Er is een vraag om preklinische testen voor een nieuwe klasse van "Wees" drugs genoemd farmacologische chaperones reproduceerbaar, snel en efficiënt. Voor patiënten die in aanmerking komen, alsmede nieuwe farmacologische chaperone drugs ontwikkelden we een eenvoudige, sterk gestandaardiseerde en veelzijdig cel cultuur gebaseerde bepaling naar het scherm.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
In Vitro Enzym meting aan Test farmacologische Chaperone responsiviteit in Fabry en de ziekte van Pompe
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het gebruik van gepersonaliseerde geneeskunde voor de behandeling van zeldzame monogeen ziekten zoals lysosomale opslag aandoeningen (LSDs) wordt uitgedaagd door de complexe klinische proef ontwerpen, hoge kosten en lage aantallen van de patiënt. Honderden mutant allelen zijn betrokken in de meeste van de LSDs. De ziekten zijn meestal ingedeeld in 2 tot 3 verschillende klinische typen volgens Ernst. Moleculaire karakterisering van het genotype kan bovendien helpen klinische resultaten voorspellen en informeren van de patiëntenzorg. Daarom ontwikkelden we een eenvoudige cel cultuur assay op basis van HEK293H-cellen geïnfecteerd uiten over de mutaties in de ziekte van Fabry en Pompe geïdentificeerd. Een soortgelijke bepaling is onlangs geïntroduceerd als een preklinische testen te identificeren vatbaar mutaties voor farmacologische Chaperone therapie (PCT's) in de ziekte van Fabry. Dit manuscript beschrijft een gewijzigde cel cultuur assay wat mogelijk maakt snelle fenotypische beoordelingvan allèlique varianten in Fabry en Pompe ziekte vast te stellen die in aanmerking komen patiënten voor PCT en kan steun bij de ontwikkeling van nieuwe pharmacochaperones.
Inleiding
Er zijn meer dan een dozijn lysosomale opslag aandoeningen (LSDs) gerelateerd aan glycosidase dysfunctie als gevolg van de primaire genmutaties. In Fabry (OMIM #301500) en de ziekte van Pompe (OMIM #232300), meer dan 500 en 200 missense mutaties1,2,3 zijn gemeld, respectievelijk, hetgeen overeenkomt met ongeveer 60% van de totale mutatie graaf. Worden nog talloze nieuwe varianten van de gen geïdentificeerd, waarvan vele hebben onbekende betekenis. Uitgebreide biochemische studies is gebleken dat bepaalde genotypes niet tot een volledige verlies-van-functie van het GLA -gen leiden (OMIM * 300644) in de ziekte van Fabry, veroorzaken maar het bijbehorende enzym te mislukken om te komen tot een thermodynamisch favoriete opvouwbare4 . Dit resulteert in ER retentie en voortijdige degradatie van het anders functionele enzym. Soortgelijke conclusies hebben getrokken in andere LSDs met inbegrip van Pompe ziekte5. Bovendien, moleculaire karakterisering van enzym varianten kan vergemakkelijken klinische interpretatie van de mutaties ten tijde van de diagnose6, suggereert dat LSD progressie een afzonderlijk proces op basis van de aard van de mutatie is. De traditionele indeling in meestal 2 tot 3 verschillende klinische typen moet dus opnieuw worden beoordeeld om te stroomlijnen klinische counseling en therapeutische besluiten.
Enzym Replacement Therapy (ERT) is beschikbaar voor beide ziekten. ERT, heeft echter beperkte werkzaamheid in de aangetaste weefsels/organen zoals de hersenen en de skeletspieren. Bovendien, ERT kan uitlokken een immunogene reactie dat gevaar vormt voor de therapeutische voordelen. Farmacologische Chaperones (PC's) zijn een aantrekkelijke behandeling alternatief voor patiënten met zogenaamde responsieve mutaties. PC's dienen als een moleculaire steiger voor juiste eiwitvouwing en stabilisatie waardoor op zijn beurt endoplasmatisch reticulum (ER) retentie en ER-geassocieerde afbraak van het enzym. Bovendien, PC's kunnen oraal worden toegediend en kunnen potentieel te steken van de bloed-hersenbarrière. PCT kan dus een meer haalbare optie is voor de behandeling van patiënten met bepaalde genotypes. Voor een uitgebreide review over de PC-toepassing in de LSDs, verwijzen naar de uitstekende beoordeling door Parenti7.
