Methodenartikel

Immunostimulerende Agent evaluatie: Lymfoïde weefsel extractie en injectie Route-afhankelijke dendritische cel activeren

DOI:

10.3791/57640

⸱

16 september 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shanghai Public Health Clinical Center, Shanghai Medical College, Fudan University, 2Department of Medical Biotechnology, Yeungnam University, 3Department of Chemistry, Pukyong National University, 4Marine-integrated Bionics Research Center, Pukyong National University, 5Department of Biochemistry, Chungbuk National University, 6Department of Biomedical Sciences, University of Ulsan College of Medicine, Asan Medical Center

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Experimentele procedures voor de verdere winning van lymfatische weefsels voor het testen van lymfoïde dendritische cel activatie worden beschreven na behandeling van een immuniteitsverhoging nanomateriaal.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Voor de evaluatie van een nieuwe therapeutische agent voor immunotherapie of vaccinatie is analyse van immuun cel activatie in het lymfatische weefsel essentieel. Hier, we onderzochten immunologische effecten van een immunostimulant roman lipide-DNA in nanoparticle vorm van beheer van de verschillende routes in de muis: orale, subcutane, intranasale struikrover, intraperitoneaal en intraveneuze. Deze injecties zal direct invloed uitoefenen op de immuunrespons en oogsten van lymfatische weefsels en analyse van de activering van dendritische cellen (DC) in de weefsels zijn cruciale onderdelen van deze evaluaties. De winning van mediastinale lymfklieren (mLNs) is belangrijk maar vrij complex vanwege de grootte en de locatie van dit orgel. Een stapsgewijze procedure voor het verzamelen van de inguïnale lymfeklieren (iLN), de mLN, en de milt en het analyseren van DC activering door stroom cytometry wordt beschreven.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Immunologie en nanomaterialen vooruitgang hebben geleid tot een overvloed aan potentiële nieuwe therapeutische strategieën voor toepassingen in biologie, met inbegrip van de drug delivery en immunostimulation. Optimalisatie van de route van de administratie is een essentieel element beïnvloeden de effectiviteit van immunostimulerende agenten. Een immunostimulerende nanoparticle (INP) bestaande uit DNA is een nieuw ontwikkelde nano-immuun adjuvans zelf geassembleerd door microphase scheiding vanwege de amfifiele structuur van lipide-DNA1. Daarom, protocollen voor INP met betrekking tot beheer van de materiële1 in vivo....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle experimentele procedures, met inbegrip van dierlijke behandeling, offer en orgel isolatie werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de regels van de internationale Animal Care en gebruik Comité bij Shanghai volksgezondheid klinische Center en Asan Medical Center. Het studie-protocol is goedgekeurd door de respectieve commissies op de ethiek van dier experimenten op Shanghai volksgezondheid klinische Center (muis protocolnummer: SYXK-2010-0098) en Asan Medical Center (2016-02-168).

1. bereiding van materiaal

Opmerking: Een nano-adjuvans, INP, bestaat uit een drager van zelf geassembleerde lipide-DNA, nam....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Om te beoordelen van passende injectie routes van INP voor lymfatische weefsel DC activering, de DC-bevolking als geslacht werd gedefinieerd als -CD11c+ cellen in de milt, iLN en mLN en de niveaus van de expressie van co-stimulatory moleculen geanalyseerd. Behandeling van INP door onderhuidse (sc) en intraveneuze (IV) injectie bevorderd aanzienlijke stijgingen van de interactie CD40 CD80 en CD86 uitdrukking in de milt en iLN DCs (

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Veel vooruitgang in nanotechnologie en immunologie hebben bereikt door middel van therapeutische onderzoek voor drug delivery en immunostimulation. Zorgvuldige selectie van de injectie-methode is bekend als belangrijk voor immunostimulation, die was de focus van de huidige studie.

Verschillende injectie routes werden geëvalueerd voor een natuurlijk niet-giftige en biologisch afbreekbare op basis van DNA materiaal, INP (immunostimulerende nanoparticle), om te bepalen welke route het beste resul.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit onderzoek werd gesteund door creatieve materialen ontdekking programma via de nationale onderzoek Stichting van Korea (NRF) gefinancierd door het ministerie van wetenschap, ICT en toekomst Planning (NRF-2017M3D1A1039421) en mariene biotechnologie-programma gefinancierd door de Ministerie van oceanen en visserij, Republiek Korea en een grant (20150220).

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Materiaal
fosfaat bufferoplossing zoutCorning21-040-CVROrganen wassen
(PBS, pH 7,4)
isofluraanoplossing Aesica Queenborough limited26675-46-7Anesthesieproces
Tuberculin 1mL spuit -JunglimN/AInjectie
50 mL conische buis S.P.L50050Anesthesieproces
1mL Insuline spuit (BD Ultra-FineTM­II)_korte naald324826Intramusculaire injectie
DMEM Hoge GlucoseHycloneSH30081.01Organen opslaan
Histopaque Sigma-Aldrich10771FACS analyse
Ethyl alcohol anhydrisch 99,5 % Daejung4022-4110Ontsmettingsmiddel
Apparatuur
FineCycler C100 (Thermocycler)Ssufine-Anealing
CentrifugeCentrifuge
FACS buis FALCON2052FACS analyse
Geautomatiseerde hoge prestatie flowcytometerBD (USA), FACSVerse-FACS analyse

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Park, H. Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , Department of Chemistry. Pukyong National University, Master Thesis. (2016).
  2. Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Lymphoid Tissue ExtractionDendritic Cell ActivationFlow CytometryMediastinal Lymph NodeInguinal Lymph NodeSpleen IsolationImmunostimulatory AgentInjection RouteDC Activation AnalysisNanoparticle Immunostimulant

Gerelateerde artikelen