Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking

12K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58291

⸱

19 januari 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Nantes Angers (CRCINA), Institut national de la santé et de la recherche médicale (INSERM), Université d'Angers, Université de Nantes, Nantes, France, 2Service de chirurgie pédiatrique, Centre hospitalier universitaire (CHU) de Nantes, Nantes, France, 3Unité de Formation et Recherche (UFR) des Sciences Pharmaceutiques et Biologiques, Université de Nantes, Nantes, France

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol wordt beschreven hoe synergie tussen een antikanker antilichaam en Antineoplastische drugs in preklinische modellen met behulp van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay beoordelen.

Samenvatting

Potentiëring van vijandige monoclonal antilichamen (mAb) door chemotherapeutische agenten vormt een waardevolle strategie voor het ontwerpen van effectiever en veiliger therapie tegen kanker. Wij bieden hier een protocol ter identificatie van een rationele combinatie bij het preklinische stap. Eerst beschrijven we een cel-gebaseerde test om te beoordelen van de synergie tussen antikanker mAb en cytotoxische medicatie, die gebruikmaakt van de combinatie index vergelijking van Chou en Talalay1. Het gaat hierbij om de meting van tumor cel drugs - en antilichaam-gevoeligheid met behulp van een MTT assay, gevolgd door een analyse van de geautomatiseerde computer voor het berekenen van de waarden van de index (CI) combinatie. CI waarden van < 1 geven synergie tussen geteste mAbs en cytotoxische stoffen1. Om te bevestigen de in vitro bevindingen in vivo, beschrijven we verder een methode voor de beoordeling van de werkzaamheid regime combinatie in een xenograft tumor model. In dit model vertragingen de gecombineerde regime aanzienlijk tumorgroei, wat in een aanzienlijke langere overleving in vergelijking met single-agent besturingselementen resulteert. Nog belangrijker is, blijkt de in vivo experimenten dat de combinatie regime wordt goed verdragen. Dit protocol staat toe de doeltreffende evaluatie van antikanker drug combinaties in preklinische modellen en de identificatie van rationele combinatie in klinische proeven te evalueren.

Inleiding

De conventionele aanpak in de behandeling van een groot aantal verschillende soorten kanker was gebaseerd op monotherapie. Zelfs als het nog steeds in veel gevallen gebruikt wordt, ontmoette deze methode verscheidene obstakels leidt tot kiezen voor gecombineerde therapieën2. In het bijzonder zijn de kankercellen gevoeliger voor het ontwikkelen van weerstand bij het behandeld met een enkele drug door inducerende alternatieve overleving mechanismen3, wat resulteert in therapeutisch falen in patiënten4. Bovendien, in monotherapie, drugs zijn meestal bestuurd bij een hoge dosis. Deze situatie vaak resulteert in het vóórkomen van sterke dosis-afhankelijke bijwerkingen die kunnen worden ondraaglijk en kracht van de artsen om te stoppen met de behandeling2. Om deze redenen, de vereniging van antikanker moleculen is nu de voorkeur aan monotherapie.

Ideale drug combinaties zou die in synergie tegen tumorcellen, zonder verhoogde toxiciteit tegen normale cellen handelen. Synergie verwijst naar de interactie van twee of meer drugs die produceert een therapeutisch effect groter is dan de som van elke individuele drug afzonderlijk handelen. Dergelijke interactie kunnen resulteren in betere klinische therapeutische werkzaamheid2. Het beperkt behandeling weerstand verhoogt de werkzaamheid en toxiciteit2kan ook worden verminderd. In feite, kan de dosering van elk medicijn te verlagen hun bijwerkingen door te richten verschillende routes worden verminderd. Bovendien kan een van de moleculen ook dienen als een sensibiliserende agent tegen kankercellen. Het effect van de tweede drug kan worden versterkt op gesensibiliseerde cellen en minder doseringen kunnen gebruikte5.

Gecombineerde therapie kan bevatten twee of meer chemotherapeutische geneesmiddelen en/of biologics, zoals monoclonal antilichamen6. Deze mAbs speciaal te richten op cellen uitspreken van een cel oppervlakte-antigeen van belang en zijn in staat om te doden van tumorcellen via immunologische wegen, met inbegrip van antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde cytotoxiciteit (ADCC), met de betrokkenheid van immuun effector cellen 7, en aanvulling-afhankelijke cytotoxiciteit (CDC)6. Ze kunnen ook handelen via een niet-immunologische mechanisme gemedieerd door apoptosis8,9,10,11. In dit geval kan de inductie van het proces van geprogrammeerde celdood sensibiliseren kankercellen verzwakken van hun functie en de bijbehorende chemotherapeutische drugs doeltreffender te maken in een lagere dosering. Als zodanig, proapoptotic mAb zijn goede kandidaten voor het ontwerpen van combinatie regimes met Antineoplastische drugs.

