Deze studie presenteert een verbeterde konijn model geïnfecteerd met Staphylococcus aureus door het blokkeren van de dezelfde hoeveelheid bacteriën in het beenmerg. Vancomycine geladen calciumsulfaat en autogene bot worden gebruikt voor de behandeling van antibioticum en bot reparatie. Het protocol zou nuttig zijn voor de studie van bot infectie en regeneratie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Behandeling met vancomycine geladen calciumsulfaat en autogene bot in een verbeterde konijn Model van bot infectie
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Bot infectie het gevolg van bacteriële invasie, die zeer moeilijk te behandelen in traumatische, klinische en orthopedische chirurgie. De bot infectie kan leiden tot langdurige ontsteking, osteomyelitis en uiteindelijke been buiten de Unie. Oprichting van een haalbaar, reproduceerbare diermodel is belangrijk om het bot infectie onderzoek en behandeling met antibiotica. Als een in vivo model, wordt het model van het konijn veel gebruikt in bot infectie onderzoek. Echter, vorige studies op konijn bot infectie modellen toonde aan dat de status van de infectie inconsistent, was net als de hoeveelheid bacteriën variabele. Deze studie geeft een verbeterde chirurgische methode voor inducerende bot besmetting van een konijn, door het blokkeren van de bacteriën in het beenmerg. Multi-level evaluaties kunnen vervolgens worden uitgevoerd om te controleren of de modellering methode.
Debriding necrotisch weefsel en implantatie van vancomycine-geladen calciumsulfaat (VCS) zijn in het algemeen, overheersend in behandeling met antibiotica. Hoewel calciumsulfaat in VCS voordelen Osteocyt kruipen en nieuwe botgroei, optreden massale bot gebreken na debriding. Autogene bot (AB) is een aantrekkelijk strategie te overwinnen bot gebreken voor de behandeling van massale bot gebreken na debriding necrotische bot.
In deze studie gebruikten we de staart bot als een autogene bot geïmplanteerd in het bot defect. Bot reparatie werd gemeten met behulp van micro-berekend-tomografie (micro-CT) en histologische analyse na dierlijke offer. Dientengevolge, in de groep VCS was bot non-adhesie consequent verkregen. Daarentegen waren de botten defect gebieden in de VCS-AB groep aanzienlijk afgenomen. De huidige methode van de modellering beschreven een haalbaar, reproduceerbare methode ter voorbereiding van een bot besmetting-model. De behandeling van de VCS-AB resulteerde in lagere been buiten de Unie na behandeling met antibiotica. De verbeterde bot infectie model en de behandeling van de combinatie van VCS en autogene bot zou kunnen bij het bestuderen van de onderliggende mechanismen in bot infectie en bot regeneratie relevant is voor de traumatologie orthopedische toepassingen nuttig zijn.
Inleiding
Bot infectie meestal het gevolg van bacteriën of andere micro-organismen invasie na trauma, botbreuk, of andere bot ziekten1. Bot infectie kan leiden tot een hoog niveau van ontsteking en bot weefselvernietiging. In de kliniek is Staphylococcus aureus (S. aureus) de belangrijkste verwekker van bot infectie2,3. De bot infectie is pijnlijk, slopende, en neemt vaak een chronische cursus die uiterst moeilijk te behandelen van4. Op dit moment is debridement van necrotisch weefsel en implanteren van vancomycine-geladen calcium (VCS) kralen bevestigd dat een efficiënte strategie voor de beheersing van de lokale infectie5,6. 10% tot 15% van de patiënten ervaren echter een langdurige bot herstelproces, vertraagde adhesie of non-adhesie na anti-infectie behandeling7. Het grote segment van een bot defect is de moeilijkste kwestie voor orthopedische chirurgen. Een autologe bottransplantatie wordt beschouwd als de optimale bot vervanging in bot non-adhesie behandeling8,9.
