Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies

Stéphane Isabettini; Mirjam E. Baumgartner; Peter Fischer; Erich J. Windhab; Marianne Liebi; Simon Kuster

doi:10.3791/56812

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies

7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/56812

⸱

3 januari 2018

Stéphane Isabettini¹ , Mirjam E. Baumgartner¹ , Peter Fischer¹ , Erich J. Windhab¹ , Marianne Liebi² , Simon Kuster¹

¹Laboratory of Food Process Engineering, ETH Zurich, ²MAX IV Laboratory, Lund University

In dit artikel

Samenvatting

Fabricage procedures voor zeer magnetisch responsieve lanthanide ion chelaat polymolecular assembly's worden gepresenteerd. De magnetische reactie wordt bepaald door de grootte van de vergadering, die is afgestemd door extrusie via nanopore membranen. De assemblages magnetische alignability en temperatuur-geïnduceerde structurele veranderingen worden gecontroleerd door de dubbele breking metingen, een gratis techniek om nucleaire magnetische resonantie en kleine hoek neutronen verstrooiing.

Samenvatting

Bicelles zijn afstembare schijf-achtige polymolecular assembly's gevormd uit een grote verscheidenheid van lipide mengsels. Toepassingen variëren van membraan eiwit structurele studies door nucleaire magnetische resonantie (NMR) tot nanotechnologische ontwikkelingen, met inbegrip van de vorming van optisch actieve en magnetisch schakelbare gels. Dergelijke technologieën vereisen hoge controle van de grootte van de vergadering, de magnetische reactie en de warmteweerstand. Mengsels van 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DMPC) en haar lanthanide-ion (Ln^{3 +}) chelaat fosfolipide conjugaat, 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-phospho-ethanolamine-diethyleenglycol triaminepentaacetate () DMPE-DTPA), assembleren in zeer magnetisch responsieve assemblages zoals DMPC/DMPE-DTPA/Ln^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) bicelles. Invoering van cholesterol (Chol-OH) en steroïde derivaten in de dubbelgelaagde resultaten in een andere set van assembly's bieden unieke fysisch-chemische eigenschappen. Voor een bepaald lipide-samenstelling is de magnetische alignability evenredig aan de grootte van de bicelle. De kleurverandering van Ln^{3 +} resulteert in ongekende magnetische reacties in termen van zowel de omvang als de uitlijning richting. De thermo-omkeerbare ineenstorting van de schijf-achtige structuren in blaasjes op verwarming kunt afstemming van de vergaderingen afmetingen door extrusie via membraanfilters met gedefinieerde porie maten. Het magnetisch alignable bicelles worden geregenereerd door afkoeling tot 5 ° C, wat resulteert in vergadering afmetingen gedefinieerd door het blaasje precursoren. Hierin, deze procedure fabricage wordt uitgelegd en de magnetische alignability van de assembly's wordt gekwantificeerd door dubbele breking metingen onder een 5.5 T magnetisch veld. Het signaal van de dubbele breking, afkomstig uit de fosfolipide dubbelgelaagde, verder kan polymolecular veranderingen in de dubbelgelaagde. Deze eenvoudige techniek is complementair aan NMR experimenten die algemeen werkzaam zijn te karakteriseren van bicelles.

Inleiding

Bicelles zijn polymolecular schijf-achtige assemblages verkregen uit talrijke lipide-mengsels. ¹ ^, ² ^, ³ ^, ⁴ ^, ⁵ zijn ze veel gebruikt voor de structurele karakterisering van membraan biomoleculen door NMR spectroscopie. ⁶ ^, ⁷ echter, recente inspanningen willen uitbreiden op het gebied van mogelijke toepassingen. ⁵ ^, ⁸ ^, ⁹ de meest bestudeerde bicelle systeem bestaat uit een mengsel van 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DMPC), die deel uitmaken van het vlakke deel van de vergadering en 1,2-dihexanoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DHPC) Fosfolipide die betrekking hebben op de rand. ¹ ^, ² ^, ³ de moleculaire geometrie van de fosfolipiden componeren het dubbelgelaagde dicteren de architectuur van de structuur van zelf geassembleerde polymolecular. ⁴ ^, ⁵ ter vervanging van DHPC met DMPE-DTPA genereert zeer magnetisch responsieve en afstembare bicelle systemen. ¹⁰ ^, ¹¹ DMPC/DMPE-DTPA/Ln^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) bicelles koppelen met veel meer paramagnetisch lanthanide ionen (Ln^{3 +}) op van de dubbelgelaagde oppervlak, wat resulteert in een verbeterde magnetische reactie. ¹⁰ voorts, ter vervanging van de in water oplosbare DHPC moleculen met DMPE-DTPA/Ln^{3 +} maakt de vorming van verdunning-resistente bicelles. ¹¹

De magnetische alignability van vlakke polymolecular assembly's wordt gedicteerd door hun algemeen magnetische energie,

figure-introduction-1 (1)