Verschillende wiskundige modellen zijn beschreven om te beoordelen van de drug synergie; een van hen is gebaseerd op de combinatie index methode1. Deze methode is gebaseerd op het beginsel van de mediaan-effect ontwikkeld door Chou1. De mediaan-effect vergelijking correleert de dosis van de drug en drug effecten als volgt.

figure-introduction-1

Hier, is D de dosis van het geneesmiddel; DM is de mediaan-effect dosis; FA is de breuk die beïnvloed door de dosis; m is de exponent die de vorm van de dosis / effect-perceel1betekent. De dosis van de mediaan-effect wordt gebruikt voor het berekenen van de dosis Dx van een medicament dat remt of "x" procent van cellen doodt. De CI-waarde wordt dan berekend om te beoordelen van het additieve effect van de combinatie van drugs, als volgt1.

figure-introduction-2

CI de waarde 1 geeft aan een additief effect en CI de waarde < 1 geeft aan een synergie-effect, terwijl de waarde van een CI van > 1 geeft aan antagonisme1. De toepassing van deze methode wordt verder bevorderd door de beschikbaarheid van een computerprogramma, CompuSyn, die synergie en antagonisme op alle doses bepaalt of effect-niveaus gesimuleerd automatisch12.

Onze fractie heeft ontwikkeld de mAb 8B6 specifiek voor O-acetyl-GD2 ganglioside (OAcGD2) neuroblastoom antigeen13 en verder aangetoond dat deze mAb staat voor het opwekken van de dood van de cel met kenmerken van apoptosis11is. Om te testen of mAb 8B6 kunnen cellen van het neuroblastoom aan de Antineoplastische agent topotecan sensibiliseren, aangepast we de bovengenoemde methode ontwikkeld door Chou1. Eerst bepalen we de effectieve dosis 50 (ED50) waarden van mAb 8B6 en topotecan. Vervolgens de cellen van het neuroblastoom met equipotent verhoudingen van de twee verbindingen op basis van ED50 waarden zijn blootgesteld aan de CI-waarden met behulp van de bovengenoemde simulatiesoftware bepalen. Met deze methode kunt ons om aan te tonen van de synergie tussen mAb 8B6 en topotecan in vitro. Vervolgens beschrijven we een protocol voor de beoordeling van de werkzaamheid en de veiligheid van deze combinatie regime in vivo. Dit protocol kan gemakkelijk worden toegepast om te selecteren van krachtige en veilige antikanker mAb en chemotherapeutische agent combinaties in preklinische studies. Een schematische weergave van deze studie wordt gegeven in Figuur 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Huisvesting van dieren en experimentele procedure werden goedgekeurd door de Franse regering (overeenkomsten #C44-278 en #APAFIS 03479.01). Verzorging van de dieren en de procedures werden uitgevoerd onder Richtlijn EU 2010/63/EG en Franse wet #2013-118 betreffende de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt.

