Twee methoden voor Decellularization van plantaardige weefsels voor Tissue Engineering toepassingen

Summary

Hier presenteren we en contrast twee protocollen gebruikt om te decellularize van plantaardige weefsels: een wasmiddel gebaseerde aanpak en een wasmiddel-vrije benadering. Beide methoden zijn achterlaten van de extracellulaire matrix van de weefsels van de plant gebruikt, die vervolgens kan worden gebruikt als steigers voor weefsel waterbouwkundige toepassingen.

Abstract

De transplantaties van het autologe, synthetische en dierlijke momenteel gebruikt als steigers voor weefsel vervanging hebben beperkingen als gevolg van lage beschikbaarheid, arme biocompatibiliteit en kosten. Plantaardige weefsels hebben gunstige kenmerken die ze uniek geschikt voor gebruik als steigers, zoals hoge oppervlakte, uitstekende water transport en retentie, onderling verbonden porositeit, vasculaire netwerken, en een breed scala van mechanische kader van onderzoekopleiding Eigenschappen. Twee succesvolle methoden van plant decellularization voor weefsel waterbouwkundige toepassingen worden hier beschreven. De eerste methode is gebaseerd op wasmiddel baden om cellulaire kwestie, die vergelijkbaar met de eerder vastgestelde methoden gebruikt is om duidelijk zoogdieren weefsels. De tweede is een wasmiddel-vrije methode aangepast van een protocol dat isoleert blad therapieën en impliceert het gebruik van een verwarmde bleekmiddel en zout bad om te wissen van de bladeren en stengels. Beide methoden leveren steigers met vergelijkbare mechanische eigenschappen en de lage cellulaire metabole effecten waardoor de gebruiker kan het protocol dat beter aansluit bij hun beoogde toepassing selecteren.

Introduction

Weefselengineering ontstaan in de jaren 1980 maken levend weefsel substituten, en potentieel adres belangrijke orgaan- en weefsel tekorten¹. Een strategie hanteert steigers te stimuleren en begeleiden van het lichaam om te regenereren ontbrekende weefsels of organen. Hoewel geavanceerde productie benaderingen zoals 3D-printen steigers met unieke fysieke eigenschappen hebben geproduceerd, blijft de mogelijkheid voor de vervaardiging van steigers met een breed scala van haalbare fysische en biologische eigenschappen een uitdaging^{2 , 3}. Bovendien, als gevolg van een gebrek aan een function....

Protocol

1. decellularization van weefsel van de Plant met behulp van het wasmiddel gebaseerde benadering

1. Gebruik verse of bevroren F. hispida, blad monsters. Bevriezen van ongebruikte verse monsters in een vriezer van-20 ° C en een winkel voor toekomstig gebruik (tot een jaar).
   Opmerking: Gebruik stengel of blad weefsel van bijna alle gewenste planten. Uitgebreide opslag tijden kunnen leiden tot schade aan de weefsels.
   1. Bepalen van de grootte en vorm van de monsters worden verwerkt op basis van het gebruiksdoel van het monster (d.w.z. monsters in reepjes gesneden zijn goed geschikt voor mechanische testen toepassingen, o....

Results

Beide methoden leverde steigers die waren geschikt voor celkweek en weefsel technische toepassingen. Figuur 1 toont de algemene workflow voor het proces van de decellularization met behulp van een intact blad voor het wasmiddel gebaseerde methode en gesneden monsters (8 mm doorsnede) voor de wasmiddel-vrije methode. Succesvolle decellularization van Ficus hispida weefsels na beide methoden leverde duidelijke en intact monsters (f.......

Discussion

Hierin worden twee methoden om te decellularize van plantaardige weefsels beschreven. De resultaten die hier gepresenteerd in combinatie met de resultaten van voorafgaande studies²⁵, suggereren dat de protocollen uitwaardigen waarschijnlijk zijn die van toepassing zijn op een breed spectrum van plantensoorten en kunnen worden uitgevoerd op zowel de stengels en de bladeren. Deze procedures zijn eenvoudig en vereisen geen speciale apparatuur, zodat plant decellularization in de meeste laboratoria ka.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sodium dodecyl sulfate	Sigma Life Science	75746-1KG
Triton X-100	MP Biomedicals, LLC	807426	Non-ionic surfactant referenced in paper. Very viscous reagent, can help to cut end of pipette tip when drawing it up.
Concentrated bleach (8.25% sodium hypochlorite)	Clorox	Item #: 31009	Standard concentrated bleach.
Sodium bicarbonate	Acros Organics	217120010	Can be substituted with sodium hydroxide or sodium carbonate.
8 mm Biopunch	HealthLink	15111-80	Cuts samples that fit well in 24 well plate
Belly Dancer-Shake table	Stovall Life Sciences	BDRAA115S	Use low speeds to not damage tissues. Can use any model/brand of shake table.
Isotemp hot/stir plate	Fisher Scientific		Can use any style/brand of hot/stir plate.
Beaker	Any		Can use any size beaker as long as it will fit your samples and not overcrowd them.
Tris Hydrochloride	Fisher Scientific	BP153-500
DMEM	Corning	MT50003PC
Quant-iT Picogreen dsDNA assay	Life Technologies	P11496	Can use any dsDNA quantification mehtod on hand.