Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Vervoeging-geïnduceerde fluorescerende gepegyleerde virusachtige deeltjes door Dibromomaleimide-disulfide chemie maken

6.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/57712

⸱

27 mei 2018

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry & Biochemistry, University of Texas at Dallas, 2Undergraduate Biology, University of Texas at Dallas, 3Undergraduate Healthcare Studies, University of Texas at Dallas, 4Departments of Chemistry & Biochemistry and Biomedical Engineering, University of Texas at Dallas

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een procedure fluorescently functionalize de disulfides op Qβ VLP met dibromomaleimide. We beschrijven Qβ meningsuiting en zuivering, de synthese van dibromomaleimide-matiemaatschappij moleculen en de vervoeging reactie tussen dibromomaleimide en Qβ. Het resulterende gele fluorescerende geconjugeerd deeltje kan worden gebruikt als een fluorescentie sonde binnen cellen.

Samenvatting

De recente stijging van de virusachtige deeltjes (experimentele) in biomedische en onderzoek van materialen kan worden toegeschreven aan hun gebruiksgemak biosynthese, discrete grootte, genetische programmeerbaarheid en biologische afbreekbaarheid. Terwijl ze zeer vatbaar voor bioconjugation reacties voor het toevoegen van synthetische liganden op hun oppervlak, is het bereik in bioconjugation methodologieën op deze waterige geboren capsids relatief beperkt. Ter vergemakkelijking van de richting van functionele biomaterialen onderzoek, moeten niet-traditionele bioconjugation reacties worden beschouwd. De reactie beschreven in dit protocol maakt gebruik van dibromomaleimides om nieuwe functionaliteit in het oplosmiddel blootgestelde bisulfide obligaties van een VLP gebaseerd op bacteriofaag Qβ. Bovendien is het eindproduct TL, die heeft het extra voordeel van het genereren van een traceerbare in vitro sonde met behulp van een commercieel beschikbare filter set.

Inleiding

Met behulp van virale capsids nano-sized heeft ontpopt als een spannende gebied, die gericht is op het verbreden van de reikwijdte van toepassingen in biomedisch onderzoek1,2,3. Recombinantly uitgesproken virusachtige deeltjes (experimentele) zijn structureel afgeleid van virussen, maar ze missen de oorspronkelijke virale genetische materiaal waardoor ze niet-infectieuze eiwithoudende nanodeeltjes. Aangezien de oppervlaktekenmerken zijn genetisch geprogrammeerd en elke Eiwitmantel identiek aan die voor en na het wordt uitgedrukt, is het mogelijk om te weten de locatie en het aantal reactieve zijketens van de aminozuren met atomistic precisie. In veel gevallen bezitten zowel het exterieur en interieur oppervlak vele soorten oplosmiddel blootgestelde aminozuurresidu's, die redelijkerwijs kunnen worden matiemaatschappij door bioconjugation reacties - reacties die covalente bindingen tussen een Biomolecuul en een synthetische vormen molecuul4,5.

Bioconjugation reacties helpen biomoleculen van belang hebben diverser functionaliteiten op een relatief eenvoudige manier. Moleculen van belang, zoals therapeutische drugs6, fluorescerende labels7 en polymeren8,9 kunnen worden vooraf gesynthetiseerd en gekenmerkt voordat ze zijn aangesloten op het oppervlak van experimentele. Een bijzonder gemeenschappelijk VLP transferoefeningen biomedische en biomaterialen onderzoek geweest de VLP gebaseerd op bacteriofaag Qβ, die als recombinantly uitgesproken, is een 28 nm icosahedrale virale Eiwitmantel10. De meest voorkomende reactie sites op Qβ zijn lysines door een brede marge, hoewel wij hebben onlangs de succesvolle vervoeging11 van dibromomaleimide verbindingen aan de verminderde disulfides die lijn de poriën van Qβ via de reactie van een Haddleton-Baker meegedeeld. De reactie verloopt met een goede opbrengst en, even belangrijk, zonder verlies van de thermische stabiliteit van de deeltjes. Op hetzelfde moment genereert deze reactie vervoeging-geïnduceerde fluorescentie, die kan worden gebruikt voor het bijhouden van de opname van deze deeltjes in cellen. In dit werk tonen we de vervoeging van polyethyleenglycol (PEG) op het oppervlak van Qβ door de Haddleton-Baker-reactie, wat in een heldere gele fluorophore resulteert. Deze deeltjes kunnen vervolgens worden bijgehouden als ze worden genomen door de cellen. Het protocol hierin zal helpen genereren van nieuwe TL gepegyleerde eiwithoudende nanodeeltjes gebaseerd op Qβ, hoewel haar beginselen zijn van toepassing op een van de vele andere experimentele oplosmiddel blootgestelde disulfides met onderzoekers.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. voorbereiding

