Frequente staart-tip bloedmonsters in muizen voor de beoordeling van Pulsatiele luteïniserend hormoon afscheiding

Samenvatting

Hier presenteren we een staart-tip bloed bemonstering protocol voor frequente sample collectie in ongebreidelde muizen. Deze methode is nuttig voor het beoordelen van patronen van Pulsatiele luteïniserend hormoon afscheiding en voor analyse van andere circulerende factoren zou kunnen worden aangepast.

Samenvatting

In vele endocriene systemen, circulerende factoren of hormonen niet continu worden vrijgegeven, maar als een afzonderlijke puls in reactie op een releasing factor worden uitgescheiden. Single-point bemonstering maatregelen zijn ontoereikend is om de biologische betekenis van de secretoire patroon van Pulsatiele hormonen in normale fysiologische omstandigheden of onder vervoersomstandigheden disregulatie volledig te begrijpen. Luteïniserend hormoon (LH) wordt gesynthetiseerd door de anterieure hypofyse de gonadotrope cellen en uitgescheiden in een Pulsatiele patroon waarvoor frequente verzameling van bloedmonsters voor beoordeling van de pols. Dit niet mogelijk is geweest in muizen totdat onlangs, als gevolg van de ontwikkeling van een hoog-gevoeligheids LH-test en vooruitgang in een techniek voor frequente laag-volume sample collectie, oorspronkelijk beschreven door Steyn en collega's. ¹ hier beschrijven we een protocol voor de frequente perifeer bloed monster collectie van muizen met voldoende behandeling acclimatisatie te detecteren Pulsatiele secretie van LH. Het huidige protocol gegevens een uitgebreide acclimatisatie periode waarmee beoordeling van robuust en continue pulsen van LH over meerdere uren. In dit protocol, het puntje van de staart is geknipt en bloed wordt verzameld uit de staart met behulp van een precisiepipet hand-held. Voor de beoordeling van Pulsatiele LH in gonadectomized muizen, seriële monsters worden verzameld elke 5-6 min voor 90-180 min. nog belangrijker is, de inzameling van bloed en meting van robuuste pulsen van LH kunnen worden bereikt in wakker, vrij gedragend muizen, passende behandeling gegeven acclimatisatie en inspanning om te minimaliseren milieustressoren. Voldoende acclimatisatie kan binnen 4-5 weken voorafgaand aan de bloedinzameling worden bereikt. Dit protocol onderstreept voorschotten in de methodologie om bloed monsters voor evaluatie van Pulsatiele LH secretie patronen over meerdere uren in de muis, een krachtige diermodel voor neuro-endocriene onderzoek.

Inleiding

Gonaden functie bij zoogdieren is afhankelijk van choriongonadotrofine secretie, luteïniserend hormoon (LH) en follikelstimulerend hormoon, uit de hypofyse. De gonadotrofinen worden uitgescheiden in een gepulseerde of Golf patroon in reactie op de hypothalamische secretie van gonadotropin - releasing hormone (GnRH). De synthese en secretie van zowel LH als FSH worden geregeld via een actie van de verstoringen van de hormoonhuishouding, paracrine en autocrine uit een aantal moleculen met inbegrip van hypothalame GnRH, gonadale steroïde hormonen, en de activin-inhibine-follistatin systeem, evenals een groot aantal fysiologische omstandigheden, waaronder stress en energi....

Protocol

De hier beschreven methode is in overleg met de nationale instituten van gezondheid Animal Care en de richtsnoeren voor het gebruik en door de institutionele Animal Care en gebruik Comité bij de University of California, San Diego zijn gemachtigd.

1. de acclimatisatie aan behandeling

1. Afhandelen van de procedure
   1. Plaats de muis kooien in het biosafety kabinet. Verwijder de eerste muis uit de kooi en de plaats op een daartoe geschikte werkvloer (bijvoorbeeld een schone kooi deksel) binnen het biosafety kabinet.
   2. Zachtjes de muis op het werkvlak te beperken door de basis van de staart met de wijsvinger en de....

Resultaten

Representatieve LH pulse patronen van 4 muizen worden weergegeven in Figuur 1 (gegevens herdruk van Yang et al., 2017). LH werd gemeten in frequente bloedmonsters om te bepalen het antwoord op de uitdaging van een acute psychosociale stress. Volwassen vrouwelijke C57/Bl6 muizen waren ovariectomized en behandeld zoals beschreven in dit protocol voor frequente bloed collectie. Bloedmonsters werden verzameld gedurende de eerste 90 min. in alle dieren va.......

Discussie

Hier beschrijven we een protocol voor frequente bloedinzameling volbloed staart-tip monsters voor evaluatie van Pulsatiele LH secretie in muizen. Dit protocol maakt het verzamelen van monsters voor detectie van acute veranderingen in Pulsatiele LH secretie na blootstelling aan psychosociale stress en is geschikt voor de beoordeling van LH pulsen onder andere acute of chronische manipulaties.

Een essentieel onderdeel van dit protocol voor het bereiken van betrouwbare en robuuste profielen van L.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Biosaftey cabinet	Lab Products Inc	L/F-B
Bovine serum albumin	Sigma	A5403
Tween-20	Sigma	P2287
KCl	Sigma	P9333
NaCl	Sigma	S7653
Na2HPO4 (anhydrous)	Sigma	S7907
KH2PO4	Sigma	P5655
Ultrapure water	Millipore		Gezuiverd en gefilterd water
Broome Rodent Restraint Device	Harvard Apparatus	52-0460	Niet noodzakelijk voor bloedafname, maar werd gebruikt bij het verzamelen van representatieve gegevens.
DynPeak	n/a	n/a	http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001