Indien B de magnetische veldsterkte is, figure-introduction-2 de magnetische constant, n het nummer van de aggregatie en figure-introduction-3 de anisotropie van de moleculaire diamagnetisch gevoeligheid van het samenstellen van de dubbelgelaagde lipiden. Daarom is de reactie van DMPC/DMPE-DTPA/Ln^{3 +} bicelles op magnetische velden op maat door hun grootte (totale getal n) en de moleculaire diamagnetisch gevoeligheid anisotropie Δχ. De laatste wordt gemakkelijk bereikt door het veranderen van de aard van de chelaat Ln^{3 +}. ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁴ ^, ¹⁵ Introducing cholesterol (Chol-OH) of andere steroïde derivaten in de dubbelgelaagde biedt de mogelijkheid van tuning van zowel de statistische getal n en de Δχ van de magnetische gevoeligheid van de vergaderingen. ¹¹ ^, ¹⁶ ^, ¹⁷ ^, ¹⁸ ^, ¹⁹ voor de samenstelling van een bepaald lipide, grotere assemblages bevatten meer lipiden die kunnen bijdragen aan de E-_mag (grotere statistische getal n), wat resulteert in meer alignable soorten. De grootte van DMPC/DHPC bicelles, bijvoorbeeld, wordt conventioneel gecontroleerd door optimalisatie van het componeren vetgehalte voor verhouding of totaal. ²⁰ ^, ²¹ ^, ²² maar dit mogelijk in DMPC/DMPE-DTPA/Ln^{3 +} bicelles is, hun thermo-omkeerbare transformatie van bicelle naar blaasjes op verwarming aanbiedingen toegevoegd spastische opties. Mechanische betekent zoals extrusie via membraanfilters kunt vormgeven van de blaasjes. Het magnetisch alignable bicelles op koeling tot 5 ° C worden geregenereerd en hun afmetingen van het vesikel precursors worden gedicteerd. ¹¹ Herein, richten we ons op het potentieel van mechanische fabricage procedures met DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) of DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) als referentiesystemen. Het proces werkt naar analogie bij het werken met andere Ln^{3 +} dan Tm^{3 +}. Het brede scala van mogelijkheden die worden geboden door deze technieken zijn gemarkeerd in Figuur 1 en elders uitvoerig besproken. ²³

figure-introduction-4
Figuur 1: Schematisch overzicht van de mogelijke fabricage procedures. De bestudeerde magnetisch alignable Ln^{3 +} chelaatvormers polymolecular assembly's zijn samengesteld uit beide DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) of DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5). De droge lipide-film is met een 50 mM fosfaatbuffer op een pH van 7,4 gehydrateerd en het totale vetgehalte is 15 mM. Een effectieve hydratatie van de lipide-film vereist bevriezen of ontdooien cycli (FT) of verwarming en koeling cycli (H & C). H & C cycli zijn nodig om te regenereren monsters na de laatste vorst ontdooien stap, of te regenereren monsters bevroren gehouden over een langere periode van tijd als ze moeten worden gebruikt zonder verdere extrusie. Deze stappen worden uitvoerig besproken door Isabettini et al. ²³ maximaal alignable polymolecular assemblages resultaat wordt bereikt, het leveren van de vergadering van de verschillende platforms gebaseerd op de samenstelling van lipide. De grootte van de bicelle en de magnetische alignability is afstembare door extrusie (Ext) via nanopore membraanfilters. De gepresenteerde uitlijning factoren A_f werden berekend op basis van 2D kleine hoek neutronen verstrooiing (SANS) patronen van een DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) monster geëxtrudeerd via 800, 400, 200 of 100 nm poriën. SANS metingen zijn een complementaire middelen van het kwantificeren van de uitlijning van de bicelle die niet aan bod komt in meer detail hierin. ¹¹ ^, ¹⁶ de A_f varieert van -1 (parallelle neutronen verstrooiing of loodrecht uitlijning van de bicelles met betrekking tot de richting van het magnetisch veld) op 0 voor isotrope verstrooiing.Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

De structuur van bicelles is uitgebreid bestudeerd door een breed scala van karakterisering technieken. ¹³ de uitlijning van de bicelles blootgesteld aan een magnetisch veld heeft gekwantificeerd met behulp van NMR-spectroscopie of kleine hoek neutronen verstrooiing (SANS) experimenten. ⁵ ^, ¹⁰ ^, ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁶ ^, ¹⁷ ^, ¹⁸ ^, ¹⁹ ^, ²⁴ ^, ²⁵ de verschuiving en de verbreding van de pieken van de NMR voordoet in aanwezigheid van Ln^{3 +} zijn echter ernstige beperkingen aan de methode. ¹⁵ ^, ²⁶ ^, ²⁷ ^, ²⁸ hoewel SANS experimenten lijden niet onder deze beperking, alternatieve en toegankelijker technieken zijn wenselijk voor routinematige kwantificering van magnetisch geïnduceerde uitlijning van assemblages in oplossing. Dubbele breking metingen zijn een levensvatbare en relatief eenvoudig alternatief. Analoog aan NMR experimenten onthullen dubbele breking metingen waardevolle informatie over lipide herschikkingen en lipide fasen die zich voordoen in de dubbelgelaagde. Bovendien, meetkundige transformaties die zich voordoen in de vergadering van de polymolecular met veranderlijke omgevingsomstandigheden zoals temperatuur worden gecontroleerd. ¹¹ ^, ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁶ magnetisch geïnduceerde dubbele breking Δn′ is gebruikt voor het bestuderen van verschillende soorten fosfolipide systemen. ¹³ ^, ²⁹ ^, ³⁰ dubbele breking metingen gebaseerd op de techniek van de fase modulatie in een magnetisch veld is een haalbare methode om de oriëntatie van bicelles detecteren. ¹² ^, ¹⁶ ^, ¹⁸ ^, ²⁹ ^, ³¹ ^, ³² de mogelijkheid onderzoeken van bicelles met dubbele breking in hoge magnetische velden tot 35 T werd ook aangetoond door M. Liebi et al. ¹³

Als gepolariseerd licht een anisotrope materiaal binnenkomt, zal het worden gebroken in een gewone en buitengewone golf. ¹¹ de twee golven hebben verschillende snelheden en in fase door een δ retardatie worden verschoven. De mate van vertraging δ wordt gemeten en omgezet in een dubbele breking signaal figure-introduction-5 te kwantificeren van de mate van anisotropie in het materiaal met

figure-introduction-6 (2)

waar is λ de golflengte van de laser en d de dikte van het monster. Fosfolipiden zijn optisch anisotrope en hun optische as samenvalt met hun lange moleculaire assen, parallel aan de staarten van koolwaterstof. ¹¹ ^, ¹² geen vertraging wordt gemeten als de fosfolipiden willekeurig in oplossing georiënteerde zijn. Vertraging wordt gemeten als fosfolipiden, parallel met elkaar worden uitgelijnd. Het magnetisch geïnduceerde dubbele breking figure-introduction-7 kan hebben een positief of negatief teken afhankelijk van de oriëntatie van de moleculen in het magnetisch veld; Zie Figuur 2. Fosfolipiden parallel uitgelijnd met de x-as zal resulteren in een negatieve figure-introduction-8 , terwijl die uitgelijnd langs de z-as in een positieve resulteren figure-introduction-9 . Geen dubbele breking is waargenomen wanneer de optische as samenvalt met de richting van licht propagatie zoals de fosfolipide uitgelijnd evenwijdig aan de y-as.