Tot op heden heeft het merendeel van de studies over bot zijn infectie en autologe bot innesteling uitgevoerd in verschillende soorten dierlijke modellen, zoals ratten, konijnen, honden, varkens en schapen10,11. Konijn modellen worden meestal gebruikt voor bot infectie studies, als eerste uitgevoerd door Norden en Kennedy in 197012,13. In onze eerdere studie, we gebruikten konijn modellen van Norden methode, en we vonden dat de hoeveelheid van S. aureus geïnjecteerd in het beenmerg kon niet worden gekwantificeerd nauwkeurig, zoals het lekken van bloed uit het beenmerg tot bacteriën oplossing overloop leidde.
Dit artikel presenteert een verbeterde chirurgische methode voor inducerende bot infectie van konijnen. Aan het einde van de procedure, werden een bloedonderzoek van de biochemie, een bacteriologisch onderzoek en een histopathologische onderzoek uitgevoerd om te controleren of het bot infectie model. Vervolgens VCS was geïmplanteerd om te remmen infectie en autogene bot was geïmplanteerd ter bevordering van de regeneratie van bot.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De konijnen gebruikt in de huidige studie werden behandeld in overeenstemming met de gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren. Alle experimentele procedures werden gevolgd door de regels van de bio-ethiek Commissie van Zhejiang Academie voor traditionele Chinese geneeskunde.
1. bereiding van de bacteriële suspensie
- Los 0,5 mg van S. aureus vriesdrogen poeder (ATCC 6538) met 0.3 mL Luria Bertani kweekmedium. Meng schorsing volledig.
- Strijk de entsuspensie op al soja agar platen en Incubeer de bacteriële kolonies bij 37 ° C gedurende 16 uur.
- Selecteer een enkele bacteriële kolonievormende eenheid (CFU) en cultuur in al soja Bouillon buizen voor 24 h. uitvoeren een subcultuur gedurende ongeveer 24 uur bij 37 ° C, en verkrijgen van medio-logaritmische groei fase bacteriën na 16 tot 18 uur, wanneer de waarde van de optische dichtheid (OD) 0.6 op 600 is nm 14.
- Breng 1 mL van de entsuspensie in een centrifugebuis. Centrifugeer gedurende 5 min op 825 x g - en 4 ° C, en verwijder het supernatant. Resuspendeer en wassen van de bacteriën met 100 µL fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS); Herhaal deze stap 3 keer. Ten slotte resuspendeer bacteriën met 3 mL PBS.
-
Schatting van de concentratie van de bacteriën met behulp van de McFarland turbidimetrie15.
- Breng 100 tot 500 µL van de entsuspensie tot een colorimetrische koker totdat de troebelheid gelijk aan een 0,5 McFarland standaard is.
- Troebelheid beoordelen door visuele vergelijking aan de 0.5 McFarland, wanneer de inhoud van bacteriën ongeveer 10 bereikt8 CFU/mL.
Opmerking: Zorg ervoor dat het volume van de entsuspensie is voldoende voor de volgende protocollen. Voor elk konijn is het volume van de entsuspensie minder dan 1 mL.
- Breng een agarplaat 0,2 mL van bacteriële suspensie en gelijkmatig toe te passen. Incubeer de plaat bij 37 ° C gedurende 16 h. graaf de kolonies van bacteriën om te controleren of de CFU van de entsuspensie.
2. opstelling van bot infectie modellen
- Houd mannelijke Nieuw-Zeeland witte konijnen, leeftijd van 3 maanden, in afzonderlijke kooien, onder lucht-gecontroleerde omstandigheden (20 ± 1 ° C) en 12/12 uur licht-donker verlichting cycli. Bieden van routine dieet en leidingwater dagelijks.
- Ervoor zorgen dat ten tijde van de operatie dat het konijn meer dan 3 kg weegt.
- Anaesthetize konijnen door intraperitoneale injectie met pentobarbital natrium (3 mg per 100 g lichaamsgewicht). Zorg ervoor dat konijnen zijn volledig verdoofd door een mislukking om te reageren op een poot snuifje. Fix konijnen op de operatietafel tijdens operatie procedure.
Opmerking: Zorg ervoor dat het modelleren procedure duurt minder dan 1 uur. - Scheren van de proximale tibia regio met behulp van een elektrisch scheerapparaat tegen de richting van de haargroei. Desinfecteren van de huid door een Povidon-jodium oplossing toe te passen.