De ontdekking van honderden ziekte veroorzaakt mutant allelen daagt preklinische drug testen en een eenvoudige, snelle en zeer gestandaardiseerde evaluatie van vatbaar patiënten voor een aanpak van gepersonaliseerde geneeskunde noodzakelijk. Teneinde de schadelijke gevolgen van LSD genmutaties en testen van kandidaat-mutaties te voorspellen vatbaar patiënten voor PCT, was een zeer gestandaardiseerde overmaat expressie systeem in de HEK293H cellen die voor snelle en betrouwbare enzym activiteitsmeting zorgt ontwikkeld. Soortgelijke overmatige expressiesystemen eerder zijn beschreven voor Fabry en Pompe ziekte met COS-78,9,10,11, HeLa cellen12, of HEK29313 ,14,15,16 cellen voor het gen glycosidase.
Zelfs een zeer vergelijkbare methode is gepatenteerd als een "methode om te voorspellen response to Chaperone farmacologische behandeling van ziekten"17 dat de relevantie van een cel aangeeft cultuur systeem dat kan worden geïntegreerd in de klinische praktijk.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. bereiding van Mutant pcDNA3.1/GLA en pcDNA3.1/GAA constructies
Opmerking: De klonen strategieën voor de GLA en GAA codering sequenties (cds) zijn gerapporteerde eerdere15,18.
- Plaats-geleide mutagenese met behulp van plaats-geleide mutagenese
- Gebruik de verwijzing sequenties NM_000169.2 en NM_000152.4 als sjablonen voor de mutagenese van GLA en GAA genen, respectievelijk. Heb een set van hoge zuiverheid zout gratis inleidingen (25-37-mers) gesynthetiseerd door een commerciële aanbieder, met betekenis en antisense inleidingen waaraan één van de respectieve reeks wijzigingen centraal in hun lengte individueel om de mutatie. Gebruik de gratis primer design tool ter ondersteuning van de primer ontwerp19.
- Gebruik de standaardvoorwaarden voor de reactie-oplossing en PCR voorwaarden voorgeschreven door de fabrikant voor het reactiemengsel.
- Meng 5 µL van 10 x 10 reactie buffer ng van double-stranded sjabloon plasmide DNA (pcDNA3.1/GLA of pcDNA3.1/GAA), 125 ng elke primer, 1 µL van het mengsel verstrekte dNTP, 3 µL van DMSO reagens in een passende hoeveelheid gedeïoniseerd water (laatste reactie volume : 50 ΜL). Ten slotte voeg 2.5 U van DNA-polymerase en meng door het pipetteren omhoog en omlaag. Als een negatieve controle, voorhebben over een neen-primer monster.
- Het gebruik van het volgende programma PCR van het begin: stap 1: 95 ° C gedurende 1 min, stap 2: 95 ° C gedurende 50 s, stap 3: 60 ° C gedurende 50 s, stap 4: 68 ° C gedurende 8 minuten, 18 keer herhaalt u stap 2-4 en stap 5: 68 ° C gedurende 10 minuten.
- Na PCR, voeg 1 µL van de Dpnik restrictie-enzym (10 U/µL) en verder uit te broeden de flacon van de reactie bij 37 ° C gedurende 1 uur.
- Transformatie en Screening voor de gewenste kloon
- Transformeren een aliquoot gedeelte van ultracompetent cellen overeenkomstig de aanbevelingen van de fabrikant. Gebruik SOC medium (trypton 2% (g/v), gist extract van 0,5% (w/v), NaCl 10 mM, KCl 2.5 mM, steriliseren bij 121 ° C en voeg vervolgens steriele gefiltreerd oplossingen van MgCl2 en glucose tot eindconcentraties van 10 en 20 mM, respectievelijk) in plaats van de fabrikant medium. Na de ingreep, plaat 250 µL van de mutagenese van het monster op een LB plaat met 100 µg/mL ampicilline en Incubeer bij 37 ° C gedurende 18 uur.
