Nieuwe trends in science en biotechnologie hebben geleid tot de oprichting van duizenden nieuwe mutant lijnen van muizen, Drosophila, zebravis en andere soorten gebruikt als modelorganismen transferoefeningen biomedische en andere wetenschappen1. Bovendien, als nieuwe technologieën worden ontwikkeld en beschikbaar, de nummers van mutant lijnen verhogen gestaag2. Dit leidt tot de noodzaak voor een veilige opslag van genetische hulpbronnen buiten de gemeenschappelijke praktijken van het houden van de kolonies kweken. Als een methode waarmee de veilige opslag van genetische hulpbronnen voor onbepaalde tijd, cryopreservatie biedt vele voordelen, zoals uitbreiding van reproductieve seizoen, omzeilt de behoefte aan continu onderhoud van broodstock, en het is meer kosten - en arbeid-efficiënte2.
Protocollen voor sperma cryopreservatie ontwikkeld tijdens de afgelopen verscheidene jaren2,3,4 bieden de mogelijkheid voor succesvolle opslag van zebravis mannelijke genetisch materiaal. Cryopreservatie van eieren of embryo's in vis is echter nog niet mogelijk als gevolg van hun complexe structuur en grote hoeveelheden dooier materiaal. Onlangs, de praktijk van transplantatie van primordiaal geslachtscellen (PGCs) of spermatogonial stamcellen (levens) biedt een rondweg om deze barrière door ontwikkelt zich tot functionele sperma en eieren na transplantatie5. Cryopreservatie van levens biedt daarom een nieuwe grens in het behoud van zeldzame en waardevolle genetische hulpbronnen.
Hoewel cryopreservatie vele voordelen biedt, het vriesproces van slow-tarief genereert verschillende omstandigheden die tot cel schade2 leiden kunnen. Het gaat hierbij om intracellulaire en extracellulaire ijsvorming, uitdroging, cryoprotectant toxiciteit en anderen. Intracellulair ijs schadelijk is voor de cellen, extracellulaire ijs kan leiden tot mechanische persing van de cellen, terwijl de diffusie van water uit de cellen tijdens vertragen-tarief bevriezing kan leiden tot uitdroging6. Onlangs, heeft de cryopreservatie van vis gameten7,8,9verglazing als een techniek waardoor de negatieve effecten van ijsvorming zijn toegepast. Het presenteert een ultra snelle koeling techniek waardoor de interne en externe media omzetten in een amorfe/glazig staat zonder crystalizing in ijs7,10. Succesvolle verglazing van testiculaire en ovarieel weefsel heeft aangetoond in aviaire en zoogdieren soorten10,11,12, dus het openen van mogelijkheden voor de toepassing in de vis, alsmede.
In deze studie presenteren wij de naald ondergedompeld verglazing (NIV) procedure voor cryopreservatie van hele zebrafish teelballen. We tonen een betrouwbare methode voor de isolatie van de zebravis beginnende kiemcellen zonder besmetting en een cryopreservatie proces dat relatief hoge bedragen van beginnende kiemcellen met een geringe aanwezigheid van andere cellen, met name van spermacellen levert. Tot de beste van onze kennis is dit de eerste studie om aan te tonen een gedetailleerde gevisualiseerde protocol voor ultra snelle koeling van vis gonadale weefsel en zebrafish germline cellen. Bovendien, herhaalbaarheid van de methode is aangetoond in vijf verschillende zebrafish stammen: AB wild type, casper (roy- / -; nacre- / -), leopard (leot1/t1), vasa [GS (vas::eGFP)] en Wilms tumor [GS (wt1b::eGFP 1)] transgene lijn.