figure-introduction-10
Figuur 2: Aanpassing van de fosfolipiden en het bijbehorende teken van het magnetisch geïnduceerde dubbele breking figure-introduction-11 . Het teken van de gemeten figure-introduction-12 is afhankelijk van de oriëntatie van de fosfolipide in het magnetisch veld. Onderbroken lijnen geven de optische as van het molecuul. Het licht is gepolariseerd op 45° en zich voortplant in de y-richting. Het magnetisch veld B is in de z-richting. Dit cijfer is gewijzigd van M. Liebi. ¹¹ Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

In het geval van een isotroop colloïdale suspensie van bicelles zullen de oriëntatie geïnduceerd door de rangschikking van de fosfolipiden in de dubbelgelaagde verloren gaan, de retardatie δ zeroing. De bicelles moet ook uitlijnen om te oriënteren de optisch actieve fosfolipiden in hun bilayers, waardoor een retardatie δ van de gepolariseerd licht. Dubbele breking is derhalve een gevoelig instrument te kwantificeren van de magnetische alignability van de polymolecular-assembly's. Bicelles uitgelijnd loodrecht op het magnetisch veld resulteert in een positieve figure-introduction-13 , terwijl die parallel uitgelijnd in een negatieve resulteert figure-introduction-14 . Het bord hangt af van de uitlijning van de setup en kan worden gecontroleerd met een referentiemonster.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. fabricage procedure voor DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) en DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) polymolecular samenstellen

Voorlopige preparaten
1. Wassen alle het glaswerk door te spoelen eenmaal met ethanol gestabiliseerd chloroform (> 99% chloroform) en droog met perslucht.
2. Produceren van 2 verschillende 10 mg/mL voorraadoplossingen van DMPC en DMPE-DTPA in ethanol-gestabiliseerde chloroform (> 99% chloroform), een 10 mM stamoplossing van Chol-OH in ethanol-gestabiliseerde chloroform (> 99% chloroform) en een stamoplossing van 10 mM voor TmCl₃ in methanol.
3. Bereid een 50 mM fosfaatbuffer op een pH van 7,4 door het mengen van 0.121 g natrium Natriumdiwaterstoffosfaat fosfaat (dihydraat) p.a. en 0.599 g watervrij di-natrium waterstof fosfaat in 100 mL ultrazuiver H₂O.
Voorbereiding van de droge lipide-film
1. Weeg de vereiste hoeveelheden amfifielen (DMPC, DMPE-DTPA en optioneel Chol-OH) en Ln^{3 +} voorraadoplossingen in aparte 3 mL glas module-cups met een 2,5 mL glas spuit.
  1. Voor een 3 mL monstervolume van DMPC/DMPE-DTPA / Tm3 + (molaire verhouding 4:1:1, totale vetgehalte van 15 mM), wegen in 3.6435 g van de stockoplossing van DMPC, 1.4731 g van de DMPE-DTPA stockoplossing en 0.7126 g van de stockoplossing van de₃ TmCl.
  2. Voor een 3 mL monstervolume van DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5, totale vetgehalte van 15 mM), weeg 2.9148 g van de stockoplossing van DMPC, 1.4731 g van de DMPE-DTPA stockoplossing, 1.0749 g van de stockoplossing Chol-OH en 0.7126 g de₃ stockoplossing van TmCl.
    Let op: Chloroform en methanol zijn giftig en vluchtige bij kamertemperatuur. Werken in een zuurkast en snel verder met de massa-metingen.
2. De inhoud van de module-cups overbrengen in een 25 mL ronde onderkant kolf. Spoel elke module-cup in de kolf met ronde bodem met ongeveer 2,5 mL van het overeenkomstige oplosmiddel.
3. Verwijder het oplosmiddel onder vacuüm in een rotatieverdamper bij 40 ° C. Instellen van de eerste druk tot 30.000 Pa totdat het grootste deel van het oplosmiddel wordt verwijderd. De druk verminderen tot 100 Pa en droog het monster onder rotatie voor een minimum van 2 h. verkrijgen een uniforme droge lipide-film over de glazen wanden van de kolf.
4. Plaats de droge lipide-film gedurende 1 minuut onder een gestage stroom van argon te voorkomen van lipide oxidatie in de lucht en slaan het monster in de vriezer vóór rehydratie.
Hydratatie van de droge lipide-film
1. Voeg de 3 mL fosfaatbuffer toe aan de kolf met ronde bodem te bereiken van een totale vetgehalte van 15 mM.
2. Verrichten van een bevriezen-ontdooien (FT) cyclus door het kelderen van de erlenmeyer onder rotatie in vloeibare stikstof tot het grondig (vloeibare stikstof stopt het koken) is bevroren, dan warmte terug tot 60 ° C door het plaatsen van het monster gedurende 5 minuten in een waterbad, zwenken van de kolf continu steun het smeltproces. Toepassing van de 30 s van vortexing vóór elke bevriezing cyclus wanneer het monster vloeibare is op de steun van de hydratatie van de lipide-film.
  Opmerking: Geen lipide-film moet worden weergegeven op de wanden van de kolf na de tweede bevriezen dooiende cyclus.
3. Herhaal 1.3.2 in totaal vijf keer. Sluit de kolf of fles met een cap te vermijden geen onnodige verdamping van de fosfaatbuffer wanneer het monster heet. Het protocol kan worden onderbroken wanneer de steekproef is bevroren.
4. Gaat u verder met twee verwarming en koeling (H & C) cycli stabiliseren van het monster uit de laatste bevriezing stap of bevroren voor maximaal twee maanden. Het verwarmen van het monster, tot 40 of 60 ° C voor DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) of DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5), respectievelijk, voordat u gaat koelen tot 5 ° C op 1 ° C/min. handhaven het monster 5 min op het maximum en minimum temperaturen van de cyclus.
5. Nu, of het signaal van de dubbele breking van het monster in een extern magnetisch veld (stap 2) bepalen of verdere extruderen het monster om te stemmen op de afmetingen van de bicelle en de magnetische alignability (stap 1.4).
  Opmerking: DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) monsters bestaan voornamelijk uit bicelles met een hydrodynamische middendiameter D_H van 70 nm zoals geopenbaard door een aantal verdeling verkregen Dynamische lichtverstrooiing (DLS) metingen bij 5 ° C. Deze monsters bevatten ook grotere polymolecular samenstellingen met een gemiddelde D_H van 500 nm zoals geopenbaard door een verdeling van de intensiteit. DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) monsters zijn zeer polydisperse in grootte met de typische intensiteit distributies onthullen een gemiddelde D_H van 700 nm, terwijl het aantal distributies een populatie gedomineerd onthullen door kleinere bicelles in het bereik van de grootte van 200 nm. Meer gedetailleerde grootte distributies en cryo Transmissie Electronenmicroscopie beelden van deze monsters zijn gemeld door Isabettini et al. ²³
Extrusie van de polymolecular-assembly's.
1. Bouw de extruder zoals afgebeeld in Figuur 3. Handschoenen en pincet gebruiken met de bescherming van silica buizen voor behandeling. Natte het koffiefilter (5) met een paar druppels van de buffer toe voor een optimale plaatsing van de membraanfilter (6). Zorg ervoor dat het papier heeft geen plooien na het plaatsen van de o-ring (7) op de top.
  Opmerking: Het extrusieproces werd getest op membraanfilters (6) met een diameter van de porie van 800, 400, 200 en 100 nm; Zie Figuur 7.
2. Instellen van het waterbad tot 40 ° C voor DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) monsters of 60 ° C voor DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) monsters te garanderen van de vorming van extrudeerbare blaasjes.
3. De extruder verbinden met een hydrofoor stikstof fles met behulp van een hogedruk PVC-buis (> 4 MPa) uitgerust met serto adapters en extruderen van het vloeibare materiaal door het membraan. 1 MPa druk is meestal vereist voor extrusie via membraanfilters (6) met een porie-diameter van 200 nm en hoger. 1,5 tot 2,5 MPa zijn vereist voor de kleinere membraanfilters (6) met een diameter van de porie van 100 nm.
  Opmerking: Wijzig de membraanfilter als abnormaal hoge druk (> 2.5 MPa) zijn nodig om de diepte van het monster (dit is het eerste teken van verstopping).
4. Open het klepje (10) en voeg het monster met behulp van een precisiepipet 2 mL glas. Vervolgens sluit de klep (10) en open de klep van de druk (12) terwijl het monsterbuisje stopcontact (2). Sluit de klep van de druk (12) na de extrusie-cyclus is voltooid, vent en gaat u verder met de volgende cyclus.
  Opmerking: Laat niet het monster in contact te lang met het hete dubbelwandige vaartuig (8) om te voorkomen dat buitensporige monster verlies door verdamping.