  1. Maken van lysogenie Bouillon (LB) agar en giet platen12.
  2. Tover BL21(DE3) met een plasmide van de pET28 met de wtQβ jas eiwit sequentie.
    1. Ontdooi E. coli BL21(DE3) bevoegde cellen in een ijsbad. Plaats 50 μl van cellen in een buis van microcentrifuge.
    2. Voeg 2 l plasmide in één buis en zachtjes flick de buis. Incubeer vervolgens op ijs gedurende 30 minuten.
    3. Warmte-schok de cellen voor 45 s in een waterbad dat precies 42 ° C. Plaats de buis terug in het ijsbad onmiddellijk na het warmte-schokkend en incubeer gedurende 5 min.
    4. Toevoegen van 950 μL van LB-media die geen antibioticum bevat.
    5. Schudden van de cultuur bij 200 omwentelingen per minuut gedurende 60 minuten bij 37 ° C.
    6. 100 μl van de cultuur op LB agar platen plaat (met kanamycine) en Incubeer de plaat 's nachts bij 37 ° C. Selecteer wit kolonies wanneer nodig.
  3. Super optimale Bouillon (SOB) media maken
    1. Autoclaaf twee 2 L verbijsterd conische kolven op een superdry cyclus.
    2. In een aseptische omgeving, weeg en Voeg 20,0 g trypton, 5,0 g gist extract, 2.469 g watervrij magnesium-sulfaat, 0.584 g natriumchloride en 0.186 g kaliumchloride aan elke maatkolf.
    3. Breng het volume tot 1 L met ultrazuiver water in elke kolf en autoclaaf op de vloeibare cyclus.
    4. Zodra de SOB-media kamertemperatuur na autoclaaf bereikt heeft, voeg 1 mL kanamycine (100 mg/mL) toe aan elke liter van media en bewaren bij 4 ° C.
  4. 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00) maken
    1. 1 M kalium monobasisch oplossing door het oplossen van 68.045 g kalium monobasisch in 500 mL ultrazuiver water maken
    2. 1 M kalium dibasische oplossing door het oplossen van 87.09 g kalium dibasische in 500 mL ultrazuiver water maken
    3. Voeg 38.5 mL kalium monobasisch oplossing en 61,5 mL kalium dibasische op een 1 L-fles.
    4. Breng pH op 7,00 indien nodig, en brengen een volume van 1 L.
  5. Maak 5 – 40% sucrose verlopen in 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00).
    1. Bereiden in 50 mL centrifuge buizen, oplossingen met 5 – 40% (in stappen van 5% stijgt) sacharose opgelost in 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00).
    2. Stort 3,3 mL 5% sacharoseoplossing onderin een ronde bodem polycarbonaat-tube 38 mL met behulp van een lange naald-spuit en herhaal deze procedure voor de vijf andere buizen.
    3. Zorgvuldig stort 3,3 mL 10% sacharoseoplossing aan de onderkant van de buis, en verwijder voorzichtig de naald wat betreft het verloop niet te storen. Herhaal voor de andere vijf buizen.
       
  6. Blijven storten 3,3 mL lagen van sacharose oplossingen, verhoging van 15% tot 40% in elke buis, terwijl ze voorzichtig om niet storen het verloop.
  7. Als alles klaar is, betrekking hebben op de toppen van de hellingen met folie en opslaan bij-80 ° C.

