Een uitgebreide Procedure voor de evaluatie van de prestaties In Vitro van de vermeende Hemangioblastoma Neovascularization met behulp van de kiemen Assay sferoïde

Summary

Dit artikel presenteert een uitgebreide procedure om te evalueren in vitro of klassieke tumor angiogenese in hemangioblastomas (HBs) en haar rol in de HBs bestaat. De resultaten wijzen op de complexiteit van de HB-neovascularization en suggereren dat deze gemeenschappelijke vorm van angiogenese slechts een aanvullende mechanisme in de HB-neovascularization is.

Abstract

De inactivering van het von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor gen speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van de hemangioblastomas (HBs) binnen het menselijk zenuwstelsel (CNS). Echter zowel de cytologische oorsprong en het evolutieproces van HBs (inclusief neovascularization) blijven omstreden, en anti-angiogenese voor VHL-HBs, gebaseerd op de klassieke HB angiogenese, teleurstellende resultaten in de klinische proeven hebben opgeleverd. Een belangrijke belemmering voor de succesvolle klinische vertaling van anti-vasculaire behandeling is het ontbreken van een grondige kennis van neovascularization in deze vasculaire tumor. In dit artikel presenteren we een uitgebreide procedure om te evalueren in vitro of klassieke tumor angiogenese in HBs, evenals zijn rol in de HBs bestaat. Met deze procedure, kunnen onderzoekers nauwkeurig begrijpen de complexiteit van HB neovascularization en identificeren van de functie van deze gemeenschappelijke vorm van angiogenese in HBs. Deze protocollen kunnen worden gebruikt om de meest veelbelovende anti-vasculaire therapie voor tumoren, die hoge translationeel potentieel tumoren behandeling of heeft voor medeplichtigheid in de optimalisatie van de anti-angiogenic behandeling van HBs voortaan vertalingen evalueren. De resultaten wijzen op de complexiteit van HB neovascularization en suggereren dat dit gemeenschappelijk formulier angiogenese slechts een aanvullende mechanisme in HB neovascularization is.

Introduction

Hemangioblastomas (HBs) zijn goedaardige vasculaire tumoren die uitsluitend binnen het menselijk zenuwstelsel (CNS) worden gevonden. Zij ontwikkelen bij patiënten met de ziekte van von Hippel-Lindau (VHL) of sporadische laesies. VHL-HBs zijn moeilijk te genezen door middel van de chirurgische behandeling als gevolg van de frequente herhaling en meerdere letsels die het gevolg zijn van deze genetische wanorde¹. Hoewel de inactivering van het VHL tumor suppressor gen is beschouwd als de oorzaak van de tumorigenesis van VHL-HBs, blijven de cytologische oorsprong (met inbegrip van neovascularization) en het evolutieproces van HBs grotendeels contro....

Protocol

Deze methode werd uitgevoerd overeenkomstig de goedgekeurde richtsnoeren en voorschriften van het onderzoek ethisch comité van Huashan ziekenhuis, Fudan Universiteit. Bijbehorende standaard veiligheidsmaatregelen werden gevolgd in elke stap. Voor een schematische presentatie, Zie Figuur 1.

1. cel cultuur en plasmide Construct

1. Regelmatig onderhouden de menselijke navelstreng ader endothelial cel (HUVEC) in Dulbecco gewijzigd van Eagle's medium (DMEM), aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS), 100 eenheid/mL penicilline en 100 µg/mL streptomycine in een bevochtigde 5% CO₂ incubator bij 37 ° C.

Results

Originele beelden zijn genomen door omgekeerde lichte Microscoop. De typische beelden van de controlegroep en de groep VHL zijn afgebeeld in Figuur 2-A1 en Figuur 2-A2. De gekiemde lengte van de controlegroep is korter dan die van de VHL-groep.

Na het uploaden van de beelden, biedt het online platform rechtstreeks analyseresultaten. De .......

Discussion

Meerdere velden van vasculaire biologie onderzoek werden onlangs, gestimuleerd door de studie van de angiogenic endotheel¹⁵. In dit artikel, ontwikkelden we een endothelial sferoïde kiemen techniek als een experimenteel model om te bestuderen van de vorming van het vaartuig dat afkomstig van het VHL-gen verlies van functie in gemanipuleerde endotheliale cellen is te identificeren van nieuwe kandidaat-moleculen van de angiogenic cascade. Tot de beste van onze kennis is dit het eerste verslag het an.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
human umbilical vein endothelial cell	Fudan IBS Cell Center	FDCC-HXN180
dulbecco’s modified eagle’s medium	Gibco	11995040
fetal bovine serum	Gibco	26400044
PLKO.1-puro vector	Addgene	#8453
packing plasmid psPAX2	Addgene	#12260
envelope plasmid pMD2.G	Addgene	#12259
3D round-bottom 96-well plates	S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
Opti-MEM medium	Gibco	31985-070	reduced serum medium
15-well plate	Ibidi	81501	Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight
endothelial cell growth supplements	Sciencell	#1052
10-cm culture dish	Corning	Scipu000813
Puromycin	Gibco	A1113802
typsin-EDTA	Gibco	25200056
Automated Cell Counter System	BioTech
Image Analysis software	Winmasis		http://mywim.wimasis.com