30-60-s is genoeg tijd voor een 3 mL monster te equilibreer in de extruder voor het openen van de klep van de druk (12).

Ga naar 10 extrusie cycli voor een bepaalde membraan porie dimensie zoals afgebeeld in Figuur 3. De meeste bicelle systemen zijn 10 keer geëxtrudeerd door membranen met een diameter van de porie van 200 en een ander 10 keer door membranen met een diameter van de porie van 100 nm, monster vergelijkbaarheid te garanderen.

Nu, bepalen het signaal van de dubbele breking van het monster in een extern magnetisch veld (stap 2).

figure-protocol-1
Figuur 3: laboratorium extruder gebruikt voor bicelle en vesikel preparaten. De extruder is samengesteld uit de bodem omhoog: (1) mount, (2) het verzamelen van ruimte met een 2.4 mm (binnendiameter) kunststof uitlaat buis en o-ring, (3) en (4) grote en kleine stabiliserende mesh, (5) filtreerpapier (6) de membraanfilters, o-ring (7), (8) dubbelwandige schepen, monster (9. ) top cover met inlaat en druk aansluiting, (10) cover, (11) vlinder schroeven, (12) druk ventiel. Een schets van de geassembleerde extruder wordt weergegeven van de rechts-rechter-zijde. De stikstofgas (N₂) wordt geleverd door een drukvat en de dubbelwandige vaartuig (9) is aangesloten op een waterbad voor temperatuurregeling. Het monster ondergaat 10 extrusie cycli voor elk Filterdiameter porie gegeven membraan (monster pad getoond in blauw). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

2. dubbele breking metingen van DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) en DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 16:4:5:5) polymolecular samenstellen.

