van knaagdieren.

Abstract

Het kaakgewricht (TMJ)-gewricht heeft de capaciteit aan te passen aan externe prikkels, en laden van wijzigingen kan invloed hebben op de positie van condyles, alsook de structurele en cellulaire componenten van de mandibulaire Condylaire kraakbeen (MCC). Dit manuscript wordt beschreven methoden voor het analyseren van deze veranderingen en een methode voor het wijzigen van het laden van de TMJ in muizen (dat wil zeggen, druksterkte statische TMJ laden). De structurele evaluatie geïllustreerd hier is een eenvoudige Morfometrische-aanpak die gebruikt de Digimizer-software en wordt uitgevoerd in de röntgenfoto's van kleine beenderen. Bovendien, de analyse van cellulaire verandert leiden tot wijzigingen in collageen expressie, bot remodelleren, celdeling en Proteoglycaan distributie in het MCC wordt beschreven. De kwantificering van deze wijzigingen in histologische afdelingen - door het tellen van de positieve fluorescerende pixels met behulp van software en het meten van de afstand toewijzing image & gekleurd gebied met Digimizer - wordt ook aangetoond. De methoden die hier worden weergegeven zijn niet beperkt tot de lymfkliertest TMJ, maar kon worden gebruikt op de extra botten van kleine proefdieren en in andere regio's van endochondral ossificatie.

Introduction

Het TMJ is een unieke dragende gezamenlijke gelegen craniofaciale regio en van fibrokraakbeen wordt gevormd. De MCC van de TMJ is essentieel voor gemeenschappelijke functie, met inbegrip van de onbelemmerde kaak verkeer tijdens het spreken en masticating, maar het wordt meestal beïnvloed door degeneratieve ziekten, met inbegrip van artrose¹. Het TMJ heeft de capaciteit aan te passen aan externe stimuli en laden, wijzigingen leiden tot structurele en cellulaire veranderingen aan de componenten van de MCC^2,3,4,5. De dra....

Protocol

Alle dierlijke procedures afgekeurd op het institutionele dierenverzorgers Comité van het gezondheidscentrum van de Universiteit van Connecticut.

1. druksterkte statische TMJ laden: Mond opengebroken

Opmerking: Transgene muizen vier weken oude herbergen fluorescerende verslaggevers voor collageen (Col2a1XCol10a1), beschikbaar gesteld door Dr David Rowe (Universiteit van Connecticut), werden gebruikt voor de experimenten beschreven in dit manuscript (n = 8; 4 reutjes en 4 teefjes). Het Col2a1 cyaan (blauw) transgenic wordt uitgedrukt in cellen in de prehypertrophic zone van de MCC, terwijl de Col10a1 kersen (rood) c....

Results

Beschrijvende statistiek werden te onderzoeken van de verdeling van de Morfometrische metingen (mandibulaire lengte, Condylaire lengte, Condylaire breedte) en histologische analyses uitgevoerd. Resultaten werden vergeleken tussen de geladen groep (dat wil zeggen, muizen onderworpen aan druksterkte laden met de beta titanium lente) en de controlegroep (dat wil zeggen, bijpassende besturingselement muizen die niet elke procedure ontvangen). Statistisch significante verschi.......

Discussion

Dit manuscript beschreven methoden voor de meting van Morfometrische en cellulaire analyse van lymfkliertest mandibulaire condyles en kaken. De radiografische Morfometrische metingen kunnen ook worden gebruikt voor het analyseren van andere beenderen van kleine proefdieren. Bovendien, de cellulaire analyse (cel kwantificering en kraakbeen afstand mapping) zijn niet beperkt tot de knaagdieren mandibulaire condyle, maar kan worden gebruikt voor het kwantificeren van de histologische secties van talrijke weefsels.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MX20 Radiography System	Faxitron X-Ray LLC
Digimizer Image software	MedCalc Software
Shandon Cryomatrix embedding resin	Thermo Scientific	6769006
Manual microscope Axio Imager Z1	Carl Zeiss	208562
yellow fluorescent protein filter  - EYFP	Chroma Technology Corp	49003
cyan fluorescent protein filter - ECFP	Chroma Technology Corp	49001
red fluoresecent protein filter - Cy5	Chroma Technology Corp	49009
sodium acetate anhydrous	Sigma-Aldrich	S2889
sodium L-tartrate dibasic dihydrate	Sigma-Aldrich	228729
sodium nitrite	Sigma-Aldrich	237213
ELF97 substrate	Thermo Fisher Scientific	E6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit	Life Technologies	C10339	includes EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)	Thermo Scientific	D1306
Sodium phosphate dibasic	Sigma-Aldrich	S3264
Sodium phosphate monobasic	Sigma-Aldrich	71505
Toluidine Blue O	Sigma-Aldrich	T3260
Adobe Photoshop	Adobe Systems Incorporated
Phosphate buffered saline tablets (PBS)	Research Products International	P32080-100T
CNA Beta III Nickel-Free Archwire	Ortho Organizers, Inc.
GraphPad Prism	GraphPad Software, Inc.