2. weergave van de Qβ

  1. Veeg Bank gebied met 1:1 bleekwater/ethanol.
  2. Maak twee 3 mL starterculturen in een aseptische omgeving door enkele kolonies van E. coli BL21(DE3) in 3 mL SOB media toe te voegen in een aseptische omgeving.
  3. Groeien in een roteerapparaat bij 250 omwentelingen per minuut in een 37 ° C en 0% relatieve vochtigheid (rH) kamer 's nachts.
  4. Inoculeer starter cultuur in SOB media:
    1. Beide 3 mL starterculturen opstijgen de shaker en giet in een aseptische omgeving, elke starter cultuur in één van de twee 2 L verbijsterd conische kolven met 1 L voor verse SOB media in elk.
    2. Plaats de geënte media op een shaker op 250 toeren per minuut in een 37 ° C en 0% rH-kamer.
  5. De bacteriën in een roteerapparaat bij 250 omwentelingen per minuut in een ruimte van 37 ° C en 0% rH groeien totdat OD600 0.9-1.0 bereikt.
  6. Voeg 1 mL 1 M isopropyl β-D-1 thiogalactopyranoside (IPTG) met behulp van een pipet P1000 ertoe eiwit expressie.
  7. Laat de media in het roteerapparaat bij 250 omwentelingen per minuut in een 37 ° C en 0% rH kamer 's nachts.
  8. Verwijder media uit de shaker de volgende ochtend en centrifuge met behulp van 1000 mL flessen bij 20,621 × g gedurende 1 uur bij 4 ° C om te oogsten van de cellen.
  9. Verwijder het supernatant en verzamelen van de cel-pellet.
    1. Giet het supernatant in een kolf met ongeveer 5 mL bleekwater om bacteriën te doden. Dit is afval.
    2. Gebruik een spatel om schrapen de cel pellet vanaf de onderkant van de centrifuge fles en zet de pellet in een centrifugebuis 50 mL.

3. de zuivering van Qβ

  1. Resuspendeer de pellet cel met ~ 20-30 mL 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00).
  2. Controleer of de resuspensie heeft geen brokken en lyse de cellen met een microfluidizer-processor volgens protocol van de fabrikant (Zie Tabel van materialen). Lyse de cellen ten minste tweemaal te verhogen van het rendement van de deeltjes.
  3. Centrifugeer het lysate in flessen van 250 mL centrifuge op 20,621 x g gedurende 1 uur bij 4 ° C.
  4. Negeren van de pellet en meten van de omvang van de bovendrijvende substantie in mL. Deze waarde vermenigvuldig met 0.265 en die hoeveelheid g ammoniumsulfaat toevoegen aan het supernatant.
  5. Roer bij 4 ° C gedurende ten minste 1 uur op een bord roer bij 200 t/min te precipiteren uit het eiwit.
  6. Centrifugeer in 250 mL flessen bij 20,621 x g gedurende 1 uur bij 4 ° C.
  7. Verwijder supernatant en resuspendeer de pellet met ongeveer 10 mL 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00).
  8. Gelijke hoeveelheden van 1:1 chloroform/n-butanol aan het ruwe monster en de mix toevoegen door de vortexing voor een paar seconden.
  9. Centrifugeer in 38 mL tubes 20,621 × g gedurende 30 minuten bij 4 ° C.
  10. De waterige toplaag met behulp van een precisiepipet Pasteur te herstellen. Wees voorzichtig niet te nemen een van de gel zoals laag die tussen de waterige en organische laag heeft gevormd.
  11. Ontdooi zes 5-40% pre-en-klare sacharose verlopen en laden van ongeveer 2 mL het extract op elk.
  12. Ultracentrifuge bij 99,582 x g gedurende 16 uur bij 4 ° C met gratis vertraging.
  13. Glans een licht emitterende diode (LED) licht onder elke buis en een blauwe band moet zichtbaar worden. Het herstellen van deze deeltjes met een lange naald-spuit.
  14. Ultrapellet de deeltjes op 370,541 x g gedurende 2,5 uur bij 4 ° C.
  15. Verwijder het supernatant en resuspendeer de transparante pellet van gezuiverde deeltjes met 0,1 M kalium fosfaatbuffer (pH 7,00).

4. kwantificering en bevestiging van het Product

  1. Gebruik analyse van Bradford te kwantificeren van de product-13.
  2. Stormloop te verminderen en niet-reducerende natrium dodecyl sulfaat polyacrylamide gelelektroforese (SDS-PAGE) om te bevestigen het product14.
    Opmerking: Vermindering van de SDS-pagina wordt gebruikt om te bevestigen het molecuulgewicht van vacht eiwit; niet-vermindering van SDS-pagina is ter bevestiging van de hogere orderstructuur.