Bouwen en aansluiten van de dubbele breking setup als weergegeven in Figuur 4 en spanning aan de respectieve elektronische elementen leveren. Plaats niet de PEM, het monster en de tweede polarisator op het pad van de laser in dit stadium. Vermijd opsporen van laser back-verstrooid licht bedekken lichtweerkaatsende oppervlakken, bijvoorbeeld aluminium spiegel houders, met zwart papier.
Aanpassen van de spiegels om te maximaliseren van de intensiteit van de laser op de detector, die wordt vertegenwoordigd door de intensiteit van de gelijkstroom verkregen van het low-pass filter in figuur 4B.
Let op: Passende Oogbescherming dragen bij het aanpassen van de spiegels en overleg plegen met een laser veiligheid instructeur als manipuleren van lasers voor de eerste keer.
Zet de eerste gekruiste lineaire polarisator (onderhouden loodrecht op de invallende laserstraal) om te maximaliseren de .

figure-protocol-4
Figuur 4: schematische weergave van de dubbele breking setup en aansluitingen voor de optische signalen. A) een supergeleidende elektromagneet levert een 5.5 T magnetisch veld. Het licht van een diodelaser op 635 nm is gepolariseerd door twee gekruiste polarisatoren. Een fotoelasto modulator PEM-90 werkt op 50 KHz met een amplitude van een₀ van 2.405 rad en tussen de twee polarisatoren geplaatst. Het monster ligt in de magneet tussen de PEM en de tweede polarisator. Non-polariserende spiegels begeleiden van het licht door de verschillende elementen en tenslotte wordt gedetecteerd door een foto-detector. De eerste en tweede-harmonische figure-protocol-5 en figure-protocol-6 van het AC-signaal worden gecontroleerd, waardoor de berekening van het signaal van de dubbele breking geven informatie over de magnetische alignability voor de Ln^{3 +} chelaat polymolecular assembly's. De monster cuvette is verbonden met een extern waterbad voor temperatuurregeling (blauw). De temperatuur van het monster wordt gecontroleerd met een temperatuursonde (rood). B) het signaal van de foto detector wordt ingevoerd in een tweede bestelling Sallen-Key low-pass filter (24 V AC voeding) met een grensfrequentie van 360 Hz via een ±12 V DC power supply braded kabel (3). Het low-pass filter haalt het onderdeel DC figure-protocol-7 en levert het aan de PC-interface (4) via een BNC 50 Ω kabel. Het signaal van de foto detector wordt geleverd aan de twee versterkers van lock-in (die de eerste en tweede-harmonische uittreksel figure-protocol-8 en figure-protocol-9 ) via een BNC 50 Ω kabel (1) & (2). De harmonische intensiteiten worden gedetecteerd door een fase-gevoelige detectie. Bijgevolg wordt de PEM-signaal gebruikt als referentie signaal voor de lock-in versterkers (1f-output van de PEM in de eerste versterker lock-in en 2f-uitgang in de tweede, verbonden met BNC Kabels met 50 Ω). De uitgangssignalen worden geleverd aan de eenheid van de PC-interface via BNC 50 Ω kabels. Analoge acquisitie eenheden GVB-AI-110 en GVB-CB-1 digitaliseren het signaal dat wordt overgebracht naar de computer via een RS-232-kabel voor het toezicht. De temperatuurvoeler type K is ook verbonden met de PC-interface-eenheid waar analoge acquisitie eenheden GVB-CB-3 en GVB-TC-120 het signaal digitaliseren voor het overdragen naar de computer via een RS-232-kabel voor het toezicht. C) foto van de schematische setup gepresenteerd in B. sleutelelementen zijn geïdentificeerd met overeenkomstige getallen van 1 tot 4. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Plaats de tweede gekruiste lineaire polarisator loodrecht op de invallende laserstraal, zoals weergegeven in figuur 4A. Minimaliseer de door de vaststelling van de tweede polarisator op een hoek van 90° ten opzichte van de eerste.
Plaats de fotoelasto modulator (PEM) bij 0° tussen de twee gekruiste lineaire polarisatoren en loodrecht op de invallende laserstraal zoals weergegeven in figuur 4A. Pas de PEM op een frequentie van 50 kHz en amplitude A0 tot 2.405 rad zoals weergegeven in figuur 5A. Dit maakt het onderdeel DC onafhankelijk van de dubbele breking en verhoogt de .
Opmerking: De optische as van de PEM kan worden afgestemd door een paar graden te handhaven van een constante in de lucht voor het meten van een monster.
1 uur wachten na het aanzetten van de laser en elektronische apparatuur te stabiliseren van het signaal.

Het signaal is stabiel, zodra de auto-fasering van de lock-in versterkers constant blijft.

Leg het monster in een temperatuur gecontroleerde kwarts Cuvet met een weglengte van 10 mm en het verbinden met een extern waterbad in eerste instantie ingesteld op 5 ° C.

Plaats een 0,5 mm dik type K-thermokoppel (temperatuurvoeler) rechtstreeks in de steekproef om de temperatuur van het monster te bewaken. Controleer of dat de sonde niet met het laserlicht interfereert door een Witboek in het pad van de laser (na de meetcel) te plaatsen en op zoek naar schaduwen veroorzaakt door de sonde.
Opmerking: Er is een 2-3 ° C verschil tussen de opname van de temperatuur van het waterbad en de temperatuur van het monster.

Plaats de cuvette in de boring van de magneet, zoals weergegeven in figuur 4A. Het laserlicht wordt horizontaal wordt doorgegeven door middel van het monster afgebogen door niet-polariserende spiegels en gedetecteerd door een foto-detector.
Opmerking: De laser is gericht naar beneden, door middel van het monster, en maak een back-up van hetzelfde pad ter verantwoording voor Faraday effecten (dat wil zeggen de draaihoek van het vliegtuig van de polarisatie van licht veroorzaakt door het magnetisch veld wanneer naar beneden wordt geannuleerd wanneer terug komen in de tegenovergestelde richting).

Toepassing van een constante luchtstroom van samengeperste lucht bij kamertemperatuur en 10000 Pa op de cuvette om condensatie van water op de celwand, die zou verminderen de intensiteit van het signaal en ruis te verhogen. Dit is vooral belangrijk bij het meten bij 5 ° C.

Detecteren van de eerste en tweede-harmonische figure-protocol-13

van het AC-signaal met twee lock-in versterkers. Auto fase de versterkers lock-in door op de knop (2) weergegeven in figuur 5B en de gevoeligheid zoals weergegeven in figuur 5B (1). Zorg ervoor dat er zich niet meer dan vier rode balken op de versterkers zoals weergegeven in figuur 5B (3) om te voorkomen dat overbelasting van het signaal. Toon waas naar de werknemer gevoeligheid voor beide versterkers lock-in in het programma Tesla_Magnet_Const_V092 zoals weergegeven in figuur 5C (8). Het programma wordt geleverd als aanvullende informatie.