- Verzekeren dat het aantal transformants > 10 en de reactie oplevert ten minste drie keer zo veel koloniën als de neen-primer controle reactie, bijvoorbeeldmet behulp van een lichtgevende plaat ter vergemakkelijking van de kolonie tellen. Dan kies 3 kolonies en bereiden 3 mL overnachting culturen in de pond-Bouillon medium.
- De volgende dag, plasmide voorbereiding met een standaard kit uitvoeren en analyseren van de hele reeks met T7 (5ʹ-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG-3ʹ) en BGHr (5ʹ-TAG AAG GCA CAG TCG AGG-3ʹ) inleidingen via standaard Sanger sequencing.
- Een geschikte moleculaire biologie-hulpprogramma gebruiken voor het analyseren van de reeks. Wanneer de gewenste mutatie wordt gedetecteerd en geen verdere volgorde van afwijking in vergelijking met NM_000169.2 (α-galactosidase A) of NM_000152.4 (zuur α-glucosidase) is gezien, selecteert u de kloon voor Transfectie-grade plasmide zuivering.
- De zuiverheid van het DNA bepalen door het meten van de extinctie in een spectrofotometer.
Opmerking: Toestaan alleen de voorbereidingen die opleveren van een plasmide zuiverheid met een 260/280 Extinctieverhouding van > 1.8 voor cel cultuur experimenten.
2. teelt van HEK293H cellen
- HEK293H cellen in hoge glucose (4.5 g/L) Dulbecco´s gewijzigd Eagle Medium (DMEM) aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS) en 1% penicilline/streptomycine handhaven. Houden van de cellen een incubator bij 37 ° C in een atmosfeer van 5% CO2 water-jacket.
- Cultiveren van de cellen met een dichtheid van 80-90%.
- Het medium gecombineerd en wassen na gebruik van fosfaat zoutoplossing (PBS) zonder Ca2 + en Mg2 gebufferde +.
- Passage door het toevoegen van 0,05% trypsine-EDTA en incubeer gedurende 5 minuten bij 37 ° C en 5% CO2.
- Splits de cellen 1:15 in verse medium en zaad in een nieuwe T75 kolf om de permanente cultuur. Gebruik geen cellen met meer dan 25 passages.
3. pcDNA3.1/GLA en pcDNA3.1/GAA plasmide transfectie en behandeling van HEK293H
- 24 h vóór de transfectie, wassen de cellen van de HEK293H in een maatkolf van T75 cel cultuur een keer met PBS met Ca2 +, Mg2 +. Oogsten van de cellen met 0,05% trypsine-EDTA zoals hierboven aangegeven en zaad 1.5 x 105 cellen in de holten van een plaat van de 24 goed cultuur met behulp van 500 µL DMEM medium aangevuld met 10% FBS zonder antibiotica.
- Verrichten van een transfectie protocol volgens de handleiding van de fabrikant. Meestal gebruikt u een mengsel van 1 µg plasmide DNA en 2.5 µL van transfectiereagens in 100 µL van de serum-vrije DMEM. Incubeer gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur en toevoegen aan de cellen op een drop-wise wijze daarna.
- Verwijder het medium met de transfectiereagens na een periode van 4 uur op 37 °C/5% CO2 en voeg 500 µL van verse DMEM met 10% FBS / 1% penicilline/streptomycine.
Opmerking: Tijdens deze stap 1-Deoxygalactonojirimycin-Hydrochloride (DGJ) of 1-Deoxynojirimycin-Hydrochloride (DNJ) kan worden toegevoegd aan het kweekmedium indien bestemd (een waterige stockoplossing van 10 mM te gebruiken om een eindconcentratie van 20 µM DGJ en DNJ ). Vers DGJ of DNJ is 42 h toegevoegd na plasmide transfectie.
