Methoden voor het meten van sympathiek en cardiovasculaire reacties op het centrale zenuwstelsel (CNS) manipulaties zijn belangrijk voor het bevorderen van de neurowetenschappen. Dit protocol werd ontwikkeld om te helpen wetenschappers met meten en kwantificeren van acute wijzigingen in renal sympathiek zenuw activiteit (RSNA) bij narcose ratten (niet-overleving).
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Acute wijzigingen kwantificeren van de renale sympathiek zenuw activiteit in reactie op het centrale zenuwstelsel manipulaties bij narcose ratten
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Renale sympathiek zenuw activiteit (RSNA) en gemiddelde arteriële druk zijn belangrijke parameters in de cardiovasculaire en autonome onderzoek; echter, er zijn beperkte middelen leiden wetenschappers in de technieken voor het meten en analyseren van deze variabelen. Dit protocol beschrijft de methoden voor het meten van de RSNA en gemiddelde arteriële druk bij narcose ratten. Het protocol bevat ook de benaderingen voor toegang tot de hersenen tijdens RSNA opnames voor manipulaties van het centrale zenuwstelsel (CNS). De RSNA opname-techniek is compatibel met farmacologische, optogenetic, of elektrische stimulatie van het centraal zenuwstelsel. De aanpak is handig wanneer een onderzoeker zal op korte termijn (min tot en met h) en autonome reacties in niet-survival experimenten te correleren anatomisch met CNS kernen meten. De aanpak is niet bedoeld om te worden gebruikt voor het verkrijgen van chronische (overleving) opnames van de RSNA in ratten. Lozingen in RSNA, gemiddeld gerectificeerd RSNA en gemiddelde arteriële druk kan worden gekwantificeerd en geanalyseerd verder met parametrische statistische toetsen. Methoden voor het verkrijgen van veneuze toegang, gemiddelde arteriële druk telemetrically opnemen en hersenen fixatie voor toekomstige histologische analyse worden ook beschreven in het artikel.
Inleiding
Pre-klinische ontdekkingen over autonome controle van het cardiovasculaire systeem informeren strategieën voor het beheer van aandoeningen, zoals hypertensie, hartfalen en chronische nierziekte. Overmatige activiteit van het sympathische zenuwstelsel en verminderde vagale cardiale Toon bijdragen tot een verhoogde bloeddruk (BP)1. Chronisch verhoogde renale sympathiek uitstroom verbetert catecholamine secretie en vermindert renale doorbloeding, met schadelijke gevolgen voor de cardiovasculaire/renale systemen2,3. Als u wilt definiëren de neurobiologische trajecten leiden tot autonome dys....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle beschreven methoden werden goedgekeurd door de Commissie institutionele Animal Care zaken aan de Universiteit van Illinois te Chicago.
1. Maak bipolaire RSNA elektroden
- Als wilt maken van de elektrode, Knip twee stukken van roestvrij staaldraad elke ongeveer 18 mm lang. Knip een stukje van polyethyleen (PE-50) buizen ongeveer 15 mm lang. Voer beide stukken draad in de buis, waardoor de draad aan beide kanten uitsteekt.
- Verwijderen van de isolatie van de uiteinden van de draden; Knip de draden verlaten van 2-3 mm van blootgestelde draad. Aan de ene kant, krimp mannelijke pinnen over de blootgestelde draad. Soldeer de....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuur 1 illustreert een voorbeeld RSNA en BP opname van een rat Nembutal-verdoofd. Een intraveneuze injectie van phenylephrine werd gebruikt voor het opwekken van een toename van de gemiddelde arteriële druk en te roepen van de baroreflex en van voorbijgaande aard sympathoinhibition4,6. Om te kwantificeren RSNA was de ruwe RSNA verholpen en gemiddeld voor niet-overlappende 10 s segmenten; de schattin.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Kritische stappen voor het meten van de RSNA omvatten: (1) het voorkomen van stretching van de renale slagader en de zenuwen bij het scheiden van de nier van de paraspinal spier en bij het plaatsen van het zenuw-segment op de elektroden van de opname, (2) zorgvuldig ontrafeling van de renale zenuwvezels van het omringende weefsel/vaartuig, (3) ervoor te zorgen dat de elektrode draden zijn vrij van weefsel, bloed of lymfe vloeistof en (4) beletten de zenuw uitdrogen door toepassing van minerale olie op de renale zenuw en .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Anne M. Fink is een lid van de Advisory Board van de klant voor gegevens wetenschappen International.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door het Rijksinstituut voor verpleegkunde onderzoek (K99/R00NR014369).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
```html
```