1. evaluatie van de interactie van de Drug tussen mAb 8B6 en Topotecan In Vitro

  1. bereiding van de monsters van de 96-Wells
    Let op: Raadpleegt de instelling Comité op het gebied van gezondheid en veiligheid en lokale verordening regels aan laboratorium veiligheid gerelateerde. Lees de informatie van het materiaal en veiligheidsinformatieblad voordat u gaat werken met media, cellijnen of reagentia. Gebruik van juiste steriele techniek en werken in een laminaire flow-kap. Alle oplossingen/apparatuur die worden gebruikt voor het manipuleren van de cellen moet steriel zijn.
    Opmerking: Het volgende protocol is ontworpen voor gebruik met aanhangend cellen. Wijzigingen zijn verplicht tot het toepassen van de methode op nonadherent cellen groeien in de opschorting; Dit protocol maakt gebruik van viervoud voor elke experimentele voorwaarde.
    1. IMR5 cellen in een maatkolf van T75 groeien.
    2. Op de eerste dag (dag 0), de cultuur van de cel onder een microscoop om te controleren de cel confluentie te observeren. Het medium van de cel van de kolf gecombineerd, wassen met 5 mL-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en voeg 3 mL 0,05% ethyleendiamminetetra azijnzuuroplossing (NA2EDTA) / PBS oplossing. De kolf terugkomen in de incubator voor 3 min (37 ° C, 5% CO2).
    3. Onderzoeken van de cultuur van de cel onder een Microscoop voor mobiele-detachement.
      Opmerking: Indien nodig, terug de kolf naar de incubator voor een extra 3 tot en met 5 min, afhankelijk van het celtype tumor.
    4. Voeg 10 mL van volledige cel medium aan op de maatkolf en de celsuspensie overbrengen in een steriele 15 mL conische buis. De cellen gedurende 5 minuten bij 300 x gcentrifugeren. Met behulp van een hemocytometer cellen tellen.
    5. Verwijderen en verwijder het supernatant. Resuspendeer de pellet cel in volledige groeimedium. Het gemiddeld volume te verkrijgen van een eindconcentratie van 1 x 105 cellen/mL.
    6. Zaad 84 wells van een 96-Wells cultuur plaat met 104 cellen, oftewel 100 µL celsuspensie. Volg de experimentele lay-out weergegeven in Figuur 2.
    7. Incubeer de cellen gedurende 18 uur in de cel incubator (37 ° C, 5% CO2).
  2. Drug oplossing voorbereiding
    Opmerking: Voor drug/mAb sensibilisatie studies, wijzigt u de timing, de lengte en de behandeling van de concentratie aan de specifieke drug/mAb in kwestie. Let erop dat de beginconcentratie 3 x de uiteindelijke concentratie is.
    1. De volgende ochtend (dag 1), bereiden de volgende drug-oplossingen met behulp van volledige groeimedium.
      1. mAb oplossing voorbereiding
        1. MAb in 500 µL van volledige groeimedium om een werkoplossing antilichaam met een mAb-concentratie van 240 µg/mL verdund.
        2. Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.
      2. Topotecan oplossing voorbereiding
        1. Verdund, als boven, de drug in 500 µL van volledige groeimedium om een werkoplossing drug met een eindconcentratie van 120 nM.
        2. Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.
      3. Antilichaam en drug voorbereiding van de oplossing
        1. Verdun de drug en mAb oplossingen in 500 µL van volledige groeimedium om een oplossing op 120 nM drug en 240 µg/mL mAb (werkende oplossing).
        2. Vijf twee-voudige seriële verdunningen uitvoeren zoals aangegeven in Figuur 2.
    2. Om te komen tot de uiteindelijke concentratie, breng u 50 µL van elke drug-oplossing in de overeenkomstige putten, zoals aangegeven in de experimentele lay-out ( Figuur 2).
      Opmerking: Breng 50 µL van volledige groeimedium in de onbehandelde cel putten, zoals aangegeven in Figuur 2.