5. conjugating DB verbindingen op Qβ

  1. Verminderen disulfides op Qβ.
    1. Los 0,0020 g tris(2-carboxyethyl) Fosfine (TCEP) in 1 mL ultrazuiver water te maken van een stamoplossing van 100 x.
      Opmerking: Bereiden verse TCEP vóór vermindering.
    2. Voeg 200 µL van Qβ (5 mg/mL) in een microcentrifuge buis.
    3. Volg door 20 µL van 100 x TCEP stockoplossing toe te voegen.
    4. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 uur.
  2. Opnieuw een brug verminderde bisulfide met behulp van dibromomaleimide polyethyleenglycol (DB-PEG).
    1. Los 0.0017 g dibromomaleimide-polyethyleenglycol (DB-PEG) in 100 µL DMF.
    2. Voeg 680 µL van 10 mM natriumfosfaat oplossing (pH = 5,00).
    3. Voeg Qβ verminderd in de oplossing van DB-PEG en observeren het mengen proces onder een 365 nm UV-lamp. De heldere gele fluorescentie kan onmiddellijk worden gevisualiseerd met een 365 nm handbediende UV-lamp op het mengen.
    4. Laat de reactie gaan 's nachts bij kamertemperatuur (RT) op een rotisserie.
  3. Het reactiemengsel zuiveren door centrifugaal filter (COMW = 10 kDa) drie keer met 1 x PBS op 3,283 x g gedurende 20 minuten bij 4 ° C.
  4. Controleren de vervoeging doordat niet-SDS-pagina en inheemse agarose gel electroforese.
    Opmerking: Experimentele uitgevoerd als intact deeltjes in native agarose gel, en zij worden gescheiden op basis van hun kosten, de grootte en de vorm.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De dibromomaleimide derivaten kunnen worden gesynthetiseerd door de condensatiereactie tussen dibromomaleimide anhydride (en) en primaire amines15. U kunt ook een milde synthetische methode16 met behulp van N-methoxycarbonyl ingeschakeld 3,4-dibromomaleimide misbruik wordt gemaakt van hier door te reageren met methoxypolyethylene glycol (PEG) rendement DB-PEG (Figuur 1). NMR werd gebruikt voor het identificeren ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Vergeleken met kleinere EiwitReiniging, is een unieke stap in het zuiveren van de bacteriofaag Qβ de gradiënt centrifugeren van sacharose. Na de chloroform/n-butanol extractie stap, is Qβ verder gezuiverd met behulp van 5-40% sucrose verlopen. Tijdens centrifugeren, worden deeltjes gescheiden op basis van hun grootte. Grotere deeltjes reizen naar de hogere dichtheid regio, terwijl de kleinere deeltjes blijven in de lagere regio van de dichtheid. Qβ reist naar het onderste derde van het verloop en blijft er terwijl kleine...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

