Sperma collectie van differentiële kwaliteit met behulp van dichtheid kleurovergang centrifugeren

Summary

In deze paper willen we de prestaties van de dichtheid kleurovergang centrifugeren techniek en de toepassing ervan in sperma fysiologie onderzoek beschrijven.

Abstract

In de geslachtelijke voortplanting, een mannelijke gameet of spermacel combineert met een vrouwelijke gameet te bewerkstelligen van bevruchting. Echter, zijn een groot aantal zaadcellen met het bevruchten van vermogen vereist voor interactie met een vrouwelijke gameet om bevruchting. Als zodanig, is het waardegevende bestanddelen vermogen van individuele zaadcellen essentieel voor succesvolle voortplanting. Dichtheid kleurovergang centrifugeren is gebruikt voor enkele tientallen jaren als een reproduceerbaar, snelle, doeltreffende, doelmatige en uiterst flexibele methode voor het verzamelen van alleen hoge kwaliteit sperma in gesubsidieerde reproductieve technologie moet worden gebruikt. De protocollen die we hier beschreven focus op het gebruik van de discontinue Percoll dichtheid kleurovergang centrifugeren (PDGC)-techniek om te isoleren van drie afzonderlijke populaties van Haan sperma door hun kwaliteit. We konden verzamelen van lage-, Midden- en hoge kwaliteit sperma. Ook beschrijven we reproduceerbare protocollen die bepalende potentieel van de vruchtbaarheid van het sperma door de beoordeling van de levensvatbaarheid, de mobiliteit en de werkkleding met zich meebrengen. Verzameling sperma door hun kwaliteit met behulp van PDGC techniek zou zinvol zijn om nauwkeurig en grondig typeren sperma met differentiële vruchtbaarheid potentiële.

Introduction

In gewervelde dieren ondergaan de mannelijke gameten selectieve druk; Daarom is reproductieve fitness van een man cruciaal voor het bereiken van de succesvolle bevruchting. Mannetjes van een bepaalde gewervelde dieren moeten zitten kundig voor produceren van zaadcellen in grote hoeveelheden en van voldoende kwaliteit om te voldoen aan de behoeften van bevruchting. Zaadcellen, met zowel een sperma-hoofd en een flagellum, zijn de meest gepolariseerde cellen in het lichaam. Ze zijn ook zeer heterogene in kwaliteit van sperma (levende en dode morfologisch normale en abnormale en immobiel, lage mobiele en hoge mobiele), die is geopenbaard wordt door de grote variatie in re....

Protocol

Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van de Universiteit van Georgia.

1. wassen met behulp van traditionele centrifugeren

1. Bereiden fosfaatbuffer (PBS). Toevoegen van 8,0 g NaCl, KCl, 1,44 g nb₂HPO₄ en 0,24 g van KH₂PO₄ tot 800 mL gedestilleerd water (dH₂van O) 0.2 g. Breng de pH op 7.4 met behulp van 0,1 N HCl en breng de oplossing aan 1 L met behulp van dH₂O.
2. Motility buffer voor te bereiden. Voeg 6,5 g NaCl, 4.5 g van glucose, 0.444 g CaCl₂ en 11,5 g N - tris-[hy....

Results

De techniek van de PDGC resulteerde in de duidelijke scheiding van de drie lagen van sperma door mate van kwaliteit over alle parameters. Sperma worden gescheiden in een kwalitatief hoogwaardige laag onder de hogere dichtheid oplossing, een midden-kwaliteit laag tussen de hogere en lagere dichtheid oplossing en een lage kwaliteit laag boven de lagere dichtheid oplossing. Deze verschillen in kwaliteit zijn blijkt door duidelijke verschillen in levensvatbaarheid (Figuur.......

Discussion

Vruchtbaarheid niet alleen bepaalt de rentabiliteit van de dierlijke productie, maar fungeert ook als een middel van natuurlijke selectie van soorten voor bestaan. De uiteindelijke functie van een zaadcel is een eicel te bevruchten. Het oviduct van een vrouwelijke selecteert alleen deze sterkste zaadcellen met het oog op de bevruchting van de eicel^23,24. In vitro studies is gebleken ook een nauw verband tussen kwalitatieve sperma karaktertrekken en bevru.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accudenz	Accurate Chemical and Scientific Corporation, Westbury, NY, USA	AN7050
Percoll	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	P7828
Schiff’s reagent	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	3952016
TES	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	T1375
Eosin Y	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	E4009
Nigrosin	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, USA	198285
ST 40R Centrifuge	Thermo Scientific, Waltham, MA, USA	75004524
DU 530 Life Sciences UV/Vis Spectrophotometer	Beckman Coulter, Brea, CA, USA		No catalogue is found
Olympus IX 71 Inverted Fluorescence and Phase Contrast Microscope	Olympus America Inc., PA, USA		No catalogue is found