- Mark van de bovenkant van het scheenbeen en het boren gat standpunt voor injectie met S. aureus (de afstand tot de bovenkant van het scheenbeen is 1,5 cm) met pen en liniaal. Zorg ervoor dat de boren gat posities zijn in het midden van de Tibia plateau horizontaal(Figuur 1).
- Tibia huid met behulp van een scalpel No. 11 knippen en maak een incisie van 1 cm in het beenvlies (Figuur 1B, C). Punch een 2 mm diameter gat in het onderbeen met behulp van een elektrische bot boor eenheid (Figuur 1D).
- Druk op de 2 mm diameter gaten in de tibiale plateau met een cilinder van bot was van 2 mm diameter en 2 mm hoogte (Figuur 1E). Verwijder de reserve bot was langs het horizontale vlak van de Tibia plateau (Figuur 1F). Controleer of het gat 2 mm vol met been wax (Figuur 1G is).
Opmerking: Ervoor zorgen dat de gaten vol met been wax door het controleren van het gat met of zonder bloed overloop. - Naai tot het beenvlies en huid met absorbeerbare chirurgische hechtdraad in een verticale matras Sutuur (geologie) om te voorkomen dat het dier kauwen de hechtingen (Figuur 1H).
- 1 x 108 CFU/mL van de oplossingen van de S. aureus (30 µL per 100 g lichaamsgewicht) injecteren met een 1 mL asepsis injector (Figuur 1ik). Zorg ervoor dat de naalden penetreren de bot was en het injecteren van de S. aureus -oplossing in het beenmerg langzaam.
- Houd het dier te vermijden van warmteverlies na modellering warm en schone omstandigheden. Ademhaling en hartslag controleren. Na het wakker worden, het huis van de konijnen in afzonderlijke kooien met gratis toegang tot voedsel en water.
3. evaluatie van bot infectie Model
- Dagen 7, 14, 21 en 28 na infectie, konijnen in de fixer konijn met het hoofd en oor buiten de fixer te plaatsen.
-
2 mL bloed trekken door de auricular aderen verpakkingsgasssen dikaliumhexafluorozirkonaat ethyleendiamminetetra zuur (EDTA-K2) anticoagulatie bloed. 1 mL bloed trekken door een bloedvat verpakkingsgasssen bloed. Centrifugeer het serum voor 10 min met een snelheid van 651 x g bij kamertemperatuur.
- Witte bloedcellen (WBC) bepalen in volbloed met behulp van een biochemische analyzer van bloed, en C - reactief proteïne (CRP) door een enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methode16.
- Anaesthetize in dagen 7, 14, 21 en 28 na infectie, één model konijn met pentobarbital natrium bij de dosering van 3 mg / 100 g lichaamsgewicht. Tibia huid met behulp van een scalpel No. 11 knippen en maak een incisie van 2 cm in het beenvlies(Figuur 2).
- Schoon been wax. Debride necrotische bot door ponsen van twee aangrenzende 4,8 mm diameter gaten met behulp van een elektrische bot boor eenheid (Figuur 2B). Debride necrotische beenmerg en granulatie weefsel met behulp van een bot lepel (Figuur 2C).
Opmerking: Schone botweefsel tijdens de debridement te vermijden botweefsel resterende in het beenmerg. - Schrapen en reinig het botweefsel tussen de twee gaten (Figuur 2D).
- 1 mL van het beenmerg op schapen bloed agar platen verspreid. Incubeer de platen 's nachts bij 37 ° C. Platen van 30-300 kolonies selecteren, en het aantal kolonies te berekenen.
- Aan het eind van de dag 28 na infectie, pak tibia exemplaren langs de randen van de gewrichten van knie- en enkel. Correctie van de tibia specimens in 4% paraformaldehyde voor 24 h. Decalcify de tibia specimens in 10% EDTA voor 8 weken.
- De tibia-modellen in een gesorteerde reeks van ethanol verdunningen uitdrogen, en vervolgens insluiten in paraffine. Snijd 4 opeenvolgende 5 µm secties van de coronale vliegtuigen. Vlek secties met een haematoxyline en eosine (H & E) kleuring kit.