J.J.G. erkent de National Science foundation (DMR-1654405) en de kanker preventie Research Institute of Texas (CPRIT) (RP170752s) voor hun steun.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
LB Broth (Miller) EMD Millipore1.10285.0500
Tryptone, PowederResearch Products InternationalT60060-1000.0
Yeast Extract, PowederResearch Products InternationalY20020-1000.0
Anhydrous magnesium sulfateP212121CI-06808-1KG
Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS)Fisher ScientificS271-10
Potassium ChlorideFisher ScientificBP366-500
Elga PURELAB Flex 3 Water Purification SystemFisher Scientific4474524
Potassium Phosphate MonobasicFisher ScientificBP362-1
Potassium Phosphate Dibasic AnhydrousFisher ScientificP288-500
SucroseFisher ScientificS25590B
EthanolFisher ScientificBP2818500
Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)Sigma AldrichI6758-1G
Fiberlite F10-4x1000 LEX rotor Fisher Scientific096-041053
Ammonium SulfateP212121KW-0066-5KG
ChloroformAlfa Aesar32614-M6
1-ButanolFisher ScientificA399-4
SW 28 Ti Rotor, Swinging Bucket, AluminumBeckman Coulter342204: SW 28 Ti Rotor/ 342217: Bucket Set
Type 70 Ti Rotor, Fixed Angle, Titanium, 8 x 39 mL,Beckman Coulter337922
Coomassie (Bradford) Protein AssayFisher ScientificPI23200
TRIS HydrochlorideResearch Products InternationalT60050-1000.0
TetramethylethylenediamineAlfa AesarJ63734-AC
Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochlorideSigma AldrichC4706-2G
2 3-Dibromomaleimide 97%Sigma Aldrich553603-5G
Polythylene GlycolAlfa Aesar41561-22
Sodium PhosphateFisher ScientificAC424375000
Acrylamide/bis-AcrylamideP212121RP-A11310-500.0
Sodium dodecyl sulfateSigma AldrichL3771-100G
Ammonium PersulfateFisher ScientificBP179-100
FV3000 confocal laser scanning microscopeOlympus FV3000 
Labnet Revolver Adjustable Rotator Thomas Scientific 1190P25 
1000 mL Sorvall High Performance Bottle, PC, with Aluminum Cap Thermo Scientific010-1459
Nalgene Centrifuge Bottles with Caps, Polypropylene CopolymerThermo Scientific3141-0250
Nunc Round-bottom tubes; 38 mL; PCThermo Scientific3117-0380
2 L Narrow Mouth Erlenmeyer Flasks with Heavy Duty RimPyrex4980-2L
Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter UnitsMillipore SigmaUFC801024
M-110P Microfluidizer Materials ProcessorMicrofluidicsM-110P
Nalgene High-Speed Polycarbonate Round Bottom Centrifuge TubesThermo Scientific3117-0380PK
Bottle, with Cap Assembly, PolycarbonateBeckman Coulter41121703
Cylinder, Graduated - Polypropylene 250 mLPolyLab80005
533LS-E Series Steam SterilizersGetinge533LS-E
TrueLine, Cell Culture Plate, Treated, PS, 96 Well, with LidLabSourceD36-313-CS
Falcon 15 mL Conical Centrifuge TubeFisher Scientific14-959-53A
Microcentifuge Tube: 1.5mLFisher Scientific05-408-129
VWR Os-500 Orbital ShakerVWR Scientifc Products14005-830
Tetra Handcast systemsBio-Rad1658000FC
Polypropylene, 250 mLBeckman Coulter41121703
Spectrofluorometer NanoDropThermo Fisher Scientific3300
Long Needle Hamilton 7693
Exel International 5 to 6 cc Syringes Luer LockFisher Scientific14-841-46
P1000 PipetmanGilsonF123602
P200 PipetmanGilsonF123601
P100 PipetmanGilsonF123615
P20 PipetmanGilsonF123600
P10 PipetmanGilsonF144802
Intel Weighing PM-100 Laboratory Classic High Precision Laboratory BalanceIntelligent Weighting TechnologyIWT_PM100
Falcon 50 mL Conical Centrifuge TubeFisher Scientific14-432-22
4–15% Mini-PROTEAN TGX Gel, 10 well, 50 µlBio-Rad456-1084

Referenties

  1. Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization. J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).
  2. Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids. J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).
  3. Li, S., et al. Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles. Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).
  4. Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology. WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).
  5. Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology. Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).
  6. Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy. Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).
  7. Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors. Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).
  8. Lee, P., et al. Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates. J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).
  9. Zhang, X., et al. Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity. ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).
  10. Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles. Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).
  11. Chen, Z., et al. Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle. Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).
  12. Addgene. Pouring LB Agar Plates. , Available from: https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ (2016).
  13. Bio-Rad. Bradford Protein Assay. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/4110065A.pdf (2017).
  14. Bio-Rad. Guide to Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Detection. , Available from: http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6040.pdf (2017).
  15. Smith, M., et al. Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides. J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).
  16. Castaneda, L., et al. A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones. Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).
  17. Fiedler, J., et al. Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle. Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).
  18. Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).
  19. Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. Dual Functionalized Bacteriophage Qβ as a Photocaged Drug Carrier. Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Bioconjugatiemethodedibromomale midechemieQBeta bacteriofaagreductie van disulfidebindingenfluorescente PEGyleringeiwitzuiveringultracentrifugatieSDS PAGE analysetransmissie elektronenmicroscopie
Vervoeging-geïnduceerde fluorescerende gepegyleerde virusachtige deeltjes door Dibromomaleimide-disulfide chemie maken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.