    3. Incubeer de cellen gedurende 72 uur in de incubator (37 ° C, 5% CO2).
  3. MTT assay
    1. Voeg 10 µL van MTT reagens oplossing in elk putje.
    2. Incubeer bij 37 ° C gedurende 4 uur.
    3. Voeg 100 µL van lysis van de oplossing (10% SDS in 0,01 M HCl) in elk putje, met behulp van een meerkanaalspipet, en meng door pipetteren.
    4. Incubeer bij 37 ° C gedurende 4 uur in een bevochtigde kamer (95% vochtigheid).
    5. Lees de absorptie bij 570 nm (een570) en 620 nm (een620) met behulp van een spectrofotometer.
      Opmerking: Meng elk monster weer door pipetteren vóór het lezen van de extinctie; absorptie bij 620 nm kunt de correctie van niet-specifieke achtergrondwaarden.
    6. Berekening van de gecorrigeerde extinctie: gecorrigeerd absorptie = een570- een620.
    7. De levensvatbaarheid van de cellen als volgt berekenen: levensvatbaarheid van cellen = 100 x (gemiddelde gecorrigeerde extinctie proeven / controle van de gemiddelde gecorrigeerde extinctie).
    8. De Fractie geteisterde waarden (Fa) met behulp van de volgende vergelijking berekenen: 1 - (monster gemiddelde gecorrigeerde extinctie / controle van de gemiddelde gecorrigeerde extinctie).
  4. Software van de analytische simulatie van de interactie van de drug voor single en drug combinatie studies
    1. Voer de simulatiesoftware om het startvenster te openen.
    2. Klik op de knop Nieuw Experiment om de Main -venster te openen.
    3. Typ de naam van het experiment in het venster naam .
      Opmerking: Een datum kan worden toegevoegd in het venster van de datum .
    4. Klik op de knop Nieuwe Single Drug .
    5. Typ de naam in het venster van de Volledige naam .
    6. Typ de afkorting in het Abbrev -venster.
    7. Typ de drugseenheid van de concentratie in het venster eenheden .
    8. Voer Gegevens punt 1 dosis en VA-waarde, drukt u op Enter.
    9. Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten worden ingevoerd.
    10. Klik op de knop gereed .
    11. Volg dezelfde stappen voor het invoeren van mAb gegevenspunten.
      Opmerking: Gebruik dezelfde concentratie eenheid zoals wordt gebruikt door Drug.
    12. Klik op de knop Nieuwe Drug Combo .
    13. Selecteer Drug en mAb.
    14. Constante verhouding selecteren en klik op OK.
    15. Typ de naam in het venster van de Volledige naam .
    16. Typ de afkorting in het Abbrev -venster.
    17. Typ de drug/mAb-verhouding in de verhouding van venster.
    18. Gegevens punt 1 dosis en op Enterdrukt.
      Opmerking: De automatisch berekend de doses van mAb en Combo.
    19. Voer de Gegevens punt 1 Fa -waarde en druk op Enter.
    20. Herhaal deze stap totdat alle gegevenspunten worden ingevoerd.
    21. Klik op de knop gereed en klik vervolgens op de knop Rapport genereren .
    22. Drugs en mAb selecteren en klik vervolgens op OK.
    23. Selecteer de keuzelijst met invoervak en klik vervolgens op OK.
    24. Selecteer koptekst, CI tabelen samenvattende tabel. Klik vervolgens op OK.
    25. Typ de bestandsnaam van het analysis bestand en klik op Opslaan om het rapport te genereren.
      Opmerking: Na het klikken op OK, het rapport wordt automatisch geopend in van de computer standaardwebbrowser.
    26. Kies afdrukken uit het bestandsmenu van de webbrowser als u wilt afdrukken van het rapport. Het verslag bevat een samenvatting tabel sectie titel, datum, bestandsnaam, beschrijving opmerking, parameters (m, Dm en r), ED50 voor een agent gebruikt in monotherapie of in combinatie, en de CI-tabel voor elke combinatie bij ED50, ED 75, ED90en ED95.
      Opmerking: CI waarde < 1 geeft aan synergie, CI waarde = 1 geeft aan additiviteit en een CI-waarde van > 1 geeft aan antagonisme.