- Met een Microscoop kunt bekijken de gekleurde secties en doorvallend licht beelden met standaard software registreren.
4. voorbereiding van de VCS kralen
- 1 g vancomycine hydrochloride poeder toevoegen aan 9,5 g van medische kwaliteit calciumsulfaat en vervolgens Voeg 3 mL van normale zout aan de gemengde macht. Meng met een spatel voor 30 tot 45 s.
- Plaats het gemengde product in een flexibele silicagel mal (cilinder van 4,8 mm diameter en 4,8 mm hoogte) en drogen bij kamertemperatuur voor 15 min. verwijderen de VCS kralen door het buigen van de schimmel.
5. antibiotische behandeling en implantatie van autogene bot
- Anaesthetize model konijnen met pentobarbital natrium bij de dosering van 3 mg / 100 g lichaamsgewicht op de 28th dag na infectie. De regio van de proximale tibia met behulp van een elektrisch scheerapparaat te scheren. Desinfecteren van de huid door Povidon-jodium oplossing toe te passen.
Opmerking: Zorg ervoor dat de modellering procedure minder dan 1 uur is. - Scheren van de staart regio met behulp van een elektrisch scheerapparaat en Desinfecteer de staart door Povidon-jodium oplossing toe te passen.
- Bezuinigen op de staart met behulp van chirurgische scharen. Knip staart huid met behulp van een scalpel No. 11 en onthullen de staart bot. Naai de huid op de staart regio met absorbeerbare chirurgische hechtingen in een verticale matras Sutuur (geologie) om te voorkomen dat het dier de hechtingen te kauwen.
- Verwijder elke spier, zacht weefsel en beenvlies. Loskoppelen van de staart bot bij elke joint en het bot fragment overbrengen in een 100 mm kunststof schotel met steriele zoutoplossing.
- Implantaat 4 stuks van VCS parels (cilinder van 4,8 mm diameter en 4,8 mm hoogte, 1,25 mg vancomycine per stuk van parel) in het beenmerg holte met gebogen pincet (Figuur 2E).
- Vul het been defect met 8 stuks van autogene botten (cilinder met een diameter van 2 mm en 4 mm hoogte per elk stuk) met behulp van gebogen pincet(Figuur 2).
- Naai tot het beenvlies en huid met absorbeerbare chirurgische hechtingen in een matras hechtdraad wijze (Figuur 2F).
Opmerking: Houd de temperatuur bij 25 ° C tijdens de operatie. - Houd het dier in warme en schone omstandigheden om warmteverlies te voorkomen dat na de operatie. Ademhaling en hartslag controleren. Na het wakker worden, het huis van de konijnen in afzonderlijke kooien met gratis toegang tot voedsel en water.
6. beoordeling van antibiotische werking
- Konijnen gestoken een konijn fixer en plaats van het hoofd en oor buiten de fixer op 2, 4, 6 en 8 weken na de behandeling.
- Bloed trekken auricular aders met EDTA-K2 anticoagulatie bloedvat. 1 mL bloed trekken door een bloedvat verpakkingsgasssen bloed. Centrifugeer het serum voor 10 min met een snelheid van 651 x g bij kamertemperatuur.
- Witte bloedcellen (WBC) in volbloed bepalen met behulp van biochemische analyzer van bloed, en C - reactief proteïne (CRP) door een ELISA methode16.
7. beoordeling van de Bone Regeneration
- Konijnen door het injecteren met een meer dan euthanaseren doseringen van pentobarbital natrium, aan het einde van 8 of 12 weken na de behandeling.
- Uittreksel tibia specimens, langs de randen van de gewrichten van knie- en enkel. Debride spieren en fasciaal lagen.
- Structuur van tibia analyseren met behulp van micro-berekend tomografie (micro-CT). Kies een ovale gebied 4,8 mm diameter en 9.6 mm lang als de regio van belang (ROI). Reconstrueren 3D-model beelden met behulp van bitmapgegevens.
