Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Onderdrukking van Multiple Myeloma celgroei In Vivo door Single-muur koolstof nanobuis (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geleverd

5.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58598

⸱

13 december 2018

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Lerner Research Institute, Cleveland Clinic, 2Department of Medical Oncology, Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Dit manuscript beschrijft de synthese van een single-muur koolstof nanobuis (SWCNT)-geconjugeerd MALAT1 antisense gapmer DNA oligonucleotide (SWCNT-anti-MALAT1), waaruit blijkt hoe de betrouwbare levering van de SWCNT en het krachtige therapeutische effect van anti-MALAT1 in vitro en in vivo. Methoden voor synthese, wijziging, conjugatie, en injectie van SWCNT-anti-MALAT1 worden beschreven.

Samenvatting

De single-muur koolstof nanobuis (SWCNT) is een nieuw soort nanoparticle, die is gebruikt voor het leveren van meerdere soorten drugs in cellen, zoals eiwitten, oligonucleotides en synthetische drugs van de kleine-molecuul. De SWCNT heeft van aanpasbare afmetingen, een groot oppervlakkige gebied, en flexibel kunt binden met drugs door verschillende wijzigingen op het oppervlak; Daarom is het een ideaal systeem voor het vervoer van drugs in cellen. Lang noncoding RNAs (lncRNAs) zijn een cluster van noncoding RNA langer dan 200 nt, die niet kan worden vertaald naar eiwit, maar een belangrijke rol spelen in de biologische en pathofysiologische processen. Metastase-geassocieerde Long adenocarcinoom transcript 1 (MALAT1) is een zeer geconserveerde lncRNA. Het bleek dat hogere MALAT1 niveaus zijn gerelateerd aan de slechte prognose van verschillende soorten kanker, met inbegrip van multipel myeloom (MM). We hebben aangetoond dat MALAT1 DNA-reparatie en cel dood in MM regelt; MALAT1 kan dus worden beschouwd als een therapeutisch doel voor MM. De efficiënte levering van de antisense oligo aan remmen/knockdown MALAT1 in vivo is echter nog steeds een probleem. In deze studie, wij wijzigen de SWCNT met PEG-2000 en conjugaat van een anti-MALAT1-oligo ernaar, de levering van dit samengestelde in vitro testen, het intraveneus te injecteren in een gedissemineerde muismodel van MM en observeren een significante remming van MM progressie, waarmee wordt aangegeven dat SWCNT is een ideale levering shuttle voor anti-MALAT1 gapmer DNA.

Inleiding

De SWCNT is een roman nanomateriaal die met ideale verdraagbaarheid en minimale toxiciteit in vitro1 en in vivo2verschillende soorten drugs, zoals proteïnen, kleine molecules en nucleïnezuren, stabiel en efficiënt kan leveren. Een functionalized SWCNT grote biocompatibiliteit en water oplosbaarheid heeft, kan worden gebruikt als een shuttle voor kleinere moleculen en kan ze doordringen in het celmembraan3,4,5.

lncRNAs zijn een cluster van RNA (> 200 nt) dat van het genoom zijn herschreven als mRNA maar kan niet worden omgezet in eiwitten. Een groeiende hoeveelheid bewijs heeft aangetoond dat lncRNAs deelnemen aan de regulering van gen expressie6 en betrokken bij de inleiding en de progressie van de meeste vormen van kanker zijn, met inbegrip van MM7,8,9. MALAT1 is een nucleaire verrijkte noncoding transcript 2 (NEAT2) en een zeer geconserveerde lncRNA10. MALAT1 is in eerste instantie erkend in uitgezaaide niet-kleincellige longkanker kanker (NKCLK)11, maar heeft zijn overexpressie in talrijke tumoren5,12,,13; het is een van de meest uitgesproken lncRNAs en is gecorreleerd met een slechte prognose in MM8,14. Het niveau van de expressie van het MALAT1 is aanzienlijk hoger bij fatale cursus extramedullary MM patiënten vergeleken met die alleen gediagnosticeerd als MM15.