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Roestvrijstalen draad | A-M Systems; Sequim, WA | 791000 | RSNA-elektrode |
| Polyethyleen (PE-50) slang | VWR; Radnor, PA | 63019-048 | RSNA-elektrode; vatcanule |
| Miniatuur pin-connector | A-M Systems; Sequim, WA | 520200 | RSNA-elektrode |
| Krimptang | Daniels Manufacturing Corp.; Orlando, FL | M22520 | RSNA-elektrode |
| Connectorstrip | Amphenol; Clinton Township, MI | 221-2653 | RSNA-elektrode |
| J-B Kwik Epoxy | J-B Weld, Sulphur Springs, TX | 8270 | RSNA-elektrode |
| Silicone | Permatex; Hartford, CT | 2222 | RSNA-elektrode |
| Heparine natrium; Injecteerbaar (10 mL-fles, 1000 U/mL) | KV Veterinary Supply; David City, NE | P03466 | Veneuze lijndoorstroming |
| Fenylefrine HCl; Injecteerbaar (1 mL-fles; 10 mg/mL) | ACE Surgical Supply; Brockton, MA | 950-6312 | Testen van renale sympatho-remming |
| Elastische chirurgische draadjes met enkele haak | Harvard Apparatus; Holliston, MA | 72-2595 | Incisie |
| Chirurgisch zijdentape | 3M, Minneapolis, MN | 1538-0 | Vaste chirurgische draadjes |
| Naalden, 20 G | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | Z192554-100EA | Vaatcanule |
| Dumont #7 gebogen pincet | Fine Science Tools; Foster City, CA | 11274-20 | Vaatcanule |
| 5-0 zijden hechtdraad | Braintree Scientific; Braintree, MA | SUT-S 106 | Vaatcanule |
| Delicaat hemostatisch pincet | Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD | RS-7117 | Vaatcanule en RSNA-chirurgie |
| Crile hemostatisch pincet | Fine Science Tools; Foster City, CA | 13004-14 | Nadel buigen |
| Telemetriezender | Data Sciences International; Minneapolis, MN | PA-10 | Gemiddelde arteriële drukmonitoring (telemetrie) |
| Re-gel spuit | Data Sciences International; Minneapolis, MN | 276-0038-001 | Hergebruik zender (telemetrie) |
| Wegwerp druktransducer | Transpac; San Clemente, CA | MI-1224 | Gemiddelde arteriële drukmonitoring |
| Clear-Cuff drukinfuser | MILA International Inc.; Florence, KY | 2281339 | Gemiddelde arteriële drukmonitoring |
| Vaatcanule pincet | Fine Science Tools; Foster City, CA | 00574-11 | Katheter inbrengen |
| Zwarte monofilament nylon 4-0 hechtdraad op omgekeerd snijdende naald | McKesson Medical-Surgical; San Francisco, CA | S661GX | Telemetriezender vastzetten |
| Telemetrieontvanger | Data Sciences International; Minneapolis, MN | RPC-1 | Gemiddelde arteriële drukmonitoring (telemetrie) |
| LabChart Pro (software), PowerLab (verwervingshardware) | AD Instruments; Colorado Springs, CO | ML846, MX2 matrix 2.0 (Compatibel met Data Science International telemetrie) | 3 opties voor software/verwervingshardware |
| SciWorks (software), DataWave (verwervingshardware) | DataWave Technologies, Loveland, CO | N/A | |
| Spike 2 (software), Micro1401-3 | Cambridge Electronic Design Ltd., London UK | 1401-3 | |
| Microboor | Roboz Surgical Instrument Co.; Gaithersburg, MD | RS-6300 | CNS-chirurgie |
| Stereotaxische chirurgieframe | Stoelting; Wood Dale, IL | 51600 | CNS-chirurgie |
| Micro-elektrodenversterker met 10X voorversterker | A-M Systems; Sequim, WA | 1800-2 | RSNA-opname |
| Retractoren | Fine Science Tools; Foster City, CA | 17009-07 | RSNA-chirurgie |
| Micro-dissectiepincet | Fine Science Tools; Foster City, CA | 11251-10 | RSNA-chirurgie |
| Micro-haak | Fine Science Tools; Foster City, CA | 10064-14 | RSNA-chirurgie |
| Mineralolie | Fisher Scientific; Waltham, MA | 8042-47-5 | RSNA-chirurgie |
| Audiomonitor | A-M Systems; Sequim, WA | 3300 | RSNA-chirurgie |
| Silicagel | Wacker, Munchen; Duitsland | RT601A-B | RSNA-chirurgie |
| Elektrische klemmen | Tyco Electronics; Schaffhausen, Zwitserland | EB0283-000 | Aarden of bevestigen perfusienaad |
| Bonn schaar, rechte/scherpe punten | Roboz Surgical Instrument Co; Gaithersburg, MD | RS-5840 | Perfusie |
| Gavagenaald | Harvard Apparatus; Holliston, MA | 75-0286 | Perfusie |
| Masterflex perfusiepomp | Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 7524-10 | Perfusie |
| Masterflex platina-gecureerde siliconen slang | Cole-Parmer; Vernon Hills, IL | 96410-15 | Perfusie |
| Formaline (10% gebufferde oplossing; 4 L) | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | HT501128 | Perfusie |
| Sucrose | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | S0389 | Cryoprotectie |
Referenties
- Mancia, G., Grassi, G. The autonomic nervous system and hypertension. Circulation Research. 114 (11), 1804-1814 (2014).
- Kannan, A., Medina, R. I., Nagajothi, N., Balamuthusamy, S. Renal sympathetic nervous system and the effects of denervation on renal arteries. <....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