- Scores van de verhouding van bot volume/weefsel volume (BV/TV), trabecular dikte (Tb.Th), kies trabecula nummer (Tb.N) en trabecular scheiding (Tb.Sp)from the3D modellen te beoordelen bot regeneratie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Evaluatie van bot infectie Model
Na infectie met S. aureusleken de pathologische uitingen van konijnen op de representatieve symptoom van chronische osteomyelitis in de kliniek. In onze studie, waren 30 konijnen besmet, onderworpen als een Modelgroep en 10 konijnen waren onderworpen als de controledieren. Alle de model konijnen hebben besmet sinussen van de lokale site van tibia, met witte en gele pus over vloeien voort uit de sinussen (Fi...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In de vorige studies, werden diverse soorten dierlijke modellen gebouwd om te studeren zowel acute en chronische bot infectie; echter blijft de zoektocht naar het ideale model17,18. Bovendien, het ideale bot infectie model naar verwachting simuleren de pathologische kenmerken van bot infectie in klinische setting, terwijl de modellering periodes, blijven low-cost en gemakkelijk uit te voeren. Tot nu toe is het konijn bot infectie model het meest voorkomende model...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs melden geen belangenconflicten in dit werk.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door de nationale Natural Science Foundation van China (81803808, 81873062), Zhejiang provinciale geneeskundige en Health Science, Technology Fund (2017KY271) en de wetenschap en technologie Project van de provincie Zhejiang (2017C 37181).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| absorbable surgical suture | Jinghuan | 18S0604A | |
| asepsis injector | Jinglong | 20170501 | |
| bone wax | ETHICON | JH5CQLM | |
| CCD camera | Olympus | DP72 | |
| EDTA-K2 anticoagulant blood vessel | XINGE | 20170802 | |
| Electric bone drill unit | Bao Kang | BKZ-1 | |
| Electric shaver | Codos | 3800 | |
| flexible silica gel mold | WRIGHT | 1527745 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | Beyotime | 20170523 | |
| Luria-Bertani culture medium | Baisi Biothchnology | 20170306 | |
| Medical-grade calcium sulphate | WRIGHT | 1527745 | |
| microcomputed tomography (micro-CT) | Bruker | SkyScan 1172 | |
| Microscope | Olympus | CX41 | |
| New Zealand white rabbits | Zhejiang Experimental Animal Center | SCXK 2014-0047 | |
| No. 11 scalpel | Yuanlikang | 20170604 | |
| normal saline | Mingsheng | 20170903 | |
| PBS | TBD(Jingyi) | 20170703-0592 | |
| pentobarbital sodium | Merk | 2070124 | |
| povidone-iodinesolution | Lierkang | 20170114 | |
| S. aureus freeze drying powder | China General Microbiological Culture Collection Center | ATCC 6538 | |
| sheep blood agar | HuanKai Microbial | 3103210 | |
| tryptic soy agar plates | HuanKai Microbial | 3105697 | |
| tryptic soy broth tubes | HuanKai Microbial | 3104260 | |
| Vancomycin | Lilly | C599180 |
Referenties
- Malizos, K. N. Global Forum: The Burden of Bone and Joint Infection: A Growing Demand for More Resources. Journal of Bone and Joint Surgery-American Volume. 99, 20(2017).
- Peeters, O. Teicoplanin - based antimicrobial therapy in Staphylococcus aureus bone and joint infection: tolerance, efficacy and experience with subcutaneous administration. BMC Infectious Diseases. 16, 622(2016).
- Sugaya, H., et al. Percutaneous autologous concentrated bone marrow grafting in the treatment for nonunion. European Journal of Orthopeadic Surgery and Traumatology. 24, 671-678 (2014).
- Birt, M. C., Anderson, D. W., Bruce, T. E., Wang, J. Osteomyelitis: Recent advances in pathophysiology and therapeutic strategies. Journal of Orthopeadics. 14, 45-52 (2017).
- Walter, G., Kemmerer, M., Kappler, C., Hoffmann, R. Treatment algorithms for chronic osteomyelitis. Deutsches Arzteblatt International. 109, 257-264 (2012).