In een eerdere studie, wij hebben bevestigd dat oligos van de anti-MALAT1 krachtig tot DNA-beschadiging en apoptosis in MM16 leiden met behulp van gapmer DNA antisense oligonucleotides gericht op MALAT1 (anti-MALAT1) in MM cellen. Het gapmer-DNA is samengesteld uit antisense DNA en verbonden door 2'-OMe-RNAs, die kon MALAT1 decollete gevraagd door RNase H activiteit eenmaal gebonden17. De efficiëntie van de in vivo levering van antisense oligos beperkt nog steeds haar klinische gebruik.

Als u wilt testen de levering matiemaatschappij effect van SWCNT voor anti-MALAT1 gapmer oligos, de anti-MALAT1-gapmer DNA is geconjugeerd met DSPE-PEG2000-amine SWCNT. De SWCNT-anti-MALAT1 wordt daarna intraveneus geïnjecteerd in een gedissemineerde muismodel van MM; een opvallende remming wordt waargenomen na vier behandelingen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimenten met dieren waren vooraf door de Cleveland Kliniek IACUC (institutionele Animal Care en gebruik Comité).

1. synthese van matiemaatschappij SWCNTs

  1. Meng 1 mg SWCNTs, DSPE-PEG2000-Amine 5 mg en 5 mL van gesteriliseerde nuclease-gratis water in een glazen Scintillatie ampul (20 mL). Schud het goed te ontbinden alle reagentia volledig.
  2. Bewerk de ampul in een water bad ultrasoonapparaat bij een energieniveau van 40 W gedurende 1 uur bij kamertemperatuur ultrasone trillingen ten (RT, 3 x 20 min, veranderen het water elke 20 min Voorkom oververhitting en installeer). Vervolgens het Centrifugeer bij 24.000 x g voor 6 h en verzamelen de bovenstaande oplossing. Deze functionele SWCNT oplossing kan worden achtergelaten bij 4 ° C voor 2 maanden.
  3. Voeg 1 mL oplossing van de SWCNT uit stap 1.2 naar een 100 kDa MWCO centrifugaal filter apparaat, gevolgd door 4 mL gesteriliseerde nuclease-gratis water. Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 4000 x g bij RT om extra DSPE-PEG2000-amine. Herhaal de toevoeging van 4 mL water en het centrifugeren 5 x. Meer dan 0,5 mL van overgebleven SWCNT oplossing zal worden overgelaten in het filter na elke centrifugeren.
  4. Meten van de concentratie van de overgebleven in de filter door middel van een UV/VIS-spectrometer op 808 SWCNT-oplossing nm na de laatste wasbeurt. De eindconcentratie is meestal ongeveer 50 mg/L (berekend volgens de methode ontwikkeld door Kam et al.18).
    Opmerking: Ervoor zorgen dat DSPE-PEG-matiemaatschappij SWCNTs in water oplosbare na stap 1.4 en stabiel zijn in verschillende biologische oplossingen zonder zichtbare aggregatie na een paar weken zijn.

2. vervoeging van Anti-MALAT1 Gapmer DNA geflankeerd door 2'-O gemodificeerde RNAs te matiemaatschappij SWCNT

