We presenteren een gedetailleerde aanpak voor het uitvoeren van speeksel inzameling, met inbegrip van lymfkliertest tracheostomy en het isolement van de drie grote speekselklieren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Gefractioneerde lymfkliertest speeksel functioneel-diagnostiek via Pilocarpine stimulatie volgende straling
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Hyposalivation wordt meestal waargenomen in de auto-immune reactie van het Sjögren syndroom of volgende straling letsel van de grote speekselklieren. In deze gevallen blijven vragen met betrekking tot de pathogenese van de ziekte en effectieve interventies. Een geoptimaliseerde techniek waarmee functionele beoordelingvan de speekselklieren is van onschatbare waarde voor het onderzoeken van exocrine klier biologie, dysfunctie en therapeutics. Hier presenteren we een stapsgewijze aanpak voor het uitvoeren van pilocarpine speeksel secretie, met inbegrip van tracheostomy en de dissectie van de drie grote lymfkliertest speekselklieren gestimuleerd. We detail ook de juiste lymfkliertest hoofd en nek anatomie die toegankelijk is tijdens deze technieken. Deze aanpak is schaalbaar, zodat meerdere muizen tegelijk worden verwerkt dus verbetering van de efficiëntie van de workflow. Wij streven naar het verbeteren van de reproduceerbaarheid van deze methodes, die allemaal verder toepassingen binnen het veld. Naast speeksel collectie bespreken we statistieken voor kwantificeren en normaliseren van de functionele capaciteit van deze weefsels. Representatieve gegevens zijn opgenomen uit submandibulaire klieren met depressief speekselklier functie 2 weken na gefractioneerde straling (4 doses van 6,85 Gy).
Inleiding
Speekselklier aandoeningen omvatten syndromen van dysregulated of verminderde secretie leidt tot overproductie (sialorrhea) of Onderdelenoverzicht (xerostomia en hyposalivation) van speeksel1. In beide gevallen is er een belang bij het verbeteren van ons begrip van de speekselklier biologie naar het einddoel van therapeutische ontwikkeling2.
De speekselklieren zijn zeer radiosensitive organen, en vaak zijn beschadigd tijdens het hoofd en de nek kanker radiotherapie, wat leidt tot permanente droge mond (xerostomie)3,4. In tegenstelling ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle in vivo procedures zoals hieronder beschreven werden goedgekeurd door het Comité van de Universiteit voor dier middelen aan de University of Rochester, Rochester. NY.
1. voorbereiding
- Met behulp van een analytische balans, weeg 20 mg pilocarpine. Los het op in 2 mL steriele zoutoplossing in een microcentrifuge buis.
Opmerking: Omdat pilocarpine lichtgevoelig is en activiteit na verloop van tijd verliest, deze oplossing moet worden bereid van de dag van de injectie, en beschermd tegen licht tot toegediend. - Gebruik een analytische balans, wegen en alle collectie buizen en glazen capillairen aanwijzen. Het ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Wanneer het uitvoeren van hooggedoseerde pilocarpine gestimuleerd speeksel-collectie, is het belangrijk om te houden van de luchtwegen om te voorkomen dat aspiratie of verstikking van afscheidingen in de mondholte. Een schematische voorstelling van de tracheostomy wordt verstrekt (Figuur 1). Na de tracheale insnijding van moet de stoma blijven duidelijk van de weefsels en vloeistoffen.
Om capillaire.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We presenteren een meerstaps methode voor de beoordeling van de speekselklier functie, die kan worden toegepast op de studie van de klier letsel en therapeutics. Onze procedure impliceert tracheostomy, speeksel collectie en klier dissectie, die allemaal experimentele toepassingen die een geïntegreerde studie van biologie van de speekselklier kunnen ondersteunen. Bijvoorbeeld is lymfkliertest tracheostomy gebruikt voor het beheer van de algemene luchtweg tijdens procedures belemmeren de mondholte.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Onderzoek gemeld in deze publicatie werd gesteund door het nationale Instituut van Dental en craniofaciale onderzoek (NIDCR) en het National Cancer Institute (NCI) van de National Institutes of Health onder Award nummer R56 DE025098, UG3 DE027695 en CA206296 van de F30. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijk de officiële standpunten van de National Institutes of Health. Dit werk werd ook ondersteund door de NSF DMR-1206219 en de IADR Innovation in mondelinge zorg Award (2016).
Wij wil Dr. Eri Maruyama en Andrew Hollomon bedanken voor hun hulp met speeksel collectie. We zouden gr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomie |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Gebogene pincet |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Rechte pincet |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunte pincet |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissectie schaar |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillaire buisjes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antilichaam |
| DAPI (4'6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistisch software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicateur voor oogzalf |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Spuit voor intraperitoneale injectie |
Referenties
- Bradley, P., O'Hara, J. Diseases of the salivary glands. Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).
- Fox, P. C. Salivary enhancement therapies. Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).
- Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
