Het protocol van het goedkope bestaande uit voetafdruk analyse en opknoping vak test nadat terughoudendheid stress handig is voor het evalueren van de bewegingsstoornissen van muismodel.
Methodenartikel
Het protocol van het goedkope bestaande uit voetafdruk analyse en opknoping vak test nadat terughoudendheid stress handig is voor het evalueren van de bewegingsstoornissen van muismodel.
Gait verstoring wordt vaak waargenomen bij patiënten met bewegingsstoornissen. In muismodellen gebruikt voor bewegingsstoornissen, is ganganalyse belangrijke gedrags test om te bepalen of de muizen de symptomen van patiënten bootsen. Motor tekorten worden vaak veroorzaakt door stress, wanneer geen spontane motor fenotype wordt waargenomen in de Muismodellen. Daarom zou ganganalyse gevolgd door stress laden van een gevoelige methode voor het uitrekenen van de motor fenotype in muismodellen. Onderzoekers staan echter de eis van een duur apparaat op automatisch verkrijgen van kwantitatieve resultaten van ganganalyse. Voor stress is stress, zonder dure toestellen voor elektrische schok en gedwongen uitgevoerd door eenvoudige methoden laden wenselijk. Daarom introduceren wij een eenvoudige en goedkope protocol bestaande uit de analyse van de voetafdruk met papier en inkt, opknoping vak testen om te evalueren van de motor functie, en stress laden gedefinieerd door terughoudendheid met een conische buis. De motor tekorten van muizen werden met succes ontdekt door dit protocol.
Bewegingsstoornissen zijn verstoringen van het zenuwstelsel tonen een overmaat of schaarste van vrijwillige of automatische bewegingen1verstaan. In het bijzonder wordt gait verstoring vaak gedocumenteerd bij patiënten met verkeer stoornissen,2,,3,4. Daarom, ganganalyse is een geschikt gedrags test voor de validatie van diermodellen van bewegingsstoornissen. Bij muizen, zijn geautomatiseerde gait analyses om te wandelen op natuurlijke snelheid5 en instelbare snelheden uitgevoerd door loopband6,7. Deze analyses bieden kwantitatieve resultaten van gait automatisch. Een alternatieve methode om te detecteren gait verstoring is voetafdruk analyse genoemd. Na het labelen van de onderkant van de voeten met inkt, muizen lopen op papier, en de voetafdrukken zijn geanalyseerd. Aanvankelijk, Vaseline en poedervorm houtskool werden gebruikt voor het visualiseren van de voetafdruk8, en vervolgens werden vervangen door inkt op polygraaf papier9 en fotografische ontwikkelaar op fotografisch papier10. Een goedkoper en minder giftig methode met behulp van inkt en papier dan de andere methoden blijft tot op heden11. Analyse van de voetafdruk is minder duur in vergelijking met geautomatiseerde analyse5,6,7 en zou nuttig zijn te evalueren van de bewegingsstoornissen in Muismodellen voor de onderzoekers zonder overvloedige onderzoeksgelden .
De opknoping vak test is een soort van vier ledematen opknoping tests met behulp van de draad kooi deksel12 en wire mesh scherm13. De box is een apparaat met draaibare mesh deksel aan de bovenkant van vak langs een centrum bar. Naast ganganalyse, de test kan worden goedkoop en eenvoudig uitgevoerd. Dus voerden we de opknoping vak test om te evalueren van de grijpkracht en evenwicht, bovendien de voetafdruk analyse in dit protocol.
Stress induceert de symptomen van verkeer stoornissen14,15. Motor tekorten worden vaak veroorzaakt door verschillende chronische benadrukt zelfs wanneer geen spontane motor fenotype wordt waargenomen in de Muismodellen van een beweging stoornis16,17,18. Terughoudendheid is een van de meest gebruikte methoden voor stress laden in muizen, want het dier niet fysiek schaadden19 is en kosten minder met andere methoden, zoals elektrische schok met speciale apparatuur vergeleken is en gedwongen uitgevoerd met gebruik van een loopband. Terughoudendheid door een buis, die wordt uitgevoerd door een muis in een conische gaten 50 mL-buis te beperken, is gemakkelijker dan andere methoden zoals wire mesh zeef en getapete ledemaat inwikkeling van dier met gaas (herziene20). In deze paper, vatten wij de protocollen van de voetafdruk analyse en het vak opknoping testen na terughoudendheid door een buis. Dit protocol zou ons helpen te gebruiken Muismodellen van bewegingsstoornissen zonder spontane motor fenotype.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle dierproeven werden uitgevoerd op een menselijke manier. De institutionele dier Experiment Comité van Jichi medische universiteit heeft de studie goedgekeurd. De studie werd uitgevoerd overeenkomstig de institutionele verordening voor dier Experiment en fundamentele richtsnoer voor juiste voeren van dier Experiment en aanverwanteactiviteiten in academische onderzoeksinstellingen onder de jurisdictie van de MEXT van Japan. Muizen in dit protocol gebruikt geweest eerder21beschreven.
1. opknoping vak Test
2. voetafdruk analyse
Opmerking: Na het vak opknoping test, de voetafdruk-analyses uit te voeren.
3. terughoudendheid Stress laden
4. experimentele schema (figuur 4):
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De heterozygoot mannelijke muizen van Atp1a3 (Atp1a3+/ −) die de muismodel zijn voor snelle begin dystonie parkinsonisme en wild-type nestgenoten werden gebruikt in dit protocol. Atp1a3+/ − toonde aanzienlijk korter stride lengtes van voorpoot en stuk dan die van het wild-type op 4 weken oud (figuur 5A en 5B van de figuur, open circle en square). 'Benadrukt' Atp1a3+/ −
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De analyse van de voetafdruk en het vak van de hangende testen zijn eenvoudige en goedkope gedrags tests voor de motor functie van muizen. De neuro-fenotypes in verschillende Muismodellen hebben met succes ontdekt door deze tests. Bijvoorbeeld, verkort paslengte in Amyotrofische laterale sclerose24, toegenomen lengte van asymmetrische stride in Ataxie Teleangiëctasie25, toegenomen lengte van overlap tussen de ziekte van Huntington26 en dystonie
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dit werk werd gesteund door JSPS (Japan Society voor de promotie van de wetenschap) KAKENHI (Grant-in-Aid voor wetenschappelijk onderzoek-C), verlenen van nummer 18K 07373 (GS) en Subsidies voor particuliere universiteiten.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Hanging box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/ | |
| Marking pen | ZEBRA | MO-120-MC-BK | |
| Goal box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/ | Accessoire voor apparaat van balanced beam test |
| Boxes | O’hara & Co. | - | Zijwand van startbaan |
| Black ink | Shin-asahi | - | |
| Red ink | Maruyamakogyo | BC-6 | |
| Disposable Petri Dish | Corning | 351008 | Petrischalen (35 mm in diameter) |
| Askul Multipaper Super White J Monochrome A3 | Askul | 701-712 | Wit papier (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) |
| 50 mL Conical tube | Corning | 430829 | |
| Square drill | KAKURI Corporation | DIY FACTORY (K32-0313) |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen