Ethische verklaring: De Institutional Animal Care and Use Committee van de Mississippi State University heeft alle vang-, hanteer- en merktechnieken goedgekeurd onder de protocollen 04-068, 07-036, 10-033 en 13-034.
1. Inrichten van vanglocaties, immobiliseren en transporteren van wilde witstaartherten
- Identificeer openbare en private eigendommen die zijn aangemeld bij het Deer Management Assistance Program22 en vestig ≥29 vangstlocaties verspreid over drie bronregio's in Mississippi, USA.
- Identificeer verschillende vangstlocaties binnen elke bronregio om ervoor te zorgen dat de reeks genetische variatie die aanwezig is in de regionale populatie wordt gevangen.
- Opmerking: Hierbij omvatten de bronregio's de Delta, die bijna 17% van het totale landoppervlak in Mississippi, USA beslaat en wordt beschouwd als een bodemregio van hoge kwaliteit met landbouw als primair landgebruik23,24. Alle studie-dieren werden gevangen in deze regio binnen de verspreiding van O. v. virginianus25. Andere regio's omvatten de Thin Loess-regio (gecombineerde bovenste en onderste Thin Loess), die bijna 14% van het totale landoppervlak in Mississippi, USA beslaat en wordt beschouwd als een bodemregio van gemiddelde kwaliteit. Landbouw is ook een primair landgebruik in de Thin Loess-regio, hoewel minder prevalent dan in de Delta23,24. Alle studie-dieren werden gevangen in deze regio binnen de verspreiding van O. v. virginianus21. Ten slotte beslaat de Lower Coastal Plain (LCP) bodemregio bijna 22% van Mississippi en wordt deze geclassificeerd als een bodemregio van lage kwaliteit. De primaire landgebruiken in de LCP zijn dennenhoutproductie en veegrazing23,24. De LCP overlapt ook de geografische verspreiding van O. v. osceola; vier van de zes bronpopulaties bevonden zich binnen 21 km van deze verspreiding25. Deze ondersoort werd beschreven als kleiner dan O. v. virginianus26.

Figuur 1: Bronpopulaties. Fysiografische regio's in Mississippi, VS, waar drachtige moeders en hinde-kalfjes zijn gevangen. Deze figuur is gewijzigd ten opzichte van referentie31. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
- Selecteer potentiële vanglocaties die voldoen aan de volgende criteria: habitatkenmerken die gunstig zijn voor de beweging van herten, nabijheid van wegen voor de toegankelijkheid en verspreiding over het studiegebied.
OPMERKING: Vanglocaties moeten het mogelijk maken om de vangtechnicus te camoufleren.
- Lok de locaties met ongeveer 10 kg gepelde maïs om herten aan te trekken en evalueer het gebruik op basis van het verbruik van het lokaas en de herten die zijn gefotografeerd door bewegingsgevoelige camera's. Verplaats de activiteit naar alternatieve locaties als herten de gelokte locaties niet binnen 5-7 dagen bezoeken.
- Ga tijdens de vangstgebeurtenissen in een gecamoufleerde "stand" (observatiepost) zitten.
- Plaats de stand ongeveer 20 m benedenwinds van de lokhoop, rekening houdend met de heersende windrichting zodat herten die het lokaas naderen de vangtechnicus minder goed kunnen ruiken.
OPMERKING: Verhoogde stands hebben een sterke voorkeur en veiligheidsharnassen zijn verplicht. Er zijn verschillende variaties van stands beschikbaar via diverse commerciële bronnen en het gebruik varieert per persoonlijke voorkeur. Een vaste stand omvat bijvoorbeeld een zitting met een toegangsladder die met riemen aan een boom is bevestigd. Draagbare klimstands kunnen door de vangtechnicus worden meegenomen en bieden meer mobiliteit, aangezien de technicus een specifieke boom kan kiezen na aankomst op de vanglocatie. Draagbare klimstands zijn beperkt tot gebruik in rechte bomen zonder takken tot de gekozen hoogte.
- Gebruik een dartgeweer gekoppeld aan een 3 cc radio-telemetrie-pijltje om een mengsel van teletamine HCl (4.4 mg/kg) en xylazine HCl (2.2 mg/kg) toe te dienen.
- Plan de vangstpogingen zo dat ze samenvallen met de typische crepusculaire activiteitscyclus van herten27. Begin elke vangstpoging 2-3 h vóór zonsondergang.
- Zet de vangstgebeurtenissen 2-3 h na zonsondergang voort met behulp van nachtkijkers en een red-dot laser voor de plaatsing van het schot als de herten niet tijdens de daguren zijn gevangen.
- Schiet op herten wanneer ze zijwaarts staan en stationair zijn.
OPMERKING: Het achterkwartier van het hert is het doelwit omdat dit aanzienlijk spierweefsel bevat en zich ver van het hart en de longen bevindt.
- Wacht ongeveer 15 min tot de met het pijltje geraakte doelsetdieren (zes maanden oude kalfjes van beide geslachten of drachtige volwassen vrouwtjes) volledig geïmmobiliseerd zijn voordat u deze lokaliseert met directionele radio-telemetrieapparatuur.
- Bevestig dat de individuen gesedeerd zijn door te controleren op oogreflexen (knipperen). Breng vervolgens oogzalf aan op de ogen en verbind de ogen van het hert met een blinddoek om stress te verminderen.
OPMERKING: Verlies van thermoregulatie is een gevolg van immobilisatie.
- Gebruik een rectale thermometer om de lichaamstemperatuur na het herstel te beoordelen. Warm de herten op met verwarmde dekens als de temperatuur van het dier onder de 37.7 °C ligt. Koel de herten met koelelementen als de temperatuur van het dier boven de 40.0 °C ligt.
- Plaats het hert in sternumpositie op een brancard van militair type en transporteer het hert van de vangstlocatie naar een gesloten trailer.
- Nadat het hert in de trailer is geplaatst, worden de effecten van xylazine HCl omgekeerd met 0.125 mg/kg yohimbine HCl28.
- Transporteer alle gevangen herten naar de gewenste opvangfaciliteit (bijv. Mississippi State University Rusty Dawkins Memorial Deer Unit; MSU Deer Unit) en houd ze gescheiden per herkomstregio.
2. Gevangenschapsfaciliteiten en algemene verzorgingspraktijken voor proefdieren
OPMERKING: De MSU Deer Unit is onderverdeeld in vijf verblijven van 0,4 tot 0,8 ha.
- Bedek elke zijde van elk verblijf met schaduwdoek om als visuele en fysieke barrière tussen de verblijven te dienen. Schaduwdoek helpt letsel te verminderen en biedt schaduw tijdens de zomermaanden.
- Plaats 1-2 verhoogde schuthutten aan één uiteinde van elk verblijf om het toedienen van pijltjes tijdens de gegevensverzameling te vergemakkelijken.
- Plaats twee voerbakken in trogvorm aan verschillende uiteinden van elk verblijf om concurrentie om voedsel tussen de herten te verminderen. Plaats daarnaast een drinktrog in elk verblijf.
- Voorzie de herten van een hoogwaardig dieet (hertenpellets met 20% ruwe proteïne) ad libitum.
OPMERKING: In dit geval bestond het aanvullende beschikbare voer in de verblijven uit (Trifolium spp) en schapengras (Festuca spp), samen met spontaan opgekomen grassen en kruidachtigen.
- Indien aanwezig, onderhoud het beschikbare voer in de verblijven met behulp van een mengsel van herbiciden om breedbladige onkruiden en grassen te bestrijden, gebruikmakend van de mengverhoudingen die op de respectievelijke etiketten staan vermeld.
OPMERKING: Het zal waarschijnlijk nodig zijn om faciliteiten buiten de campus te gebruiken voor de huisvesting van mannetjes van ≥5,5 maand oud. Deze faciliteiten bestonden uit twee verblijven van 0,7 ha op elk van de drie percelen, met verzorgingspraktijken die vergelijkbaar waren met die van de MSU Deer Unit.

Figuur 2: Locaties van de vangstfaciliteiten. Studiegebied waarin de satellietfaciliteiten en de Deer Unit van de Mississippi State University (MSU) waren gevestigd. De gearceerde gebieden geven de counties Oktibbeha (A), Noxubee (B), Attala (C), Scott (D) en Copiah (E) in Mississippi, VS, aan. Deze figuur is gewijzigd ten opzichte van referentie34. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
3. Bestrijding van parasieten en ziekten
- Monitor onderzoeksdieren op rondwormparasieten (Strongyloides spp) met behulp van fecale flotatie, waarbij de parasieten worden gemeten als eieren per gram (EPG).
- Indien aanwezig in hoge concentraties, dient parasietbestrijding plaats te vinden door het toedienen van een gepelleteerde wormkuur (actieve bestanddeel fenbendazol) in een verhouding van ongeveer 0,77 kg gepelleteerde wormkuur per 22,7 kg voer gedurende de maand mei.
- Als de parasietniveaus na de eerste behandeling hoog blijven, gebruik dan een ivermectine pour-on behandeling (5 mg/mL)29, gemengd in een verhouding van 2 mL/0,45 kg, en dien dit toe aan de dieren in een hoeveelheid van 0,45 kg behandeld voer per 45,4 kg lichaamsmassa van het dier.
OPMERKING: Epizootische hemoragische ziekte is een soms dodelijke virale ziekte die tijdens de zomer- en herfstmaanden wordt verspreid door een bijtende knutjesvlieg (Culicoides spp). Indien aanwezig, moet de onderzoeksvoorziening 2-3 keer per week van 1 juli tot 1 oktober worden behandeld met insecticide (5% ultra-low volume insecticide) om de prevalentie van de vectoren onder de onderzoeksdieren te verminderen. Spuit dit insecticide in elke pen en rond de perimeter van de voorziening ongeveer 90 min voor de officiële zonsondergang via een vernevelaar. Voorkeursmethoden voor de beheersing van parasieten en ziekten zijn specifiek voor elke ingevangenschap-faciliteit. Veterinairs moeten worden geraadpleegd bij elk onderzoek aan wilde dieren in gevangenschap om de gezondheid en veiligheid van de dieren te waarborgen.
4. Gegevensverzameling

Figuur 3: Gegevensverzameling van pasgeboren herten. Het meten van de lengte van de achterpoot van een pasgeboren hert bij de Rusty Dawkins Memorial Deer Unit van de Mississippi State University in Oktibbeha County, Mississippi, USA. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
- Doorzoek dagelijks de faciliteit in gevangenschap naar hertenkalfjes tijdens het werpseizoen.
- Markeer pasgeboren kalfjes uniek met plastic oormerken van gemiddelde grootte met behulp van een oormerktang, waarbij een antibioticum wordt aangebracht op het mannelijke uiteinde van het merk om mogelijke infecties te voorkomen. Plaats het oormerk ongeveer in het midden van het oor van het kalfje.
- Meet de lichaamsmassa (met een nauwkeurigheid van 0,01 kg) met een digitale hangweegschaal en meet de lengte van de achtervoet en de totale lichaamslengte (met een nauwkeurigheid van mm).
- Neem haarmonsters en stuur deze naar een externe locatie voor de bepaling van de ouderlijkheid (zie de Tabel met Materialen).
OPMERKING: De bepaling van de ouderlijkheid werd uitgevoerd met DNA op basis van een eigen, niet-statistische custom structured query language-database. Bij de paarsgewijze allelvergelijking wees de externe locatie voor ouderlijkheidsbepaling de ouderlijkheid toe wanneer zij alle andere vaders en moeders uitsloten, behalve één vader en één moeder, op basis van een gedeeld allel van elke ouder bij alle geteste loci (B. G. Cassidy, persoonlijke communicatie). Deze methode voor ouderlijkheidsbepaling werd ook gebruikt in eerder onderzoek uitgevoerd bij witstaartherten in gevangenschap30,31.
- Dien 2 cc van Clostridium perfringens types C en D toxoïde en Clostridium perfringens types C en D antitoxine subcutaan toe en dien 0,3 cc/kg ivermectine in propyleenglycol (Mississippi State University Veterinarian School, Mississippi, USA) oraal toe aan elk kalfje.
- Immobiliseer volwassen mannetjes (≥1,5 jaar oud) chemisch tijdens oktober en november voor gegevensverzameling.
- Immobiliseer in hokken gehouden volwassenen met dezelfde combinatie van teletamine HCl en xylazine HCl als gebruikt voor de vangst van wilde dieren (stap 1.4).
