We beschrijven de ontwikkeling van een mager PCOS-achtige muismodel met dihydrotestosteron pellet te bestuderen van de pathofysiologie van PCOS en de nakomelingen van deze PCOS-achtige dammen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een muismodel van Hyperandrogenic te bestuderen polycysteus ovarium syndroom
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Hyperandrogenemia speelt een cruciale rol in functie van de reproductieve en metabole bij vrouwtjes en is het waarmerk van polycysteus ovarium syndroom. Het ontwikkelen van een mager PCOS-achtige muismodel dat nabootst van vrouwen met PCOS is klinisch zinvol. In dit protocol beschrijven we een dergelijk model. Door het invoegen van een 4 mm lengte van DHT (dihydrotestosteron) crystal poeder pellet (totale lengte van pellet is 8 mm), en vervangt het maandelijks, zijn wij in staat om te produceren een muismodel van PCOS-achtige met serum DHT niveaus 2 vouw hoger dan muizen niet geïmplanteerd met DHT (neen-DHT). Reproductieve en metabole dysfunctie waargenomen zonder gewicht en lichaamssamenstelling. Terwijl vertoont een hoge mate van onvruchtbaarheid, een kleine ondergroep van deze vrouwelijke muizen van PCOS-achtige kan zwanger en hun nakomelingen laten zien van vertraagde puberteit en toegenomen testosteron als volwassenen. Dit mager muismodel van PCOS-achtige is een nuttig instrument om te studeren de pathofysiologie van PCOS en de nakomelingen van deze PCOS-achtige dammen.
Inleiding
Hyperandrogenism is het waarmerk van polycysteus ovarium syndroom (PCOS) volgens de criteria van de NIH en de overtollige androgeen en PCOS (AE-PCOS) samenleving. Vrouwen met PCOS hebben moeite om zwanger en hebben een verhoogd risico van zwangerschap complicaties1. Zelfs als ze zwanger zijn, hebben hun vrouwelijke nakomelingen een gezondheidsrisico resultaten2,3. Dierlijke modellen zijn ontwikkeld met behulp van verschillende strategieën4,5,6,7,
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Hier presenteren we gedetailleerde protocollen voor DHT pellet voorbereiding en inbrengen, en voor reproductieve en metabole testen. De muizen gebruikt in deze studie werden een gemengde achtergrond (C57/B6, CD1, 129Sv) en werden onderhouden met voedsel en water ad libitum in een 14/10 h licht/donker cyclus bij 24 ° C in de Broadway onderzoek gebouw dier faciliteit aan de Johns Hopkins University School of Geneeskunde. Alle procedures zijn door de Johns Hopkins Universiteit Animal Care en gebruik Comité goedgekeurd.
1. Maak PCOS-achtige muismodel
-
DHT pellet voorbereiding
- Autoclaaf silastic buis....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Serum DHT niveaus en Glucose tolerantie test
DHT niveaus werden gemeten vanaf verzamelde serum door beide ELISA en LC-MS volgens protocol 1,24-1,25, 2.9 en 3.0. De DHT absolute waarden verschillen tussen massaspectrometrie en ELISA, echter de relatieve vouw (rond 2-fold) van DHT vs neen-DHT inbrengen van beide tests vergelijkbaar is en experimenten over15,23,
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Hyperandrogenism is een belangrijk kenmerk van PCOS. Het serum DHT niveaus (twee vouwen hoger in DHT Mouses dan in neen-DHT Mouses) gebruikt in dit protocol lager zijn dan die door andere onderzoekers in eerdere studies gerapporteerd en zijn gekalibreerd om na te bootsen proportioneel vrouwen met PCOS5,19, 20,21. In tegenstelling tot andere modellen verandert dit 2-fold DHT model niets aan het.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door de National Institutes of Health (subsidies R00-HD068130 naar S.W.) en de Baltimore Diabetes Research Center: piloten en haalbaarheid subsidie (S.W.).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Kristal 5α-DHT poeder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Silastic buis | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm binnendiameter x0.085 in/2.15 mm buitendiameter |
| Medisch adhesief siliconen | Factor II, Inc. | A-100 | |
| Bril, laboratoriumjassen, handschoenen en maskers. | |||
| 10 µL pipettenpunten zonder filter | USA Scientific | 11113700 | |
| Microscoopglas voor uitstrijkje | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik voor het kleuren van cellen | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL-spuit | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| bijgevoegde naald: 20 G | BD | 305176 | |
| Liniaal: elke lengte dan 10 cm met millimeter schaal. | |||
| Xylazin | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Ketaminehydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Chirurgische klinknaap | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Insulinespuit | BD | 329461 | 1/2 CC, lage dosis U-100 insulinespuit |
| Trocart | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscoop | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Duitsland |
| Oorpons | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosteron rat/muis ELISA kit | IBL | B79174 | |
| DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | ||
| One touch ultra teststrips | Life Scan, Inc. | ||
| Eppendorf buis | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Vleesmes | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| Chirurgisch onderblad | Fisher Scientific | 50587953 | Fabrikant: Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine Antiseptische Oplossing | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylaat) | 3M Science. Applied to Life |
Referenties
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