2. productie van menselijke Neuroblastoma Xenografts in Nonobese diabetische knik Scid Gamma muizen (NSG muizen)

Opmerking: Sluit elke besmetting van de cultuur van de cel. Omdat de kelder membraan matrix een gel boven 5 ° C vormt, moeten alle cultureware of media komen in contact met het membraan van de kelder matrix reagens prechilled/ijs-koud. Houden de kelder membraan matrix op ijs tijdens het hele proces.

  1. Voorbereiding van de celsuspensie IMR5
    1. Ontdooi de kelder membraan matrix reagens 's nachts door dompelen de flacon in ijs in een koelkast 4 ° C vóór gebruik.
    2. Op dag 0, oogsten de gekweekte IMR5 cellen zoals beschreven hierboven.
    3. De cellen overbrengen in een conische tube van 15 mL en centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.
    4. Verwijder het supernatant. Wassen van de cellen 2 x met 15 mL ijskoud PBS, en bereid een celsuspensie van 5 x 107 cellen/mL in ijskoude PBS.
      Opmerking: Indien nodig, de celsuspensie kunnen overbrengen naar een 1,5 mL microcentrifuge buis.
    5. Swirl de kelder membraan matrix flacon.
      Opmerking: De kelder membraan matrix reagens moet ontdooid en verspreid.
    6. Voeg een hoeveelheid kelder membraan matrix reagens toe en meng het door pipetteren om te verkrijgen van een celsuspensie van 2.5 x 107 cellen /mL.
    7. Houd de celsuspensie op ijs.
  2. Voorbereiding van de muizen
    Opmerking: De muizen moeten zes tot zeven weken oud.
    1. Muizen onder een specifieke pathogenen vrije voorwaarde te handhaven.
    2. Toestaan dat een drie - tot vijf - daagse acclimatisatie periode na de muizen zijn aangekomen.
    3. Op de dag van inenting, scheren de flank waar de injectie zal worden (zie stap 2.3.6).
  3. Voorbereiding van de tumor cel injectie
    Opmerking: Houd de ijskoude kelder membraan matrix celsuspensie aseptische gedurende de hele procedure.
    1. Meng de cellen en de celsuspensie zorgvuldig te trekken in een 1 mL injectiespuit met een naald 21 G gemonteerd.
    2. Controleren om er zeker van te zijn dat er geen luchtbellen in de spuit.
    3. Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.
    4. Knijp zachtjes de huid van de muis op de flank tussen vingers, op de injectieplaats.
    5. Plaats de naald precies in de plooi van de huid. Plaats de naald niet diep in het weefsel om een subcutane injectie.
    6. Injecteren subcutaan 100 µL celsuspensie (d.w.z., 2.5 x 106 cellen) IMR5 in de lagere rechter flank van de muizen.
    7. Draai de spuit om te voorkomen lekkage en intrekken van de naald.
  4. Bewaking van veranderingen in het lichaamsgewicht en tumorgroei
    1. Meet de lengte (A) en de breedte (B) van de tumor met een remklauw.
    2. Bereken het volume van de tumor met behulp van de formule (A x B2) x 0,5.
    3. Therapie worden gestart wanneer de tumoren hebben een gemiddelde volume van ~ 50-60 mm3bereikt.

3. geneesmiddel en antilichaam administratie in muizen

  1. Intraveneuze toediening van mAb 8B6
    1. Zorgvuldig Vul een 1 mL injectiespuit met een naald 25 G met mAb oplossing gemonteerd.
    2. Plaats de muis onder een warmte lamp voor 10 min de staart ader te verwijden.
    3. Het beperken van de muis in een knaagdier afdekking.
    4. Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.
    5. Plaats de naald evenwijdig aan de staart ader, doordringende 2-4 mm in het lumen terwijl het houden van de schuine kant van het gezicht van naald omhoog (figuur 3A).
    6. Intraveneus injecteren van 100 µL van antilichaam oplossing (i.v.).
    7. Als de injectie is voltooid, druk zachtjes de injectieplaats te voorkomen bloeden.
  2. Intraperitoneale toediening van topotecan
    1. Trekken de drug-oplossing in een 1 mL injectiespuit met een naald 25 G gemonteerd.
    2. Houd de muis in een liggende positie, met haar achterste einde licht verhoogde.
    3. Desinfecteer het gebied van de inoculatie van de muis met een antiseptische oplossing.
    4. Zoek van de muis buik middellijn en mentaal het verdelen van de buik in kwadranten. Zoek de injectieplaats in het linker- of onderste Kwadrant (figuur 3B).
    5. Steek de naald in de buik (5 mm diep) ~ 10° hoek, in de linker- of onderste Kwadrant.
    6. Injecteren van 100 µL van drug oplossing intraperitoneally (i.p.).
    7. Desinfecteer de inoculatie-site.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De representatieve resultaten en cijfers zijn aangepast met toestemming van eerder gepubliceerde werk14.

Anti-OAcGD2 mAb 8B6 verbetert synergetisch de remmende effecten van Topotecan op neuroblastoom celgroei lijn:

Om de drug en de concentraties van het antilichaam moet worden gebruikt voor de beoordeling van de synergie tussen ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Om te voorspellen het effect van de interactie van de drug, drie methoden kunnen worden gebruikt: de isobologram methodologie17, de niet-lineaire mengsel model18en de combinatie index1. Combinatie index analyse is de meest gebruikte omdat de toepassing ervan wordt vereenvoudigd door de beschikbaarheid van een gebruiksvriendelijke computerprogramma. Voor dit doel, we eerst de dosis / effect-reactie van elke agent gebruikt alleen of in combinatie, door...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

S.Fa. zijn, J.F., S.B. aangewezen als uitvinders van in afwachting van de octrooien op de klinische toepassing van anti-O-acetyl-GD2 therapeutische antistoffen.