- Tijdens sedatiegebeurtenissen begeleidt de persoon die de technicus naar de plek brengt, de technicus die gaat darten naar het uiteinde van het hok waar de verhoogde schuilhutten zich bevinden. Plaats één technicus in elk van de twee schuilhutten.
- Laat de persoon die de technicus naar de schuilhut heeft begeleid, teruglopen naar het tegenovergestelde uiteinde van het hok.
OPMERKING: De herten bewegen weg van deze technici en positioneren zich voor de schuilhutten, waar de technici in positie zijn om ethische schoten op elk hert te lossen.
- Schiet op de herten wanneer ze zijwaarts staan en stationair zijn (sectie 1.4).
- Wacht ongeveer 15 min tot de gedarte dieren volledig geïmmobiliseerd zijn voordat u ze nadert.
- Bevestig dat de individuen gesedeerd zijn door te controleren op oogreflexen (knipperen). Breng oogzalf aan op de ogen en blinddoek de herten om stress te verminderen.
- Nadat de darters een individueel hert succesvol hebben gesedeerd, worden de vitale functies van het hert gemonitord.
- Gebruik een rectale thermometer om de lichaamstemperatuur na het herstel te beoordelen. Verwarm herten met verwarmde dekens als de temperatuur van het dier onder de 37,7 °C ligt. Koel herten met ijspacks als de temperatuur van het dier boven de 40,0 °C ligt.
- Plaats het hert op een brancard van militair type en transporteer het via een utility task vehicle naar een vooraf bepaald gebied voor gegevensverzameling.
- Zodra ze zijn getransporteerd, worden dezelfde morfometrische metingen geregistreerd als bij de geboorte (stap 4.1).
- Meet de lichaamsmassa (met een nauwkeurigheid van 0,01 kg) met een digitale hangweegschaal en meet de lengte van de achtervoet en de totale lichaamslengte (met een nauwkeurigheid van mm).
OPMERKING: Individuele herten reageren verschillend op de combinatie van geneesmiddelen die tijdens sedatiegebeurtenissen wordt gebruikt; dien daarom ongeveer 0,1-0,3 cc van het mengsel van teletamine HCl en xylazine HCl toe (afhankelijk van de lichaamsmassa van een individueel hert) als een individu uit de sedatie komt voordat de gegevensverzameling is voltooid.
- Dien grootte-adequate hoeveelheden antibioticum, ivermectine, een clostridiaal vaccin en een leptospirose-vaccin toe aan alle herten nadat ze naar het gebied voor gegevensverzameling zijn getransporteerd (zie secties 1 en 3).
- Neem drie gewei-metingen bij volwassen mannetjes met een geweimeetlint terwijl het dier gesedeerd is.
- Meet de binnenste spreiding (grootste afstand tussen de hoofdbalken), de basale omtrek (kleinste diameter gelegen tussen de kraag en de G1-tak) en de lengte van de hoofdbalk (afstand van de geweibasis tot de punt van de hoofdbalk) van het gewei voorafgaand aan de verwijdering ervan.
- Verwijder het gewei ongeveer 3 cm boven de kraag met een reciprozaag. Verwijder geen gewei op minder dan 3 cm.

Afbeelding 4: Gegevensverzameling van volwassen mannetjes. Verwijdering van het gewei met een reciprozaag bij een in gevangenschap gehouden volwassen mannetje van de witstaartdamhert. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
- Nadat alle gegevens van het gesedeerde individu zijn verzameld, plaatst u het hert in de juiste verblijfplaats en dient u 0,125 mg/kg yohimbine HCl28 of 4,0 mg/kg tolazoline HCl32 toe om de effecten van xylazine HCl op te heffen. Houd de individuen in de gaten om er zeker van te zijn dat ze in sternumpositie blijven totdat ze uit de sedatie komen en volledig alert zijn.
OPMERKING: Indien er complicaties optreden en dieren moeten worden geëuthanaseerd, dan zijn euthanasie door cerebrale dislocatie via een pneu-stresser en het doorsnijden van de jugulaire vene ethische middelen om het dier te doden.
- Breng het gewei naar een aangewezen gebied om de meting van de geweiomvang te voltooien.
- Meet elke individuele spindel die uit de hoofdbalk steekt (G1, G2, G3, etc.) en aanvullende abnormale punten met behulp van draad.
