Evaluatie van de invasie van de cel en het migratieproces: een vergelijking van de Video Microscoop gebaseerde kras wond Assay en de bepaling van Boyden kamer

Summary

Deze studie meldt twee verschillende methoden voor de analyse van de invasie van de cel en migratie: de bepaling van Boyden kamer en de in vitro video Microscoop gebaseerde wondgenezing bepaling. De protocollen voor deze twee experimenten worden beschreven, en hun voor- en nadelen worden vergeleken.

Abstract

De invasie en migratie mogelijkheden van tumorcellen zijn grootste bijdragen aan de progressie van kanker en herhaling. Vele studies hebben onderzocht de migratie en invasie capaciteiten om te begrijpen hoe kankercellen verspreiden, met het doel van de ontwikkeling van nieuwe behandelingsstrategieën. Analyse van de cellulaire en moleculaire basis van deze capaciteiten heeft geleid tot de karakterisatie van cel mobiliteit en de fysisch-chemische eigenschappen van het cytoskelet en mobiele communicatie. Voor vele jaren, de bepaling van Boyden kamer en de kras wond assay geweest de standaardtechnieken cel invasie en migratie te gaan studeren. Deze twee technieken hebben echter beperkingen. De bepaling van de kamer Boyden is moeilijk en tijdrovend, en de bepaling van de kras wond heeft lage reproduceerbaarheid. Ontwikkeling van moderne technologieën, met name in microscopie, is de reproduceerbaarheid van de kras wond assay toegenomen. Met behulp van krachtige analysesystemen, kan een "in-incubator" video Microscoop worden gebruikt om automatisch en real-time analyse van cel migratie en invasie. Het doel van deze paper is te rapporteren en vergelijken van de twee tests gebruikt bij het bestuderen van de cel invasie en migratie: de bepaling van Boyden kamer en een geoptimaliseerde in vitro video Microscoop gebaseerde scratch wond assay.

Introduction

Cel invasie en migratie zijn betrokken bij de verspreiding van kankercellen, die de belangrijkste oorzaak van resistentie tegen behandeling¹ en kunnen leiden tot regionale of metastatische herhaling na kanker behandeling². De epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) is het eerste proces van cel invasie-migratie in welke kanker cellen van een epitheelweefsel naar een mesenchymale fenotype overschakelen. E-cadherine is een extracellulaire marker van de epitheliale fenotype-³en verhoogde expressie van N-cadherine en vimentin is kenmerkend voor de mesenchymale fenotype⁴. Migrati....

Protocol

Opmerking: De Boyden kamer en kras testen zonder opname van de ECM worden aangeduid als de bepaling van de migratie en de dezelfde testen met de ECM wordt aangeduid als de bepaling van de invasie.

1. Boyden kamer Assay

Opmerking: Dit protocol is aangepast voor de cellijn van SQ20B, die is afgeleid van een terugkerende hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) laryngeal kanker en is afkomstig van John Little (Boston, MA, USA).

Dag 1

1. Cel zaaien
   1. Zaad 2 10⁶ SQ20B cellen in 12 mL gestolde voedingsbodem (CM) in een maatkolf v....

Results

Wij rapporteren hier twee verschillende methoden voor het analyseren van de cel invasie en migratie. Figuur 1 toont de Boyden kamer experiment. De inserts zijn geplaatst in een metgezel plaat met chemoattractant medium, en de cellen worden overgeënt in CM. Het membraan kan worden gelamineerd (migratie assay) of bekleed (invasie assay). Cellen worden overgeënt in de bovenste kamer in s-CM. De tweede kamer is gevuld met CM als een chemoattractant. De cellen zij.......

Discussion

Wij rapporteren hier twee verschillende modaliteiten te bestuderen van de cel invasie en migratie-proces. De analyse van dit proces is belangrijk voor het begrip van de factoren die betrokken zijn bij gemetastaseerde herhaling, die zou kunnen worden verklaard door de verhoogde motiliteit van een subpopulatie van kankercellen genoemd kanker stamcellen^10,11.

Het experiment van Boyden kamer behoort tot de meest gebruikte technieken om te .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fetal Calf Serum Gold	GE Healthcare	A15-151
Hydrocortisone water soluble	Sigma-Aldrich	H0396-100MG
Penicillin/Streptomycin 100 X	Dominique Dutscher	L0022-100
DMEM	Gibco	61965-026
F12 Nut Mix (1X) + GlutaMAX-I	Gibco	31765-027
EGF	Promega	G5021	The solution must be prepared just before use because it is very unstable
Z1 coulter particle	Beckman Coulter	6605698
Optical microscope	Olympus	CKX31
SQ20B cell line	Gift from the John Little’s Laboratory	-
Wound Maker	Essen Bioscience	4494	Store in safe and dry place
96-well ImageLock Plate	Essen Bioscience	4379
CoolBox 96F System with CoolSink 96F	Essen Bioscience	1500-0078-A00
CoolBox with M30 System	Essen Bioscience	1500-0078-A00
Boyden Insert	Dominique Dutcher	353097
Boyden Coated Insert	Dominique Dutcher	354483	Store at -20 °C
Companion 24-well Plate	Dominique Dutcher	353504
BD Matrigel standard	BD BioScience	BD 354234	Store at -20°C.
RAL 555 Staining Kit	RAL Diagnostics	361550	Store in safe and dry place
Microcentrifuge tubes	Eppendorf	33511