4. cel oogst en α-galactosidase A of zure α-glucosidase activiteitsmeting
- Oogst van de cel
- Op de dag van de oogst, de cellen verwijderen uit de incubator en gecombineerd van het medium. De cellen 2 keer met PBS met Ca2 + en Mg2 +grondig te wassen.
Opmerking: Deze stap is essentieel omdat DGJ en DNJ krachtige remmers van α-galactosidase en α-glucosidase, respectievelijk zijn, en eventuele overgebleven zou de test ongeldig. - Voeg 200 µL van gedeïoniseerd water rechtstreeks op de top van de cellen. Spoel de cellen van de plaat en deze overbrengen naar een 1,5 mL reactiebuis.
- Op de dag van de oogst, de cellen verwijderen uit de incubator en gecombineerd van het medium. De cellen 2 keer met PBS met Ca2 + en Mg2 +grondig te wassen.
- Homogenisering door bevriezen en ontdooien
- Zet de monsters in een passende schuim rek en vortex voor 5 s de lysis om efficiënter te maken. Zet de monsters die afwisselend in vloeibare stikstof voor 10 s en in een waterbad kamertemperatuur totdat het ontdooien was compleet (5 min).
- Herhaal deze procedure 5 keer en draai vervolgens de monsters gedurende 5 minuten bij 10.000 x g.
- Voorbereiding van een verse buis voor elk monster met 40 µL van gedeïoniseerd H2O en voeg 10 µL van monster. Meng oplossing door vortexing kort en Pipetteer 10 µL in een holte van een 96 goed plaat (elk monster in drievoud). Verdun een 2 mg/mL bovien serumalbumine (BSA)-stockoplossing in gedeïoniseerd H2O als volgt voor het verkrijgen van een standaard curve: 50 µL H2O/50 µL BSA; 60 µL H2O/40 µL BSA; 70 µL H2O/30 µL BSA; 80 µL H2O/20 µL BSA; 90 µL H2O/10 µL BSA; 100 µL H2O.
- Start de reactie door toevoeging van 200 µL van BCA reagens (reagens A en B reagens gemengd met een verhouding van 50: 1) en incubeer gedurende 1 uur in het donker bij 37 ° C onder lichte agitatie op een rondschudapparaat (300 rpm). Meet de extinctie op 560 nm in een afleesapparaat.
Opmerking: De monsters bevatten meestal tussen de 1 en 1,5 µg eiwit per µL.
- Verdun het berekende bedrag van elk monster en Pipetteer in verse 1,5 mL reactie buizen 0.05 (voor α-galactosidase A) of 0,5 (voor zure α-glucosidase) µg eiwit/µL om oplossingen te bekomen. Vortex de monsters voor 5 s weer en Pipetteer 10 µL met deze tweevoudige verdunning in een 96 goed plaat (elk monster in tweevoud).
- Start de reactie door 20 µL van de respectieve substraat oplossing toe te voegen:
Voor α-galactosidase A: 2 mM 4-Methylumbelliferyl-α-D-galactopyranoside (4-MU-gal) in citraat 0.06 M fosfaatbuffer, pH 4.7.
Voor zure α-glucosidase: 2 mM 4-methylumbelliferyl α-D-glucopyranoside (4-MU-glu) in 0,025 M Natriumacetaat, pH 4.0. - Incubeer de enzym reacties gedurende 1 uur in het donker bij 37 ° C onder lichte agitatie op een rondschudapparaat (300 rpm). Het beëindigen van de reactie door de toevoeging van 200 µL van 1,0 M, pH 10,5 aangepast glycine-NaOH buffer.
- Een standaard curve van 4-methylumbelliferone (4-MU) uit een voorraad van 0,01 mg/mL als volgt voorbereiden:
100 µL H2O / nee 4-MU; 80 µL H2O / 20 µL 4-MU; 60 µL H2O / 40 µL 4-MU; 40 µL H2O / 60 µL 4-MU; 20 µL H2O / 80 µL 4-MU; geen H2O / 100 µL 4-MU, Pipetteer 10 µL van elke verdunning in de 96 put plaat (in duplicaten) en 200 µL van de 1,0 M glycine-NaOH buffer aan elk putje toevoegen om het aanpassen van het volume en de pH. - Maatregel de enzymactiviteit in een lezer van de fluorescentie uitgerust met het passende filter instellen en analyseren van gegevens met behulp van de juiste software voor het apparaat van de lezer fluorescentie.