Oprit het magnetisch veld tot 5.5 T door te leveren aan de magneet via het programma Tesla_Magnet_Const_V092 huidige zoals weergegeven in figuur 5C (5).

Verkrijgen van de dubbele breking figure-protocol-15

met behulp van vergelijking 2, waar de vertraging wordt berekend met
figure-protocol-16

(3)
waar

zijn Bessel-functies van de eerste soort, met figure-protocol-19

. ¹¹ ^, ¹³ ^, ¹⁸ ^, ³³ ^, ³⁴ plot vertraging in het programma Tesla_Magnet_Const_V092, zoals getoond in figuur 5C (4).
Opmerking: De retardatie geboden door het programma mag niet worden gebruikt voor de berekening van de dubbele breking signaal als de twee lock-in versterkers niet op dezelfde gevoeligheid werken (zie stap 2.12). De gelogde harmonische intensiteiten figure-protocol-21

moet worden vermenigvuldigd met de gevoeligheid van de versterkers lock-in om de juiste afmetingen. Bovendien, het signaal van de dubbele breking gemeten onder een magneet veld moet worden genormaliseerd door af te trekken van het signaal van de gemiddelde dubbele breking verkregen bij 0 T.

Controleren van het monster dubbele breking signaal bij constante of het wijzigen van de temperatuur (1 ° C/min) door het reguleren van de temperatuur van het waterbad aangesloten op de cuvette afgebeeld in Figuur 4.

Meld u de experimentele gegevens door het invullen in de experimentele beschrijving in figuur 5C (8), de naam van een bestand in (9), en druk op de knop 'START aanmelden' (10).

figure-protocol-23
Figuur 5: illustraties van de werknemer instellingen en programma screenshots. A) PEM instellingen: retardatie 2.405 rad, golflengte van 635 nm, frequentie 50 Hz. White cirkels aangeven welke instellingen u moet worden geactiveerd (USR = door gebruiker gedefinieerde retardatie, LOC = lokale bewerkingsmodus). B) Lock-in de instellingen van de versterker. De gevoeligheid (1) moet voor iedere meting zoals vereist in stap 2.11 worden geselecteerd. Er mag niet meer dan vier rode balken op het display (3) om te voorkomen dat een signaal overbelasting. Een overbelasting treedt op wanneer de rode leidde in (1) ingeschakeld, waardoor een meting onmogelijk. Druk op auto fase (2) vóór elke meting. C) Screenshots van het programma Tesla_Magnet_Const_V092 als aanvullende informatie verstrekt. Het programma staat controle van het magnetisch veld en opname van alle het signaal als functie van de tijd uitgangen. De magnetische veldsterkte en de temperatuur van het monster worden uitgezet in (1). De eerste en tweede-harmonische figure-protocol-24 en figure-protocol-25 van het signaal van de AC gemeten door de twee lock-in versterkers worden uitgezet in (2). De intensiteit van de gelijkstroom figure-protocol-26 in (3) worden uitgezet. De achterstand is berekend zoals beschreven in stap 2.13 en die zijn uitgezet in (4). De magnetische veldsterkte is gevestigd in (5). De rechtstreekse meting van de temperatuur opgenomen door het thermokoppel Type K wordt gepresenteerd in (6) en de uitgangssignalen ( figure-protocol-27 en figure-protocol-28 ) in (7). Extra voorbeelden kan worden ingevoegd in (8) zoals de werknemer gevoeligheid van de versterkers, monster naam, enz. De gegevens kunnen worden geregistreerd en geëxporteerd naar een txt-bestand waarin (9). Starten en stoppen van de data-acquisitie met de "START" logboekknoop (10). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Het signaal van de dubbele breking van een niet-geëxtrudeerde DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (molaire verhouding 4:1:1) monster werd gecontroleerd in het kader een 5.5 T magnetisch veld tijdens een verwarming en koeling van de cyclus van 5 tot 40 ° C en terug met een snelheid van 1 ° C/min (Figuur 6). De dubbele breking resultaten bevestigd hoge magnetische uitlijning bij 5 ° C met een waarde van 1,5 x 10^-5, twee keer zo sterk wat betreft de gemel...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Een gedetailleerd overzicht van hoe de dubbele breking metingen werden gebruikt in combinatie met SANS experimenten voor de evaluatie van methoden voor het genereren van zeer magnetisch responsieve Ln^{3 +}chelaat fosfolipiden assemblages is in Isabettini et al. ²³ de voorgestelde fabricage-protocollen zijn ook van toepassing voor assembly's die zijn samengesteld uit de langere DPPC en DPPE-DTPA fosfolipiden of voor degenen met chemisch gemodificeerde steroïde derivaten in hun du...