  1. Voeg toe 0,5 mg Sulfo-LC-SPDP in 450 µL van DSPE-PEG2000-amine matiemaatschappij SWCNT. Voeg 50 µL van 10 x PBS en vervolgens Incubeer gedurende 2 uur op RT.
  2. Toevoegen om te verwijderen extra Sulfo-LC-SPDP, de reactie van stap 2.1 naar een 100 kDa MWCO centrifugaal filter apparaat, gevolgd door 4 mL nuclease-gratis water. Centrifugeer gedurende 10 minuten bij 4000 x g bij RT. Repeat de toevoeging van 4 mL water en het centrifugeren 5 x.
  3. Voeg 200 nM thiol gemodificeerde anti-MALAT1-Cy3 gapmer DNA in commerciële DTT oplossing 1,5 mL en incubeer gedurende 90 min op RT. zuiveren het product met een NAP-5 kolom, volgens protocol van de fabrikant. Elueer de anti-MALAT1-Cy3 met 500 µL van gesteriliseerde nuclease-gratis 1 x PBS.
    Opmerking: De functionalized SWCNT kan met toegevoegd DTT, die disulfide bindingen gevormd tijdens de opslag van de thiolated anti-MALAT1 gapmer DNA klieven misschien worden opgeslagen. De toegevoegde DTT kan worden verwijderd door aNAP-5 kolom voordat conjugatie met SWCNT.
  4. Verzamel de sulfo-LC-SPDP-behandeld DSPE-PEG2000-amine SWCNT oplossing links in het filter en Verdun het met 500 µL van anti-MALAT1-Cy3 oplossing. Vervolgens, Incubeer het bij 4 ° C gedurende 24 uur. Het geconjugeerd SWCNT-anti-MALAT1 kan worden achtergelaten bij 4 ° C gedurende 3 weken. Na dezelfde procedure kan de geconjugeerd SWCNT met scramble antisense oligo worden gesynthetiseerd en gebruikt als SWCNT-besturingselement.

3. staart veneuze injectie van SWCNT-Anti-MALAT1

  1. Genereer een gedissemineerde muismodel van MM.
    1. De beste resultaten van de vergelijking, willekeurig 14 knik te regelen. CB17-Prkdcscid/J muizen (8 weken oud) in proces of controle groepen (zeven in elke groep) met dezelfde man/vrouw verhouding.
    2. Reinigen van de Bank van de operatie en het steriliseren met 70% alcohol.
    3. Gebruik een verwarming lamp om te warmen de muis om te helpen de staart ader te verschijnen. Beperken de muis goed met een staart injectie afdekking.
    4. Injecteren van 5 x 106 MM.1S-Luc-mCherry cellen in 50 µL van PBS via de ader van de staart zonder verdoving. Druk op de injectieplaats met een alcohol doekje voor 30 s. Mark de ingespoten muis en terug te sturen naar een schone kooi.
  2. De behandeling start op dag 7 na de injectie van de cel MM.1S.
    1. Injecteren 50 µL van PBS met SWCNT-anti-MALAT1 in de ader van de staart van de muis. Gebruik PBS die SWCNT-besturingselement als een besturingselement bevat.
    2. Druk op de injectieplaats met een alcohol doekje voor 30 s.
    3. Observeren het lokale bloeden op de staart en de algemene werking van de muis voor 1 min en vervolgens terug te sturen naar een schone kooi. Observeer alle ingespoten muizen weer voordat hij terugkeerde van de kooi op het rek, om ervoor te zorgen dat de injecties goed worden getolereerd.
  3. Herhaal de injectie elke 7 dagen tot de beëindiging van het experiment.
    1. Het experiment beëindigen wanneer de algemene gezondheid van de muis degradeert: wanneer niet eten of drinken, het uiterlijk van bleke poten, een onderhuidse bloedingen, een kortademigheid, verminderde activiteit, een verlamming van de onderste ledematen, en/of een tastbaar massa in de buik wordt waargenomen.

4. beoordeling van de progressie van de ziekte

  1. Beoordelen van de algemene status van de muizen elke dag na de injectie van de cel MM.1S-Luc-mCherry. Bijzondere aandacht als de muizen ontwikkelen verlamt van de onderste ledematen.
  2. Evalueren van de tumorgroei met behulp van een in vivo imaging systeem 1 x per week, vóór de SWCNT-anti-MALAT1-injectie.
    1. Het bereiden van vers 15 mg/mL D-luciferine met 1 x PBS.
    2. Anesthetize van de muizen met een vaporizer Isofluraan (3 – 5% voor inductie en 1-3% voor onderhoud, afhankelijk van de status van de muizen).
    3. Injecteren van 150 mg/kg D-luciferine in elke muis intraperitoneally, 5 min vóór imaging; dan, het imago van de muizen in een liggend met een spectrum imaging systeem.
    4. Verzamelen van opeenvolgende beelden van de muizen iedere 2 minuten, totdat luminescentie verzadiging is bereikt. Aanpassen van de intervaltijd volgens de D-luciferine opname/signaal.
  3. CO2 gebruiken om de muizen te offeren zodra de beëindiging van het experiment is bereikt.
  4. Aangezien dit een gedissemineerde model van MM, proces als volgt de muizen.
    1. Weeg de muis voordat dissectie.
    2. Het verzamelen van perifere bloed vanuit het hart voor een complete blood count (CBC)-test uitgevoerd door een bloedcel teller machine. De graven van witte bloedcellen en rode bloedcellen, alsmede de verhouding van lymfocyten, zijn de primaire indexen.
    3. Isoleren van de milt en het wegen. Berekenen van de verhouding van de milt/lichaamsgewicht; overwegen > 0,5% als uitbreiding van de milt.
    4. De weefsels van de nier, beenmerg, milt, lymfeklieren en het weefsel met zichtbare metastase verzamelen.
    5. Verzamel de wervelkolom als de muis ontwikkeld een verlamming van de onderste ledematen.
    6. Pak RNA en eiwit uit de monsters van het beenmerg.
    7. Corrigeer alle resterende weefsels in formaline.
    8. Dompel de bot monsters in 0,25 M EDTA-oplossing (pH 8.0) voor 5 dagen na 24 h van fixatie voor ontkalking.
    9. Alle monsters in 75% alcohol voor langetermijnopslag onderdompelen.
  5. Vergelijk de sterkte van het signaal van luciferase op de dezelfde tijd punten in twee groepen. Beide groepen, vastleggen van de data van de opoffering van elke muis en berekenen van de curven van de overleving van de twee groepen met software.
    Opmerking: Alle procedures worden samengevat in Figuur 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Om aan te tonen het effect van remming van anti-MALAT1 gapmer DNA in MM, we neergeslagen op de uitdrukking van MALAT1 en gebruikte het in H929 en MM.1S cellen. Achtenveertig uur later cellen werden verzameld voor de analyse van de efficiëntie van de knock-down en de status van apoptosis in cellen transfected met anti-MALAT1 gapmer of besturingselement DNA. qRT-PCR resultaten toonden dat anti-MALAT1 gapmer DNA de expressie van de MALAT1 in H929 en MM.1S cellen efficiënt neergeslagen

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Bewijs heeft aangetoond dat lncRNAs deelnemen aan de regeling van verschillende fysiologische en pathofysiologische procedures in kanker, met inbegrip van MM7,8,9; ze hebben het potentieel om voor de behandeling van kanker, die kan worden gerealiseerd door antisense oligonucleotides20,21,22worden gericht. De Amerikaanse Food and Drug Ad...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs bedanken de Lerner Research Institute proteomic, genomic, en imaging kernen voor hun hulp en steun. Financiering: Dit werk werd financieel ondersteund door de NIH/NCI subsidie R00 CA172292 (J.J.Z.) en start-up middelen (J.J.Z.) en de klinisch en translationeel wetenschap Collaborative (CTSC) van de Case Western Reserve University Core gebruik Pilot subsidie (J.J.Z.). Dit werk gebruikt de Leica SP8 confocal microscoop die is gekocht met financiële steun van de nationale instituten van gezondheid SIG verlenen 1S10OD019972-01.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
SWCNTsMillipore-Sigma704113
DSPE-PEG2000-AmineAvanti Polar Lipids880128
bath sonicatorVWR97043-992
4 mL centrifugal filterMillipore-SigmaZ740208-8EA
UV/VIS spectrometerThermo Fisher ScientificaccuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometerextinctiecoëfficiënt van 0,0465 L/mg/cm bij 808 nm
Sulfo-LC-SPDPProteoChemc1118
DTT solutionMillipore-Sigma43815
NAP-5 columnGE Healthcare17-0853-01
in vivo imaging systeemPerkinElmer
NOD.CB17-Prkdcscid/J muizenCharles River lab250
Flow cytometerBecton Dickinso
LipofectamineInvitrogen11668019Lipofectamine2000
Fetaal bovien serum (FBS)Invitrogen10437-028
RMPI-1640 mediumInvitrogen11875-093
MALAT1-QF:gesynthetiseerd door IDT Company5’- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3’
MALAT1-QR:gesynthetiseerd door IDT Company5’- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3’
GAPDH-QF:gesynthetiseerd door IDT Company5’- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3’
GAPDH-QR:gesynthetiseerd door IDT Company5’- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3’
Kwantitatieve PCR met behulp van SYBR Green PCR master mixThermo Fisher ScientificA25780
RevertAid first-stand cDNA-synthesekitThermo Fisher ScientificK1621
anti-MALAT1gesynthetiseerd door IDT Company5’-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T
*G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3’
Cell Viability Assay KitPromega CorporationG7570CellTiter-GloLuminescent Cell Viability Assay Kit
accuSkan GO UV/Vis Microplate SpectrophotometerThermo Fisher Scientific
centrifugaal filterMillipore-SigmaUFC910008
SPSS-softwareIBMversie 24.0
D-LuciferineMillipore-SigmaL9504

Referenties

  1. Jiang, X., et al. RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis. Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).
  2. Murakami, T., et al. Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy. Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).
  3. Kam, N. W., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality. Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).
  4. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing. Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).
  5. Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway. Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).
  6. Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies. Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).
  7. Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer. Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).
  8. Ronchetti, D., et al. Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma. Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).
  9. Wong, K. Y., et al. Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma. Molecular Cancer. 14, 175(2015).
  10. Schmidt, L. H., et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth. Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).
  11. Ji, P., et al. MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer. Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).
  12. Luo, J. H., et al. Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas. Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).
  13. Guffanti, A., et al. A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing. BMC Genomics. 10, 163(2009).
  14. Cho, S. F., et al. MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression. BMC Cancer. 14, 809(2014).
  15. Handa, H., et al. Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma. British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).
  16. Hu, Y., et al. Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma. Leukemia. , (2018).
  17. Lennox, K. A., Behlke, M. A. Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides. Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).
  18. Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).
  19. Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells. Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).
  20. Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).
  21. Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma. Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).
  22. Amodio, N., et al. Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity. Leukemia. , (2018).
  23. Highleyman, L. FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration. BETA. 5, (1998).
  24. Smith, R. J., Hiatt, W. R. Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder. JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).
  25. Aartsma-Rus, A. FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides. Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).
  26. Nelson, S. F., Miceli, M. C. FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy. The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).
  27. Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery. American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).
  28. Ali-Boucetta, H., et al. Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics. Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).
  29. Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes. Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).
  30. Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods. International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).
  31. Padilla-Parra, S., et al. Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).
  32. Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery. Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).
  33. Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages. Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).
  34. Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA. Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).
  35. Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).
  36. Lelimousin, M., Sansom, M. S. Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization. Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).
  37. Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers. J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).
  38. Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells. Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).
  39. Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles. American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).
  40. Ruggiero, A., et al. Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

MALAT1 antisense oligooligonucleotideaftochtintraveneuze injectiemuismodelbeenmergqRT PCRapoptose inductienanodeeltjes geneesmiddelenafgifte
Onderdrukking van Multiple Myeloma celgroei In Vivo door Single-muur koolstof nanobuis (SWCNT)-MALAT1 Antisense Oligos geleverd
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.