Het protocol illustreert het gebruik van histopathologische onderzoek en immunohistochemistry aan profiel de folaat receptor bèta macrophage en de relatie met de totale immuun cel in de temporele slagader biopsieën in gigantische cel arteritis infiltreren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een studie van de Immunohistopathologic profileert de folaat Receptor Beta Macrophage en vasculaire immuun communicatie in gigantische cel Arteritis
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Reuze cel arteritis (GCA) is een chronische immuun-gemedieerde ziekte van middelgrote tot grote formaat slagaders die oudere volwassenen treft. GCA manifesten met artritis en occlusieve symptomen van hoofdpijn, beroerte of visie van verlies. Macrofagen en lymfocyten van T-helper infiltreren de vasculaire muur en produceren van een pro-inflammatoire respons die leiden tot beschadiging van het schip en ischemie. Tot op heden is er geen GCA biomerker dat ziekte activiteit en gids therapeutische respons kan controleren.
Folaat receptor bèta (FRB) is een glycosylphosphatidylinositol eiwit dat is verankerd op celmembranen en normaal gesproken uitgedrukt in de bloedlijn MyeloMonocytaire en in de meeste myeloïde leukemie cellen zo goed zoals in de tumor en reumatoïde synoviale macrofagen, waar haar expressie correleert met de ernst van de ziekte. Het vermogen van FRB binden folaat verbindingen, foliumzuur-geconjugeerde en antifolate drugs heeft gemaakt een druggable doel in kanker en ontstekingsziekte onderzoek. Dit verslag beschrijft de methoden van het histopathologische en immunohistochemische gebruikt om te evalueren van de expressie en de verspreiding van FRB ten opzichte van GCAimmunopathology.
Formaline-vaste en paraffine-ingebedde temporele slagader Biopten van GCA en normale besturingselementen werden gekleurd met haematoxyline en eosine te herzien Weefsel histologie en Pathognomonisch omgaan. Immunohistochemistry werd gebruikt voor het detecteren van FRB CD68 en CD3 expressie. Een microscopische analyse werd uitgevoerd om te kwantificeren van het aantal positief gekleurde cellen op 10 geselecteerde hoog-power-veldsecties en hun respectieve plaatsen in de arteriële muur.
Lymphohistiocytic (LH) ontsteking gepaard met intima hyperplasie en verstoorde elastische lamina werd gezien in de GCA met geen gevonden in besturingselementen. De LH infiltreren bestond uit ongeveer 60% lymfocyten en 40% macrofagen. FRB expressie was beperkt tot macrofagen, bestaande uit 31% van de totale CD68 + macrofaag bevolking en gelokaliseerd aan de media en de adventitia. Geen FRB werd gezien in besturingselementen.
Dit protocol blijk gegeven van een afzonderlijke numerieke en ruimtelijke patroon van de macrofaag FRB ten opzichte van de vasculaire immuun communicatie in GCA.
Inleiding
Reuze cel arteritis (GCA) is een ontstekingsziekte van middelgrote tot grote slagaders, gericht op de aorta en haar bijkantoren en beïnvloeden van oudere volwassenen. Het presenteert met een milde tot ernstige ischemische complicaties, zoals hoofdpijn, kaak pijn, verlies van de visie, beroerte en weefsel gangreen. De diagnose wordt bevestigd door hoge inflammatoire merkers zoals bezinkingssnelheid (ESR) en een aparte histopathologische patroon op de temporele slagader biopsie (tabblad)1. GCA is de meest voorkomende volwassen vasculitis, en de toegankelijkheid van de temporele slagader verkregen voor diagnose presenteert een voordeel ten opzicht....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle methoden die worden beschreven zijn door de Penn State institutionele Review Board goedgekeurd.
1. histopathologisch voorbereiding en verwerking na het verkrijgen van de temporele slagader biopsie
Opmerking: De temporele slagader biopsie (TAB) wordt uitgevoerd onder plaatselijke verdoving en steriele omstandigheden door een gecertificeerde chirurg. Na het chirurgisch verkrijgen een arteriële sectie van 3 cm aan de meer aangedane zijde, het model is vastgesteld in formaline onmiddellijk gedurende 24 uur, verdeeld in 3 tot 4 mm secties, en ingebed in paraffine, zorgvuldig aandacht te besteden aa....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Histopathologische bevindingen
De H & E vlekken in normale exemplaren aangetoonde normale arteriële anatomie met endotheliale cellen in de tunica intima, zachte spiercellen in de tunica media, en een heterogeen collageen-matrix die fibroblasten en feeder vaartuigen omvatten genoemd Wasa vasorum in de tunica adventitia. Er is geen inflammatoire infiltreren geïdentificeerd. GCA positieve temporele slagaders aanget.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
GCA is de meest voorkomende vasculitis bij volwassenen, en haar pathologische hallmark is een voorbeeld van een krachtige combinatie van T-helper-lymfocyten en macrofagen die kunnen ook worden gevonden in andere granulomateuze ziekten of vasculopathies zoals sarcoïdose geactiveerd en Granulomatous polyangiitis2,3. GCA, de temporele slagader biedt een goede vertegenwoordiging van een middelgrote tot grote formaat slagader en de TA biopsie geeft een omvangrijke ste.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd mogelijk gemaakt door de steun van Dr. Douglas Stairs, Marianne Klinger, Ann Benko, de divisie voor Reumatologie/Vakgroep Geneeskunde en moleculaire en histopathologische Core laboratorium, Penn State University College of Medicine, Hershey PA.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Microtoom | Reichert-Jung | ||
| Gladde en mat microscoopglaasjes en dekglasjes | Fisher Scientific | ||
| Verticaal rek | Fisher Scientific | ||
| Lichtmicroscoop | Olympus BX60 microscoop | ||
| XYleen | |||
| Aceton in gedestilleerd water | concentraties 100%, 90%, 70% | ||
| Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS) | Dako Wash BufferS3006 | ||
| 3% waterstofperoxide in TBS | |||
| Diaminobenzidine (DAB) | Sigma Fast Tablet set | ||
| Chemisch Permount montagemedium | Fisher Scientific | SP-15-100 | |
| Harleco Gill's III Hematoxylinen | Fiisher Scientific 23-750-019 | ||
| Harleco Eosin Y 1% Alcoholische Stockoplossing | Fisher Scientific | 23-749-977 | |
| 10 mM citroenzuurmonohydraat (pH 6,0) | |||
| Polyklonaal konijn anti-folaatreceptor bèta | Manohar Ratnam | geoptimaliseerd op 1:800 | |
| Monoklonaal muis anti-menselijk CD68 | Dako | M071801 | geoptimaliseerd op 1:200 |
| Polyklonaal konijn anti-CD3 | Agilent Dako | A0452 | geoptimaliseerd op 1:100 |
| Polymeer geit anti- konijn/muis secundair antilichaam | Dako | ||
| Placentaweefsel | voor FRB positieve controle |
Referenties
- Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. Primer on the rheumatic diseases. , Springer Science & Business Media. (2008).
- Weyand, C. M., Goronzy, J. J. Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis. Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).
- Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