- Henriksen, K., Neutzsky-Wulff, A. V., Bonewald, L. F., Karsdal, M. A. Local communication on and within bone controls bone remodeling. Bone. 44, 1026-1033 (2009).
- Mendoza, M. C., et al. The effect of vancomycin powder on bone healing in a rat spinal rhBMP-2 model. Journal of Neurosurgery Spine. 25, 147-153 (2016).
- Cohn Yakubovich, D., et al. Computed Tomography and Optical Imaging of Osteogenesis-angiogenesis Coupling to Assess Integration of Cranial Bone Autografts and Allografts. Journal of Visualized Experiments. (106), e53459(2015).
- Brecevich, A. T., et al. Efficacy Comparison of Accell Evo3 and Grafton Demineralized Bone Matrix Putties against Autologous Bone in a Rat Posterolateral Spine Fusion Model. Spine Journal. 17, 855-862 (2017).
- Jensen, L. K., et al. Novel porcine model of implant-associated osteomyelitis: A comprehensive analysis of local, regional, and systemic response. Journal of Orthopeadic Research. 35, 2211-2221 (2016).
- de Mesy Bentley, K. L., et al. Evidence of Staphylococcus Aureus Deformation, Proliferation, and Migration in Canaliculi of Live Cortical Bone in Murine Models of Osteomyelitis. Journal of Bone and Mineral Research. 32, 985-990 (2017).
- Norden, C. W., Kennedy, E. Experimental osteomyelitis. I: A description of the model. Journal of Infectious Diseases. 122, 410-418 (1970).
- Mistry, S., et al. A novel, multi-barrier, drug eluting calcium sulfate/biphasic calcium phosphate biodegradable composite bone cement for treatment of experimental MRSA osteomyelitis in rabbit model. Journal of Controlled Release. 239, 169-181 (2016).
- Bernthal, N. M., et al. Combined In vivo Optical and µCT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice. Journal of Visualized Experiments. (92), e51612(2014).
- Koeth, L. M., DiFranco-Fisher, J. M., McCurdy, S. A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically. Journal of Visualized Experiments. (103), e53028(2015).
- Uttra, A. M., et al. Ephedra gerardiana aqueous ethanolic extract and fractions attenuate Freund Complete Adjuvant induced arthritis in Sprague Dawley rats by downregulating PGE2, COX2, IL-1β, IL-6, TNF-α, NF-kB and upregulating IL-4 and IL-10. Journal of Ethnopharmacology. 224, 482-496 (2018).
- Harrasser, N., et al. A new model of implant-related osteomyelitis in the metaphysis of rat tibiae. BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 152(2016).
- Abedon, S. T. Commentary: Phage Therapy of Staphylococcal Chronic Osteomyelitis in Experimental Animal Model. Frontiers in Microbiology. 7, 1251(2016).
- Tan, H. L., Ao, H. Y., Ma, R., Lin, W. T., Tang, T. T. In vivo effect of quaternized chitosan-loaded polymethylmethacrylate bone cement on methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis infection of the tibial metaphysis in a rabbit model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58, 6016-6023 (2014).
- Chiara, L., et al. Detection of Osteomyelitis in the Diabetic Foot by Imaging Techniques: A Systematic Review and Meta-analysis Comparing MRI, White Blood Cell Scintigraphy, and FDG-PET. Diabetes Care. 40, 1111-1120 (2017).
- Khalid, M., et al. Raman Spectroscopy detects changes in Bone Mineral Quality and Collagen Cross-linkage in Staphylococcus Infected Human Bone. Scientific Reports. 8, 9417(2018).
- Putters, T. F., Schortinghuis, J., Vissink, A., Raghoebar, G. M. A prospective study on the morbidity resulting from calvarial bone harvesting for intraoral reconstruction. International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 44, 513-517 (2015).
- Yin, J., Jiang, Y. Completely resorption of autologous skull flap after orthotopic transplantation: a case report. International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 7, 1169-1171 (2014).
- Takehiko, S., et al. Preliminary results of managing large medial tibial defects in primary total arthroplasty: autogenous morcellised bone graft. International Orthopaedics. 41, 931-937 (2017).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