Opmerking: Beide 4-mok substraten worden verlaagd tot 4-MU tijdens blootstelling aan α-galactosidase A of zure α-glucosidase. Vrijgegeven 4-MU is een fluorescerende, die kan worden gemeten op 360 en 465 nm als de excitatie en emissie golflengten, respectievelijk, microplate fluorescentie lezer gebruikt.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De procedure van de mutagenese
Om te beoordelen van de efficiëntie van GLA gene mutagenese, werden de mutaties ingedeeld in één van de volgende categorieën. Deze aanpak voor het genereren van mutaties geopenbaard die ongeveer 66,5% voor de GLA mutaties werden verkregen in de eerste poging. Een verdere 25% kon worden verkregen na een enigszins gewijzigde tweede PCR.
Categorie 1: De mutagenese...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het protocol hierin beschreven levert robuuste resultaten voor de raming van de schade van de enzym in erfelijke Lysosomale ziekten van het metabolisme. Dit manuscript is dat een wijziging van het protocol gepubliceerd eerdere15. De meest cruciale wijzigingen betrekken striktheid (dat wil zeggen, in het proces van voorbereiding van mutant vector construct), standaardisatie van de cel-cultuur-protocol (dat wil zeggen, HEK293H cel onderhoud en transfectie voorwaarden) en de hoge aa...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
De auteurs wil erkennen van Mandy Loebert en Tina Czajka voor uitstekende technische ondersteuning. Wij danken Flora Luo (Harvard Medical School, Boston, MA, USA) voor taal bewerken help.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Materiaal | |||
| QuikChange II XL Site-Directed Mutagenesis Kit | Stratagene, La Jolla, CA, USA | #200522 | |
| Primer GLA[R301Q]-frw: 5´- CTA ATG ACC TCC AAC ACA TCA GCC C-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GLA[R301Q]-rev: 5´- GGG CTG ATG TGT TGG AGG TCA TTA G-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GLA[A156V]-frw: 5´-CTA CGA CAT TGA TGT CCA GAC CTT TGC TG-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GLA[A156V]-rev: 5´-CAG CAA AGG TCT GGA CAT CAA TGT CGT AG-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GLA[A156V]-frw: 5´-GGA AAT AAA ACC TGC ACA GGC TTC CCT GGG A-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GLA[A143T]-rev: 5´-TCC CAG GGA AGC CTG TGC AGG TTT TAT TTC C-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[F455Y]-frw: 5´-CTG CCG GGA GCT TCA GGC CCT ACG A-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[F455Y]-rev: 5´-TCG TAG GGC CTG AAG CTC CCG GCA G-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[P545L]-frw: 5´-CAC CCT ACG TGC TTG GGG TGG TTG G-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[P545L]-rev: 5´-CCA ACC ACC CCA AGC ACG TAG GGT G-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[L552P]-frw: 5´-TTG GGG GGA CCC CCC AGG CGG CCA C-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer GAA[P545L]-rev: 5´-GTG GCC GCC TGG GGG GTC CCC CCA A-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer T7: 5´-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Primer BGHrev: 5´-TAG AAG GCA CAG TCG AGG-3´ | MWG Eurofins Operon, Ebersberg, Duitsland | n.a. | |
| Trypton | Carl Roth, Karlsruhe, Duitsland | 8952.1 | |
| Gistextract | Merck, Darmstadt, Duitsland | 103,753 | |
| Natriumchloride | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,064,041,000 | |
| Kaliumchloride | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,049,360,500 | |
| MgCl2 x 6H2O | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,058,330,250 | |
