Caenorhabditis Zeef: Een Low-tech Instrument en methodologie voor het sorteren van kleine meercellige organismen

Summary

Het huidige protocol bevat een methode voor het sorteren en het schoonmaken van leeftijd-matched populaties van Caenorhabditis elegans. Het gebruikt een eenvoudig, goedkoop, en efficiënt instrument is op maat te verkrijgen een grote experimentele populatie van nematoden voor onderzoek.

Abstract

Caenorhabditis elegans (C. elegans) is een reeds lang gevestigde model-organisme gebruikt in een heel scala van fundamenteel en biomedisch onderzoek. Binnen de nematode onderzoeksgemeenschap is er een behoefte aan een betaalbare en effectieve manier om grote, leeftijd-matched populaties van C. elegans. Hier presenteren we een methode voor het mechanisch sorteren en reiniging van C. elegans. Ons doel is om een rendabel, efficiënt, snel en eenvoudig proces om te verkrijgen van dieren van uniforme afmetingen en levensfasen voor hun gebruik in experimenten. Deze tool, zeef Caenorhabditis hanteert een custom-built deksel die draden op gemeenschappelijke conische lab buizen en sorteert C. elegans gebaseerd op lichaamsgrootte. We laten ook zien dat de Caenorhabditis zeef effectief dieren van één cultuur plaat brengt naar een ander toe te staan voor een snelle sorteren, synchroniseren, en het schoonmaken zonder de beïnvloedende markers van gezondheid, met inbegrip van de motiliteit en stress-afleidbare gen de verslaggevers. Deze toegankelijk en innovatieve tool is een snelle, efficiënte en niet-stressvolle optie voor het handhaven van C. elegans populaties.

Introduction

De nematode worm, Caenorhabditis elegans, is een premier model-organisme. Naast het eenvoudig en gecontroleerde karakter van hun teelt in het laboratorium, hun gehele genoom is gesequenceerd¹ en het ontwikkelings lot van elke cel²is bekend. Als gevolg van deze functies is C. elegans een veel gebruikte modelorganisme voor genetische studies. Nochtans, samen met deze gunstige kenmerken komen sommige uitdagingen voor onderzoekers. Als gevolg van hun snelle generatietijd, C. elegans populaties kunnen snel opraken van voedsel en/of populaties met meerdere generaties worden gemengd en ontwikkelingsst....

Protocol

1. Caenorhabditis zeef constructie en het gebruik

1. Opbouw protocol
   1. Verwerven 2 deksels van 50 mL conische buisjes (figuur 1A).
   2. Verwijderen van het centrum-gebied binnen de binnenste lip van de deksels (wanneer bekeken vanaf de onderkant, figuur 1B) met behulp van een bunsenbrander en een sonde van ruwijzer of een soldeerbout of stapte boor bits.
      Opmerking: Gebruik van warmte te snijden van de plastic deksel is beter dan een mes omdat er minder risico van verwonding.
   3. Schoon en zand van gesneden randen en top van het oppervlak met een geboge....

Results

De Caenorhabditis zeef bestaat uit 2 schroefdoppen, beveiligen van een gebied met een geweven nylon monofilament maaswijdte kleiner zijn dan de diameter van het lichaam van de gewenste developmental leeftijd, gebruikt voor het onttrekken van levende populaties van organismen met behulp van een eenvoudige wassen techniek. Het hecht aan standaard conische buizen en gebruikt het scherm mesh mechanisch dieren sorteren door de diameter van het lichaam, waardoor de gewenste dieren in d.......

Discussion

We geïntroduceerd hierin, het ontwerp en gebruik van een toegankelijke, effectieve Caenorhabditis zeef als een instrument voor het sorteren en het onderhouden van C. elegans. Dit hulpmiddel heeft verschillende voordelen aan het handmatig plukken van individuele dieren, het wassen van populaties, chemische behandelingen (bijvoorbeeldFUDR) of duurder methoden van laagniveau dieren. Ten eerste, de Caenorhabditis zeef efficiënt en snel (minder dan 20 min) sorteert nakomelingen van grote ge.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Safety glasses	Uline	S-21076
Protective heat resistant glove	Grainger	Item # 3AT17 Mfr. Model # 3AT17 Catalog Page # 1703
50 mL conical tube	Falcon	14-432-22
Synthetic Nylon mesh	Dynamic Aqua-Supply Ltd	NTX20 and NTX50
Cyanoacrylate glue	Scotch Super Glue Liquid	SAD114
Pliers	Vampliers	VMPVT-001-8
Dremmel tool with circular file	Lowe's	Item # 525945 Model # 100-LG
FUDR	Sigma	F0503
M9 chemicals ( NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4)	Sigma	S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506
NGM plate chemicals (Bactopeptone, Agar, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2,Cholesterol, Streptomycin)	BD Biosciences (bactopeptone) , Lab express (agar), Sigma ( rest)	BD bioscience 211677, Lab Express 1001,  Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501
Pluronic F-127	Sigma	P2443
Paraquat dichloride hydrate	Sigma	36541
Inverted fluorescence microscope	Olympus	FSX100