Dit protocol beschrijft een procedure van vis sperma evaluatie met behulp van computer-assisted sperma-analyse en koelingsapparaten. De software geeft een snelle, nauwkeurige en kwantitatieve analyse van vis spermakwaliteit gebaseerd op de beweeglijkheid van de spermacellen, die kan hierbij een nuttig instrument in de aquacultuur te verbeteren reproductie succes.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Vis sperma beoordeling softwarematig en koelingsapparaten
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Voor de evaluatie van de kwaliteit van de gameet zijn er innovatieve, snelle en kwantitatieve technieken die bruikbare gegevens op voor de aquacultuur levert kunnen. Geïnformatiseerde systemen voor sperma analyse werden ontwikkeld voor het meten van verschillende parameters en een van de meest gemeten is de beweeglijkheid van de zaadcellen.
In eerste instantie is deze computertechnologie ontworpen voor soorten zoogdieren, maar kan ook worden gebruikt voor fish sperma analyse. Vissen hebben specifieke kenmerken die sperma beoordeling zoals een korte motiliteit tijd na activering en, in sommige gevallen, aanpassing beïnvloeden kunnen aan lagere temperaturen. Dus, is het noodzakelijk zowel software als hardware onderdelen motiliteit analyse om efficiënter te maken voor fish sperma analyse te wijzigen. Voor zoogdieren sperma, wordt de verwarmingsplaat gebruikt voor het handhaven van optimale temperaturen voor spermacellen. Het is echter voor sommige vissoorten, voordelige met een lagere temperatuur te verlengen van de duur van de motiliteit, aangezien het sperma actief gedurende minder dan 2 minuten blijft. Dus, koeling apparaten zijn nodig om de monsters op constante temperatuur te koelen na verloop van de tijd van analyse, met inbegrip van de optische Microscoop. Dit protocol beschrijft de analyse van de beweeglijkheid van de zaadcellen van de vis met behulp van software voor sperma-analyse en nieuw koelingsapparaten voor het optimaliseren van de resultaten.
Inleiding
De werkzaamheid van reproductie, hangt af van de kwaliteit van beide gameten (eieren en sperma)1,2. Dit is de belangrijkste factor die aan een succesvolle bevruchting bijdraagt, waardoor de ontwikkeling van levensvatbare nakomelingen3,4. De gunstige evaluatie van gameet kwaliteit is het beste instrument voor het definiëren van het potentieel van de vruchtbaarheid voor een specimen.
Mengen van sperma van meerdere mannetjes is een gangbare praktijk in de productie van veel commerciële waterdieren4. Echt....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Procedures met betrekking tot dierlijke onderwerpen geweest goedgekeurd (2015/VSC/PEA/00064) door de algemene richting van landbouwproductie en vee op de Universitat Politècnica de València.
1. het verzamelen van sperma van volwassen Europese aalstand in gevangenschap
Opmerking: Gebruik Europese aal mannetjes gehandhaafd in tanks met zeewater en een recirculatiesysteem bij constante temperatuur (20 ° C). Behandelen met hormonen door per intraperitoneale injectie (humaan choriongonadotrofine (hCG); 1.5 IU per g vis lichaamsgewicht). Acclimatiseren langzamerhand met 3 dagen in zoetwater vis gevolgd door vervanging me....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Analyse van het effect van de tijd op de beweeglijkheid van de zaadcellen
In het geval van de Europese aal, steeg het percentage van de statische spermacellen van 15 s tot 120 s na activering (van 24,4% tot 40,7%) en het percentage mobiele progressieve spermacellen daalde (van 36,9% tot 20,9%) (Figuur 1A en 1B). Gebaseerd op snelheid, spermacellen cellen toonde een .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De sperma-analysesoftware die wordt gebruikt in dit protocol is gebruikt door onderzoekers wereldwijd voor verschillende soorten, met inbegrip van vis. Vissen hebben echter enkele specifieke functies die invloed kunnen zijn op de beoordeling van de zaadcellen. Vis spermacellen toonde hoge snelheid in het moment van activering die snel daalt en leidt tot een korte tijd van beweeglijkheid na activering. Bovendien, de temperatuur van reproductie is afhankelijk van de soorten en, in sommige gevallen kan ongeveer 4 ° C
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit project heeft financiering ontvangen van de associatie van de kosten (voedsel en landbouw kosten actie FA1205: AQUAGAMETE, en de Europese Unie Horizon 2020 onderzoek en innovatie programma onder de Marie Sklodowska-Curie project IMPRESS (GA No 642893). We zouden graag bedanken het wetenschappelijke team van PROiSER, specifiek voor de student Alberto Vendrell Bernabéu, voor zijn actieve deelname in de video-opname van dit project.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Human Chorionic Gonadotropin | Argent Chemical Laboratories | hCG | Hormone |
| Benzocaine | Merck | E1501 Sigma | Anesthesie |
| sodium bicarbonate | Merck | S5761 Sigma | P1 medium |
| sodium chloride | Merck | 1.06406 EMD Millipore | P1 medium |
| magnesium chloride | Merck | 1374248 USP | P1 medium |
| potassium chloride | Merck | P3911-500G | P1 medium |
| calcium chloride | Merck | C7902-500G | P1 medium |
| commercial salt | Aqua Medic | Meersalz | Activator solution |
| BSA | Merck | 05470 Sigma | Activator solution |
| Falcon tubes 15 ml | Merck | T1943-1000EA | |
| Falcon tubes support | Merck | R5651-5EA | |
| Eppendorfs | Merck | T9661-1000EA | |
| Micropipet 20 µl | Gilson | PIPETMAN® Classic | |
| Micropipet 10 µl | Merck | Z683787-1EA | |
| Tips for micropipets 20 µl | Merck | Z740030-1000EA | |
| Tips for micropipets 10 µl | Merck | Z740028-2000EA | |
| Spermtrack | PROiSER | Counting chamber | |
| TruMorph | PROiSER | TruMorph | |
| Microscope UB 200i Serie | PROiSER | Microscope | |
| Cooler plate | PROiSER | Prototype | |
| Cooler block | PROiSER | Prototype | |
| ISAS v1 | PROiSER | ISAS | Software |
Referenties
- Kime, D. E., et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) for monitoring the effects of pollution on sperm quality of fish; application to the effects of heavy metals. Aquatic Toxicology. 36, 223-237 (1996).
- Kime, D. E., et al. Computer-assisted sperm analy....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