| D (+)-Glucose monohydraat | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,083,422,500 | |
| Natriumhydroxide | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,064,980,500 | |
| Glycine | Carl Roth, Karlsruhe, Duitsland | 3908.2 | |
| Citroenzuur | Carl Roth, Karlsruhe, Duitsland | X863.3 | |
| Dinatriumwaterstoffosfaat | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,065,860,500 | |
| Natriumacetaat | Merck, Darmstadt, Duitsland | 1,062,640,050 | |
| IJsazijn | Sigma Aldrich, München, Duitsland | A6283 | |
| LB Agar | Carl Roth, Karlsruhe, Duitsland | X969.2 | |
| LB Medium | Carl Roth, Karlsruhe, Duitsland | X968.2 | |
| Zyppy Plasmid Miniprep Kit | ZymoResearch, Freiburg, Duitsland | D4020 | |
| QIAfilter Plasmid Midi Kit | Qiagen, Hilden, Duitsland | 12245 | |
| HEK293H cellijn | Invitrogen, Karlsruhe, Duitsland | 11631-017 | |
| Dulbecco´s Modified Eagle Medium | Invitrogen, Karlsruhe, Duitsland | 31966-047 | |
| HyClone foetaal bovien serum | GE Healthcare, South Logan, Utah, VS | SV30160.03 | |
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen, Karlsruhe, Duitsland | 15140-122 | |
| CELLSTAR Standard Cell Culture Flasks, Greiner Bio One | VWR International GmbH, Hannover, Duitsland | 82050-854 | |
| Cell culture plates (24 well) | Sarstedt, Nümbrecht, Duitsland | 831,836 | |
| Cellstar 96 well plate | Greiner bio one, Frickenhausen, Duitsland | 655185 | |
| SafeSeal reactiebuisjes, 1,5mL | Sarstedt, Nümbrecht, Duitsland | 72,706 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen, Karlsruhe, Duitsland | 11668-019 | |
| 1-Deoxygalactonojirimycin Hydrochloride | Sigma Aldrich, München, Duitsland | D9641 | |
| 1-Deoxygalactonojirimycin Hydrochloride | Toronto Research Chemicals, Toronto, Canada | D236500 | |
| 1-Deoxynojirimycin | Sigma Aldrich, München, Duitsland | D9305 | |
| PBS Dulbecco zonder Calcium, zonder Magnesium | Biochrom, Berlijn, Duitsland | L 1825 | |
| Trypsine-EDTA (0,05 |
Referenties
- Cardiff University. , http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index. (2017).
- Meiji Pharmaceutical University. , http://fabry-database.org (2017).
- Erasmus Medical Center. Mutations In Human Acid Alpha-Glucosidase. , http://cluster15.erasmusmc.nl/klgn/pompe/mutations.html?lang=en (2017).
- Ishii, S., et al. Mutant alpha-galactosidase A enzymes identified in Fabry disease patients with residual enzyme activity: biochemical characterization and restoration of normal intracellular processing by 1-deoxygalactonojirimycin. Biochem J. 406, 285-295 (2007).
- Tajima, Y. Structural and biochemical studies on Pompe disease and a "pseudodeficiency of acid alpha-glucosidase". J Hum Genet. 52, 898-906 (2007).
- Lukas, J. Functional and Clinical Consequences of Novel α-Galactosidase A Mutations in Fabry Disease. Hum Mutat. 37, 43-51 (2016).
- Parenti, G. Treating lysosomal storage diseases with pharmacological chaperones: from concept to clinics. EMBO Mol Med. 1, 268-279 (2009).
- Yasuda, M. Fabry disease: characterization of alpha-galactosidase A double mutations and the D313Y plasma enzyme pseudodeficiency allele. Hum Mutat. 22, 486-492 (2003).
- Shimotori, M., Maruyama, H., Nakamura, G., Suyama, T., Sakamoto, F., Itoh, M., Miyabayashi, S., Ohnishi, T. Novel mutations of the GLA gene in Japanese patients with Fabry disease and their functional characterization by active site specific chaperone. Hum Mutat. 29, 331(2008).
- Andreotti, G., et al. Therapy of Fabry disease with pharmacological chaperones: from in silico predictions to in vitro tests. Orphanet J Rare Dis. 6, 66(2011).