Dankbetuigingen

Steun: Fondation de Projet de L 'Université de Nantes, les Bagouz' à Manon, La Ligue contre le Cancer comité de Loire-Atlantique, comité du Morbihan en comité de Vendée, une roos pour S.A.R.A.H, L'Etoile de Martin en la Société Française de Lutte contre les Kanker et les leucémies de L'Enfant et de L'adolescent (SFCE). M.B. en J.F. worden ondersteund door La Ligue Contre Le Cancer. De auteurs bedanken de UTE-faciliteit van de structuur Fédérative de Recherche François Bonamy. De auteurs worden Dr. S. Suzin (Inserm, Parijs) voor het verstrekken van de IMR5 cellen en mevrouw H. Estéphan ook bedanken voor haar technische bijstand.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Cell Proliferation kit (MTT)Roche11-465-007-001
CompuSyn softwareComboSynCombosyn kan gratis worden gedownload via http://www.combosyn.com
Elektrisch scheerapparaatBiosebBIO-1556
Foetaal runder serumEurobioCVFSVFF00-0110% verhit en geïnactiveerd foetaal runder serum in RPMI 1640
Firefox Mozilla CorporationFirefox kan gratis worden gedownload via http://www.mozilla.org/en-US/firefox/
WarmtelampVerre&Quartz4003/1R
Menselijke neuroblastoom IMR-5 cellijnAccegen BiotechnologyABC-TC0450IMR-5 is een kloon van de menselijke neuroblastoomcel lijn IMR32 5459762. IMR-5 cellen werden vriendelijk ter beschikking gesteld door Dr. Santos Susin (U.872, Parijs, Frankrijk)
L-glutamineGibco25030-0242 mM in RPMI 1640
Lyse-oplossing Roche 11-465-007-001
mAb 8B6Universiteit van NantesN/A
MatrigelCorning354248
Multiskan FCThermofischer Scientific N08625
Naald 21G 1 ½ BD Microlance304432
Naald 25G 1TerumoNN-2525R
NSG muizenCharles River Laboratories5557
Nunc MicroWell 96-wells microplatesThermofisher167008
PBSVWRL182-10
PBS, 0,05% EDTASigma-AldrichE9884
PC die Windows 7 draaitMicrosoftWindows 7 kan worden gekocht via http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7
Penicilline-StreptomycineGibco15140-122100 eenheden/mL penicilline en 100 mg/mL streptomycine in RPMI 1640
Reagens reservoirThermofischer Scientific8094
Muis beugelBiosebTV-150-SM
RPMI 1640Gibco31870-025
Spuit 1 mLHenke Sass Wolf5010.200V0
TopotecanSigma-AldrichT2705

Referenties

  1. Chou, T. C. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).
  2. Bayat Mokhtari, R., et al. Combination therapy in combating cancer. Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).
  3. Zahreddine, H., Borden, K. L. Mechanisms and insights into drug resistance in cancer. Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).
  4. Martin, T. P., Baguley, D., et al. Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6. Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).
  5. Choi, B., et al. Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27. Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).
  6. Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy. Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).
  7. Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer. Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).
  8. Kowalczyk, A., et al. The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells. Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).
  9. Retter, M. W., et al. Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts. Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).
  10. Nakamura, K., et al. Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody. Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).
  11. Cochonneau, D., et al. Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo. Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).
  12. Chou, T. C., Martin, N. CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).
  13. Alvarez-Rueda, N., et al. A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity. PLoS One. 6 (9), e25220(2011).
  14. Faraj, S., et al. Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside. Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).
  15. Ishikawa, F., et al. Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice. Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).
  16. Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice. Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).
  17. Teicher, B. A. Assays for in vitro and in vivo synergy. Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).
  18. White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example. Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).
  19. Mosmann, T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).
  20. Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix. Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).
  21. Thompson, J., et al. Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts. Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).
  22. Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures. Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).
  23. Tang, X. X., et al. Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma. Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).
  24. Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice. Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).
  25. Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines. International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).
  26. Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).
  27. Cheung, N. K., et al. Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma. Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).
  28. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  29. Dayde, D., et al. Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20. Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).
  30. Racki, W. J., et al. NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection. Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).
  31. Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer. Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

ChemotherapeuticaMTT assayxenograft tumormodelcelviabiliteitsassayseri le verdunningendetectie van synergismeremming van tumorgroeicombinatietherapie met geneesmiddelen
Potentiëring van antikanker antilichaam werkzaamheid door Antineoplastische Drugs: detectie van antilichaam-drug synergie met de combinatie Index vergelijking
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.