OPMERKING: Punten die geen overeenkomstig tegenstuk hebben op de tegenoverliggende hoofdbalk of die niet consistent zijn met de definitie van een typische gewei-set, worden gedefinieerd door de Boone and Crockett Club33.
- Wikkel de draad om het punt waar de spindel de hoofdbalk kruist en markeer dit punt als referentie.
- Meet vanaf dit referentiepunt tot de punt van de spindel en herhaal dit voor elke spindel.
- Verzamel de resterende omtreksmetingen door het kleinste punt te identificeren tussen de G1- en G2-spindels (H2-omtrek), de G2- en G3-spindels (H3-omtrek), en de G3- en G4-spindel indien aanwezig (H4-omtrek).
- Als de G4-spindel niet aanwezig is, meet dan de afstand tussen het middenpunt van de G3-spindel en het uiteinde van de hoofdbalk en meet de H4-omtrek op het halverwege gelegen punt.
- Meet minder dan vier omtrekken wanneer het gewei minder dan drie spindels bevat.
OPMERKING: Bijvoorbeeld, een hoofdbalk met twee typische punten omvat slechts drie omtreksmetingen. Individuen kunnen andere richtlijnen (Safari Club International) gebruiken voor het berekenen van de geweiomvang; consistente methoden moeten echter voor elk dier worden gebruikt voor een geldige vergelijking.
- Bereken na het uitvoeren van alle metingen een geweisscore vergelijkbaar met de bruto niet-typische Boone and Crockett-score33.
- Weeg het gewei tot op 0,1 g nauwkeurig met een wetenschappelijke digitale weegschaal en ken een minimale kritieke geweimassa van 1 g toe voor eerstejaarsdieren met gewei korter dan 3 cm.
- Immobiliseer in verblijven gehouden juvenielen van ongeveer 5,5 maand oud chemisch met dezelfde methoden als voor volwassenen (sectie 4.2) en markeer de juvenielen met een grote plastic oormerk (stap 4.1.1).
- Gebruik dezelfde doseringen van het drugmengsel voor het immobiliseren van gevangen volwassenen als gebruikt voor het immobiliseren van wilde herten (sectie 1).
- Verzamel dezelfde metingen als bij de geboorte (stap 4.1.2) en dien dezelfde profylactische middelen toe als bij volwassenen (sectie 4.2).
OPMERKING: Nadat alle gegevens zijn verzameld, transporteert u elk juveniel mannetje per aanhanger naar de willekeurig toegewezen satellietfaciliteit.
5. Het produceren van nakomelingen van de eerste en tweede generatie
- Classificeer zes maanden oude in het wild gevangen hertenkalfjes en nakomelingen die in de captive-faciliteit zijn geboren uit in het wild gevangen moeders als individuen van de eerste generatie.
- Plaats tijdens het paarseizoen twee mannetjes bij 7-16 vrouwtjes voor een gemiddelde voortplantingsgeslachtsverhouding van één mannetje op acht vrouwtjes.
OPMERKING: Selecteer fokmannetjes uit satellietfaciliteiten op basis van hun fysieke verschijning, omdat de gezondste mannetjes (grootste gewei en lichaamsomvang) de grootste kans hebben om de vrouwtjes gedurende het gehele paarseizoen te bedienen zonder letsel op te lopen door de agressieve aard van de mannetjes tijdens het paarseizoen.
- Sta herten alleen toe om te paren met andere individuen uit dezelfde bronregio (bijv.. Delta-mannetjes paren met Delta-vrouwtjes, Thin Loess-mannetjes paren met Thin Loess-vrouwtjes en LCP-mannetjes paren met LCP-mannetjes).
- Classificeer herten die zijn verwekt door ouders van de eerste generatie als nakomelingen van de tweede generatie. Tel deze individuen vanaf de geboorte in gevangenschap op en voer hen hetzelfde hoogwaardige dieet als hun ouders.
OPMERKING: Vrouwtjes kunnen gedurende meerdere jaren nakomelingen produceren, maar doorgaans met elk jaar verschillende vaderdieren. Verzamel dezelfde gegevens over nakomelingen van de tweede generatie als verzameld bij individuen van de eerste generatie en in het wild gevangen individuen.