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs erkennen de Zwitserse National Science Foundation voor de financiering van SMhardBi (project nummer 200021_150088/1). De SANS experimenten werden uitgevoerd bij de Zwitserse spallation neutron bron SINQ, Paul Scherrer Instute, Villigen, Zwitserland. Dr. Joachim Kohlbrecher danken de auteurs hartelijk voor zijn leiding met de SANS-experimenten. De dubbele breking meting setup onder hoge magneetvelden is geïnspireerd vanuit de bestaande installatie op het Hoogveld magnetische laboratorium HFML, Nijmegen, Nederland. Wij danken Bruno Pfister voor zijn hulp bij de ontwikkeling van de elektronica van de dubbele breking setup, Jan Corsano en Daniel Kiechl voor de bouw van de kaders mooi fijn en facile uitlijning van de laser en Dr. Bernhard Koller voor lopende technische ondersteuning.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-fosfocholine (DMPC)	Avanti Polar Lipids	850345P	>99%
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamine-diethyleentreaminepentaacetaatzuur hexammoniumzout (DMPE-DTPA)	Avanti Polar Lipids	790535P	>99%
Thulium(III) chloride	Sigma-Aldrich	439649	watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis
Dysprosium(III) chloride	Sigma-Aldrich	325546	watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis
Ytterbium(III) chloride	Sigma-Aldrich	439614	watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis
Chloroform	Sigma-Aldrich	319988	bevat ethanol als stabilisator, ACS reagens, ≥99,8%
Methanol	Sigma-Aldrich	34860	≥99,9%
Cholesterol	Amresco	433	Ultra pure grade
D2O	ARMAR chemicals	1410	99,8 atom % D
Ultrazuiver water	Millipore		Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001)
elektronische pH meter	Metrohm	17440010
Whatmann Nuclepore 25 mm 100nm membraanfilter	VWR	515-2028
Whatmann Nuclepore 25 mm 200nm membraanfilter	VWR	515-2029
Whatmann Nuclepore 25 mm 400nm membraanfilter	VWR	515-2030
Whatmann Nuclepore 25 mm 800nm membraanfilter	VWR	515-2032
Whatmann Filterpapier	VWR	230600
25 ml rondbodemfles	VWR	201-1352	14/23 NS
3 ml glazen snap-cup	VWR	548-0554	ND18, 18x30mm
2,5 ml glazen spuit	Hamilton
Natriumdiwaterstoffosfaatdihydraat	Merk	1.06342	Zout gebruikt om fosfaatbuffer te maken
di-Natriumwaterstoffosfaat	Merk	1.06586	Zout gebruikt om fosfaatbuffer te maken
Vloeibare stikstof	Carbagas	-
Geperst stikstofgas	Carbagas	-	200 bar fles
Lipid Extruder 10 ml	Lipex	-	Volledig uitgerust met thermobarrel
Hogedruk PVC-buis	GR NETUM	-	moet meer dan 4 MPa weerstaan
Serto adapters	Sertot	-
Nitril handschoenen	VWR	-
2 ml glazen pipetten	VWR	612-1702	230 mm lang
Diode Laser	Newport	LPM635-25C
DSP Dual Phase Lock-in Versterker	SRS	SR830
Fotodiode Detector	Silonex Inc.	SLSD-71N5	5mm2, Silicon, foto-geleidend
5.5 T Cryogenic Magnetic	Cryogenic/Oerlikon AG	-	12 bar He-gekoeld. RW4000/6000 compressor, RGD 5/100 TA cryo-head
Tweede orde laagdoorlaatfilter	zelfgebouwd	-	Lineaire voeding 24V DC, tweede orde, Sallen Key, afsluitfrequentie 360 Hz, +/- 12V, max 10 mA
Fotoelastisch modulator	Hinds instruments	PEM-90
Glan-Thompson Calcite Polarisator	Newport	10GT04	25,4mm diameter
Kwarts monstercuvet	Hellma	165-10-40	temperatuurgestuurde cel, 0,8 ml, 10mm padlengte
Temperatuursonde	Thermocontrol	-	Type K, 0,5mm diameter, Thermocoax
Niet-polariserende spiegels	Newport	50326-1002	25,4mm
RS 232 kabels	National Instruments	189284-02	Voor aansluiting op de RS-232 poort aan de voorkant van Compact FieldPoint Controllers
BNC 50 Ω kabel en connectoren	National Instruments	763389-01
cFP-AI-110	National Instruments	777318-110	8-kanaals analoog spanning en stroom ingangsmodule voor Compact FieldPoint
cFP-CB-1	National Instruments	778618-01	Geïntegreerde Connector Blok voor bedrading naar Compact FieldPoint I/O
cFP-CB-3	National Instruments	778618-03	Geïntegreerde Isothermische Connector Blok voor bedrading van Thermokoppels naar de cFP-TC-120 Module
cFP-TC-120	National Instruments	777318-120	8-kanaals Thermokoppel ingangsmodule voor Compact FieldPoint
cFP-1804	National Instruments	779490-01	Ethernet/Seriele Interface voor NI Compact FieldPoint
LabView 2010	National Instruments	-
Industriële voeding	Traco Power	TCL 060-124	100-240V AC
Waterbad	Julabo	FP40-HE	gekoelde/verwarming circulator

