Arbovirus infecties als Screening van hulpmiddelen voor de identificatie van de virale Immunomodulators en Host antivirale factoren

Emily A. Rex; Dahee Seo; Don B. Gammon

doi:10.3791/58244

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Arbovirus infecties als Screening van hulpmiddelen voor de identificatie van de virale Immunomodulators en Host antivirale factoren

6.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58244

⸱

13 september 2018

Emily A. Rex¹ , Dahee Seo¹ , Don B. Gammon¹

¹Department of Microbiology, University of Texas Southwestern Medical Center

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we de protocollen om te identificeren 1) virus-gecodeerde immunomodulators ter bevordering van arbovirus replicatie en 2) eukaryotische gastheer factoren die arbovirus replicatie beperken. Deze fluorescentie - en luminescentie gebaseerde methoden toestaan onderzoekers snel verkrijgen van kwantitatieve uitlezingen van arbovirus replicatie in simplistische testen met lage signaal-ruis verhouding.

Samenvatting

RNA-interferentie- en genoom bewerken gebaseerde screening platformen hebben wijd gebruikt factoren te identificeren host cel die replicatie van het virus te beperken. Deze schermen worden echter meestal uitgevoerd in cellen die natuurlijk vrijblijvend naar de virale pathogen bestudeerde zijn. Dus, de robuuste replicatie van virussen in controlevoorwaarden kan het beperken van het dynamisch bereik van deze schermen. Bovendien, deze schermen kunnen zijn niet gemakkelijk identificeren Cellulaire verdediging trajecten die virus replicatie te beperken als het virus is goed aangepast aan de host en staat voor het tegengaan van antivirale verdedigingen. In dit artikel beschrijven we een nieuw paradigma voor het verkennen van virus-gastheer interacties door het gebruik van schermen die midden op natuurlijk mislukte infecties door arboviruses zoals vesiculaire stomatitis-virus (VSV). Ondanks de mogelijkheid van VSV te repliceren in een brede waaier van dipteran insecten en zoogdieren hosts, ondergaat VSV een infectie na binnenkomst, mislukte in een verscheidenheid van cellijnen afgeleid van Lepidoptera insecten, zoals de plakker (Lymantria dispar). Echter, deze mislukte VSV-infecties kunnen worden "gered" toen host cel antivirale verdediging in het gedrang komt. We beschrijven hoe VSV stammen coderen handige reporter genen en beperkende L. dispar cellijnen kunnen worden gekoppeld aan set-up schermen gastheer factoren die betrokken zijn bij arbovirus beperking te identificeren. Bovendien laten we ook zien het nut van deze screening-programma's in de identificatie van viraal gecodeerde factoren die VSV replicatie tijdens wordt of via ectopische expressie redden, met inbegrip van die gecodeerd door zoogdieren virussen. De natuurlijke beperking van VSV replicatie in L. dispar cellen biedt een hoge signaal-/ ruisverhouding wanneer screening voor de voorwaarden ter bevordering van de VSV redding, waardoor het gebruik van simplistische luminescentie en fluorescentie-gebaseerde testen om te controleren de veranderingen in de VSV replicatie. Deze methoden zijn waardevol voor het begrijpen van de interactie tussen gastheer antivirale reacties en virale immuun belastingontduiking factoren.

Inleiding

Het vermogen van een virus om productief te repliceren in een bepaalde host wordt gedeeltelijk beheerst door de beschikbaarheid van de ontvangende cel factoren die ondersteuning bieden voor virale ingang en replicatie¹. Het virus-gastheer bereik kan ook worden bepaald door de capaciteit van een virus aan teller cellulaire antivirale verdediging die virale replicatie²^,³anders zouden hinderen. Het is het resultaat van deze complexe virus-gastheer interacties die uiteindelijk beslissen of een virus zal zitten kundig voor voltooien hun levenscyclus in een bepaalde host. Gezien de potentieel....