- Khanna, R. The pharmacological chaperone AT2220 increases the specific activity and lysosomal delivery of mutant acid alpha-glucosidase, and promotes glycogen reduction in a transgenic mouse model of Pompe disease. PLoS One. 9, e102092(2014).
- Siekierska, A. α-Galactosidase aggregation is a determinant of pharmacological chaperone efficacy on Fabry disease mutants. J Biol Chem. 287, 28386-28397 (2012).
- Parenti, G. Pharmacological enhancement of mutated alpha-glucosidase activity in fibroblasts from patients with Pompe disease. Mol Ther. 15, 508-514 (2007).
- Wu, X. A pharmacogenetic approach to identify mutant forms of α-galactosidase A that respond to a pharmacological chaperone for Fabry disease. Hum Mutat. 32, 965-977 (2011).
- Lukas, J. Functional characterisation of alpha-galactosidase a mutations as a basis for a new classification system in fabry disease. PLoS Genet. 9, e1003632(2013).
- Andreotti, G., Citro, V., Correra, A., Cubellis, M. V. A thermodynamic assay to test pharmacological chaperones for Fabry disease. Biochim Biophys Acta. 1840, 1214-1224 (2014).
- , https://www.google.ch/patents/US9095584 (2017).
- Lukas, J., et al. Enzyme enhancers for the treatment of Fabry and Pompe disease. Mol Ther. 23, 456-4564 (2015).
- , http://www.genomics.agilent.com/primerDesignProgram.jsp (2017).
- Yam, G. H., Bosshard, N., Zuber, C., Steinmann, B., Roth, J. Pharmacological chaperone corrects lysosomal storage in Fabry disease caused by trafficking-incompetent variants. Am J Physiol Cell Physiol. 290, C1076-C1082 (2006).
- Shin, S. H., et al. Screening for pharmacological chaperones in Fabry disease. Biochem Biophys Res Commun. 359, 168-173 (2007).
- Shin, S. H., et al. Prediction of response of mutated alpha-galactosidase A to a pharmacological chaperone. Pharmacogenet Genomics. 18, 773-7780 (2008).
- Filoni, C., et al. Functional studies of new GLA gene mutations leading to conformational Fabry disease. Biochim Biophys Acta. 1802, 247-252 (2010).
- Citro, V. The Large Phenotypic Spectrum of Fabry Disease Requires Graduated Diagnosis and Personalized Therapy: A Meta-Analysis Can Help to Differentiate Missense Mutations. Int J Mol Sci. 17, (2016).
- Cammisa, M., Correra, A., Andreotti, G., Cubellis, M. V. Fabry_CEP: a tool to identify Fabry mutations responsive to pharmacological chaperones. Orphanet J Rare Dis. 8, 111(2013).
- Leinekugel, P., Michel, S., Conzelmann, E., Sandhoff, K. Quantitative correlation between the residual activity of beta-hexosaminidase A and arylsulfatase A and the severity of the resulting lysosomal storage disease. Hum Genet. 88, 513-523 (1992).
- Germain, D. P. Safety and pharmacodynamic effects of a pharmacological chaperone on α-galactosidase A activity and globotriaosylceramide clearance in Fabry disease: report from two phase 2 clinical studies. Orphanet J Rare Dis. 7, 91(2012).
- Hughes, D. A., et al. Oral pharmacological chaperone migalastat compared with enzyme replacement therapy in Fabry disease: 18-month results from the randomised phase III ATTRACT study. J Med Genet. 54, 288-296 (2017).
- Parenti, G., Andria, G., Valenzano, K. J. Pharmacological Chaperone Therapy: Preclinical Development, Clinical Translation, and Prospects for the Treatment of Lysosomal Storage Disorders. Mol Ther. 23, 1138-1148 (2015).
- Parenti, G., et al. A Chaperone Enhances Blood α-Glucosidase Activity in Pompe Disease Patients Treated With Enzyme Replacement Therapy. Mol Ther. 22, 2004-2012 (2014).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
