Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een nieuwe chirurgische techniek als een fundament voor In Vivo gedeeltelijke lever Engineering in Rat

8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/57991

⸱

6 oktober 2018

 ,  ,  ,  , 

In dit artikel

Samenvatting

We stellen een nieuwe chirurgische techniek voor een in vivo één lever kwab perfusie model in rat als een voorwaarde voor de verdere studie van in vivo gedeeltelijke lever techniek in de toekomst.

Samenvatting

Orgel engineering is een nieuwe strategie voor het genereren van lever orgel substituten die potentieel kunnen worden gebruikt in de transplantatie. Onlangs, in vivo lever engineering, met inbegrip van in vivo orgel decellularization gevolgd door herbevolking, heeft ontpopt als een veelbelovende aanpak over ex vivo lever engineering. Postoperatieve voortbestaan werd echter niet bereikt. Het doel van deze studie is te ontwikkelen van een nieuwe chirurgische techniek van in vivo selectieve lever kwab perfusie bij ratten als een voorwaarde voor in vivo lever engineering. We genereren een bypass circuit alleen via de linker laterale kwab. Vervolgens is de linker kwab van laterale geperfundeerd met EDTA zoutoplossing. Het experiment wordt uitgevoerd met 4 groepen (n = 3 ratten per groep) op basis van verschillende perfusie tijden van 20 min, 2 h, 3 h en 4 h. overleven, evenals het macroscopisch zichtbare verandering van kleur en het histologisch vastberaden ontbreken van bloedcellen in het Portal triade en de blokgolven, wordt beschouwd als een indicator voor de oprichting van een succesvolle model. Na selectieve perfusie van de linker laterale kwab zien we dat de linker laterale kwab, inderdaad, van rood naar flauw geel draaide. In een histologisch beoordeling zijn geen bloed cellen zichtbaar in de tak van de portal-ader, de centrale ader en de sinusoïdes. De linker laterale kwab rood na de heropening van de geblokkeerde bloedvaten. 12/12 ratten overleefde de procedure voor meer dan een week. Wij zijn de eerste om te rapporteren een chirurgische model voor in vivo één lever kwab perfusie met een periode van lange overleving van meer dan een week. In tegenstelling tot de eerder gepubliceerde verslag, is het belangrijkste voordeel van de techniek die hier gepresenteerd dat perfusie van 70% van de lever wordt gehandhaafd gedurende de hele procedure. De oprichting van deze techniek biedt een basis voor in vivo gedeeltelijke lever engineering bij ratten, met inbegrip van decellularization en recellularization.

Inleiding

De indicaties voor orgaantransplantatie zijn voortdurend uitbreiden. Daarentegen afneemt orgaan donatie tarieven en de algehele kwaliteit van organen, wat leidt tot een toenemende vraag naar protheses. Het aantal kandidaten die zijn toegevoegd aan de wachtlijst voor levertransplantatie blijven stijgen (bijvoorbeeldin de Verenigde Staten, 11,340 patiënten werden toegevoegd in 2016, vergeleken met 10,636 in 2015)1. Ondanks aanzienlijke inspanningen behoeften het aantal beschikbare organen niet klinische. Als gevolg van de verhoogde incidentie van leverziekte, worden veel patiënten met end--toneel lever ziekten sterven op de wachtlijst vo....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

De behuizing en alle procedures uitgevoerd in overeenstemming waren met het welzijn van de Duitse wetgeving. Alle gaas, bekleding kleren en chirurgische instrumenten zijn gesteriliseerde met autoclaaf en bereid vóór de bewerking. Alle procedures worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden.

1. voorbereiding van de Rat van de chirurgische ingreep.

  1. Plaats de rat in een zaal van de inductie en anesthetize van de rat met 4% verdampt Isofluraan en 100% zuurstof op 0.5 L/min gedurende ongeveer 3 minuten, totdat de rat is volledig verdoofd.
  2. De rat uit de kamer van de inductie en meten van zijn lichaamsgewicht.
  3. Sche....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Twaalf man (leeftijd 12 - 13 weken) Lewis ratten werden gebruikt voor het beoordelen van het effect van selectieve lever kwab perfusie. Het experiment werd uitgevoerd in vier groepen (n = 3 ratten per groep). Met behulp van verschillende perfusie periodes van 20 minuten, bereikt 2 uur, 3 uur en 4 uur, na de stappen die hierboven beschreven, we met succes in vivo één kwab perfusie.

In Vivo

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Door blokkeren en cannulating de linker portal ader met een katheter als een vloeistof inlaat en de linker laterale hepatische ader met een katheter als een vloeistof outlet, we met succes hebben gemeld een in vivo vloeistof bypass binnen de linker laterale kwab, waaruit blijkt dat Hoewel de techniek zeer uitdagend vanwege de geringe omvang van de schepen voor cannulation en een hoog risico is veroorzaken bloedingen, is het haalbaar. Zelfs de ratten in een periode van lange perfusie van 4 uur overleefde ten mins.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs bedank Jens Geiling van de Instituut van Anatomie I, Jena universitair ziekenhuis, voor de productie van de schematische tekeningen van rat lever anatomie.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Perfusiepomp
Perfusor VIB. Braun, Melsungen
Catheter
Versatus-W  CatheterTerumoSR+DU2419PX24G, 0.74×19mm
Versatus-W  CatheterTerumoSR+DU2225PX22G, 0.9×25mm
micro chirurgisch instrument
micro schaarF·S·LNo. 14058-09
micro klemmenF·S·LNo.18055-05
Micro klemmen applicatorF·S·LNo. 18057-14
Rechte micro pincetF·S·LNo. 00632-11
Gebogene micro pincetF·S·LNo. 00649-11
micro naaldhouderF·S·LNo. 12061-01
algemene chirurgische instrumenten
standaard schaarF·S·L
mosquito klemF·S·L
gekartelde pincetF·S·L
getande pincetF·S·L
naaldhouderF·S·L
naadmateriaal
4-0 proleneethicon
4-0 ETHICON*IIethicon
6-0 zijdeethicon
11-0 polyamideethicon

Referenties

  1. Kim, W. R., et al. OPTN / SRTR 2016 Annula Data Report: Liver. American Journal of Transplantation. Suppl. 1, 172-253 (2018).
  2. Palakkan, A. A., Hay, D. C., Anil Kumar, P. R., Kumary, T. V., Ross, J. A. Liver tissue engineering and cell sources: issues and chal....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

In vivo leverengineeringselectieve leverkwabperfusiegehepariniseerde saline perfusielinker laterale kwabcanulatie van de poortadercanulatie van de leveraderchirurgische bypass-technieklangetermijnoverlevingsmodelpartiële leverperfusievasculaire toegangspunten