Referenties

Sanders, C. R., Hare, B. J., Howard, K. P., Prestegard, J. H. Magnetically-oriented phospholipid micelles as a tool for the study of membrane-associated molecules. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 26, 421-444 (1994).
Glover, K. J., et al. Structural evaluation of phospholipid bicelles for solution-state studies of membrane-associated biomolecules. Biophys. J. 81 (4), 2163-2171 (2001).
Katsaras, J. H. T. A., Pencer, J., Nieh, M. -P. "Bicellar" lipid mixtures as used in biochemical and biophysical studies. Naturwissenschaften. 92 (8), 355-366 (2005).
Sanders, C. R., Prosser, R. S. Bicelles: a model membrane system for all seasons? Structure. 6 (10), 1227-1234 (1998).
Dürr, U. H. N., Soong, R., Ramamoorthy, A. When detergent meets bilayer: birth and coming of age of lipid bicelles. Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 69, 1-22 (2013).
Dürr, U. H. N., Gildenberg, M., Ramamoorthy, A. The magic of bicelles lights up membrane protein structure. Chem. Rev. 112, 6054-6074 (2012).
Ujwal, R., Abramson, J. High-throughput crystallization of membrane proteins using the lepidic bicelle method. J. Vis. Exp. (59), (2012).
Barbosa-Barros, L., et al. Bicelles: lipid nanostructured platforms with potential dermal applications. Small. 6, 807-818 (2012).
Lin, L., et al. Hybrid bicelles as a pH-sensitive nanocarrier for hydrophobic drug delivery. RSC Adv. 6, 79811-79821 (2016).
Beck, P., et al. Novel type of bicellar disks from a mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed lanthanides. Langmuir. 26 (8), 5382-5387 (2010).
Liebi, M. Tailored phospholipid bicelles to generate magnetically switchable material. , ETH Zürich. Switzerland. PhD Thesis n° 21048, ISBN 978-3-905609-55-4 (2013).
Liebi, M., et al. Magnetically enhanced bicelles delivering switchable anisotropy in optical gels. ACS. Appl. Mater. Interfaces. 6 (2), 1100-1105 (2014).
Liebi, M., et al. Alignment of bicelles studied with high-field magnetic birefringence and small-angle neutron scattering measurements. Langmuir. 29, 3467-3473 (2013).
Prosser, R. S., Hwang, J. S., Vold, R. R. Magnetically aligned phospholipid bilayers with positive ordering: a new model membrane system. Biophys J. 74, 2405-2418 (1998).
Prosser, R. S., Bryant, H., Bryant, R. G., Vold, R. R. Lanthanide chelates as bilayer alignment tools in NMR studies of membrane-associated peptides. J. Magn. Reson. 141, 256-260 (1999).
Liebi, M., Kohlbrecher, J., Ishikawa, T., Fischer, P., Walde, P., Windhab, E. J. Cholesterol increases the magnetic aligning of bicellar disks from an aqueous mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed thulium ions. Langmuir. 28 (29), 10905-10915 (2012).
Liebi, M., et al. Cholesterol-diethylenetriaminepentaacetate complexed with thulium ions integrated into bicelles to increase their magnetic alignability. J. Phys. Chem. B. 117 (47), 14743-14748 (2013).
Isabettini, S., et al. Tailoring bicelle morphology and thermal stability with lanthanide-chelating cholesterol conjugates. Langmuir. 32, 9005-9014 (2016).
Isabettini, S., et al. Mastering the magnetic susceptibility of magnetically responsive bicelles with 3β-Amino-5-Cholestene and complexed lanthanide ions. Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 10820-10824 (2017).
De Angelis, A. A., Opella, S. J. Bicelle samples for solid-state NMR of membrane proteins. Nat. Protoc. 2 (10), 2332-2338 (2007).
Son, W. S., et al. "Q-Titration" of long-chain and short-chain lipids differentiates between structured and mobile residues of membrane proteins studied in bicelles by solution NMR spectroscopy. J. Magn. Reson. 214, 111-118 (2012).
Avanti Polar Lipids Inc. Bicelle Preparation. , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/bicelle-preparation (2017).
Isabettini, S., et al. Methods for Generating Highly Magnetically Responsive Lanthanide-Chelating Phospholipid Polymolecular Assemblies. Langmuir. 33, 6363-6371 (2017).
Nieh, M. -P., Glinka, C. J., Krueger, S., Prosser, R. S., Katsaras, J. SANS study on the effect of lanthanide ions and charged lipids on the morphology of phospholipid mixtures. Biophysical Journal. 82 (5), 2487-2498 (2002).
Watts, A., Spooner, P. J. R. Phospholipid phase transitions as revealed by NMR. Chem. Phys. Lip. 57, 195-211 (1991).
Bleaney, B. Nuclear magnetic-resonance shifts in solution due to lanthanide ions. J. Magn. Reson. 8, 91-100 (1972).
Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. Solid-state NMR studies of magnetically aligned phospholipid membranes: taming lanthanides for membrane protein studies. Biochem. Cell Biol. 76, 443-451 (1998).
Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. Novel chelate-induced magnetic alignment of biological membranes. Biophys. J. 75, 2163-2169 (1998).
Shklyarevskiy, I. O., et al. Magnetic alignment of self-assembled anthracene organogel fibers. Langmuir. 21, 2108-2112 (2005).
Christianen, P. C. M., Shklyarevskiy, I. O., Boamfa, M. I., Maan, J. C. Alignment of molecular materials in high magnetic fields. Physica B: Condens. Matter. 346, 255-261 (2004).
Maret, G., Dransfeld, K. Biomolecules and polymers in high steady magnetic fields. Top. App. Phys. 57, 143-204 (1985).
Gielen, J. C., Shklyarevskiy, I. O., Schenning, A. P. H. J., Christianen, P. C. M., Maan, J. C. Using magnetic birefringence to determine the molecular arrangement of supramolecular nanostructures. Sci. Tech. Adv. Mater. 10 (1), 014601(2009).
Shklyarevskiy, I. O. Deformation and ordering of molecular assemblies in high magnetic fields. , Nijmegen University. The Netherlands. PhD Thesis, ISBN 90-9018956-4 (2005).
Fuller, G. G. Optical rheometry of complex fluids. , Oxford University Press. NY. (1995).
Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. Giant vesicles: preparations and applications. ChemBioChem. 11, 848-865 (2010).
Avanti Polar Lipids Inc. Liposome Preparation. , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation (2017).
Avanti Polar Lipids Inc. Preparing Large, Unilamellar Vesicles by Extrusion (LUVET). , Available from: https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/luvet (2017).
Isabettini, S., et al. Molecular engineering of lanthanide ion chelating phospholipids generating assemblies with a switched magnetic susceptibility. Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 20991-21002 (2017).
Battaglia, M. R., Ritchie, G. L. D. Molecular magnetic anisotropies from the Cotton-Mouton effect. J. Chem. Soc., Faraday Trans. 2. 73 (2), 209-221 (1977).
Sprunt, S., Nounesis, G., Litster, J. D., Ratna, B., Shashidhar, R. High-field magnetic birefringence study of the phase behavior of concentrated solutions of phospholipid tubules. Phys. Rev. E. 48 (1), 328-339 (1993).
Zhao, J., et al. Continuous paranematic ordering of rigid and semiflexible amyloid-Fe3O4 hybrid fibrils in an external magnetic field. Biomacromolecules. 17 (8), 2555-2561 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Magnetische assemblages lipidenextrusie DMPC DMPE DTPA met cholesterol gedoteerde bicellen uitlijning door magnetisch veld vorming van vesikelprecursors temperatuurgecontroleerde assemblage ontwerp van polymoleculaire assemblage

Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies