De aanvulling component C1q is een pro-inflammatoire molecuul sterk uitgedrukt in het weefsel microomgeving die kunnen interageren met de extracellulaire matrix. Hier beschrijven we een methode om te testen hoe C1q gebonden aan hyaluronzuur effecten cel adhesie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Evaluatie van de wisselwerking tussen het complement eiwit C1q en hyaluronzuur bij het bevorderen van de hechting van cellen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het is meer en meer aangetoond dat de tumor microenvironment een actieve rol speelt in neoplasie groei en metastase. Door verschillende wegen, kunnen de tumorcellen stromale, immune en endothelial cellen efficiënt aanwerven door stimulerend factoren, chemokines en cytokines af te scheiden. Op zijn beurt kunnen deze cellen veranderen de signalering eigenschappen van de micromilieu door het vrijgeven van groei-bevorderende signalen, metabolieten en extracellulaire matrix componenten om hoge proliferatie en gemetastaseerde competentie te ondersteunen. In deze context, identificeren we dat de aanvulling component C1q, sterk uitgedrukt lokaal door een reeks van menselijke kwaadaardige tumoren, op de interactie met de extracellulaire matrix hyaluronzuur, sterk van invloed op het gedrag van primaire cellen geïsoleerd van de menselijke tumor Specimens. Hier beschrijven we een methode om te testen hoe C1q gebonden aan hyaluronzuur (HA) effecten tumor cel adhesie, ten grondslag liggen aan het feit dat de biologische eigenschappen van de belangrijkste componenten van de extracellulaire matrix (in dit geval HA) kan worden gevormd door bioactieve signalen in de richting van tumor Progressie.
Inleiding
De tumor microenvironment (TME) beïnvloedt de ontwikkeling van kanker en progressie, omdat het kan een tolerante niche voor cel overleving, groei en invasie te bieden. De identificatie van nieuwe belangrijke spelers in TME kan nuttig zijn voor de ontdekking van nieuwe moleculaire hulpmiddelen voor doel therapie. TME omvat een complex en dynamisch netwerk van niet-kwaadaardige cellen, zoals endothelial cellen, fibroblasten en cellen van het immuunsysteem, ingebed in de omliggende extracellulaire matrix (ECM) componenten, waaronder collageen, laminins, fibronectins, proteoglycanen en hyaluronans. Zowel de tumor en niet-tumorcellen synthetiseren en scheiden ECM component....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De weefselsteekproeven van patiënten werden verzameld na geïnformeerde toestemming na goedkeuring van de ethische overwegingen door de institutionele Raad van het universitaire ziekenhuis van Triëst, Italië.
1. tumor cel isolatie en cultuur (dag 1)
- Isoleer menselijke mesothelioom cellen van MPM Solid specimens. Fijn gehakt het weefsel met een cutter om fragmenten van ongeveer 2-3 mm2 in omvang te verkrijgen en in te broeden in 5 ml van de spijsvertering oplossing samengesteld uit Hanks ' evenwichtige zoutoplossing (Peeters) aangevuld met 0,5 mm ca2 +/Mg2 +, 0,5% trypsine en 50 µ g/ml DNase I, overn....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
HA is een negatief geladen High-Molecular-gewicht polysaccharide, die bestaat uit het herhalen van (β, 1-4)-D-glucuronzuur zuur-(β, 1-3)-N-acetyl-D-glucosamine disacharide eenheden (Figuur 1b)7. Het voorkomen van de binding van HA op de 96-well plaat, alsmede de efficiëntie van de immobilisatie werden getest te profiteren van biotinylated HA (bio-HA). Verschillende concentraties van bio-HA, variërend van 10 µ g/mL tot 1 mg/mL, werden o.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
We beschrijven een eenvoudige methode om te onderzoeken hoe de aanvulling component C1q, interactie met hyaluronzuur, in staat is om het gedrag van de primaire cellen geïsoleerd van menselijke tumor weefsels moduleren. Zowel HA als C1q zijn overvloedig aanwezig in het weefsel micromilieu, zowel onder fysiologische en pathologische omstandigheden, die deelnemen aan verschillende cellen biologische processen. Bijvoorbeeld, C1q is aangetoond aanwezig te zijn in de microomgeving van de placenta waar het gunsten extravillous .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat het onderzoek werd uitgevoerd bij het ontbreken van een commerciële of financiële verhoudingen die kunnen worden opgevat als een potentieel conflict van belang.
Dankbetuigingen
Wij danken Ivan Donati voor het verstrekken van HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (afdeling gynaecologie van IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italië) en Andrea Romano (operatieve klinische eenheid van anatomie en pathologische histologie, Cattinara ziekenhuis, Trieste, Italië ) voor de weefselsteekproef inzameling. Wij danken ook Nicolò Morosini voor de hulp in de video voorbereiding en Alex Coppola, de stem. Dit werk werd ondersteund door subsidies van het Instituut voor gezondheid van moeder en kind, IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italië (RC20/16) en Fondazione Cassa di Risparmio trieste aan R. bulla.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
| Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
| Flask for cell culture | Corning | 430639 | Steriel, geventileerd |
| Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Aangevuld met EDTA, Glucose, penicilline-streptamicine, gentamicine en fungizone |
| High molecular weight hyaluronic acid | Vriendelijk cadeau van Prof. Ivan Donati | ||
| Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Aangevuld met EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), en 1% penicilline-streptomycine (Sigma-Aldrich) |
| Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
Referenties
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
