Monster voorbereiding methode van scannen en transmissie elektronenmicroscoop voor de aanhangsels van woodboring Kever

Summary

Om ultrastructuur van insectensensilla te observeren, werd in de studie het protocol voor de voorbereiding van de insectenensilla, scanning en transmissieelektronenmicroscopie (SEM en TEM) in de studie gepresenteerd. Tween 20 werd toegevoegd aan de fixatie om monstervervorming in SEM te voorkomen. Fluorescentiemicroscopie was nuttig voor het verbeteren van de snijnauwkeurigheid in TEM.

Abstract

Dit rapport beschreef monsterbereidingsmethoden die waarnemingen van elektronenmicroscoops scannen en transmissieën, aangetoond door het voorbereiden van aanhangsels van de houtboorkever, Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012), voor beide soorten elektronenmicroscopie. Het protocol voor de voorbereiding van het monster van scanning electron microscopy (SEM) was gebaseerd op monsterchemische fixatie, uitdroging in een reeks ethanolbaden, drogen en sputtercoating. Door Tween 20 (Polyoxyethyleen sorbitan laurate) toe te voegen aan de fixatieve en wasoplossing, werd het insectenlichaamsoppervlak van houtboringkever gereinigder gewassen in SEM. Deze studie transmissie elektronenmicroscopie (TEM) monster voorbereiding betrokken een reeks stappen, waaronder fixatie, ethanol uitdroging, inbedding in hars, positionering met behulp van fluorescentie microscopie, sectioning, en vlekken. Fixatief met Tween 20 ingeschakeld doordringen de insecten lichaam muur van houtboring kever gemakkelijker dan het zou zijn geweest zonder Tween 20, en vervolgens beter vaste weefsels en organen in het lichaam, dus leverde duidelijke transmissie elektronenmicroscoop waarnemingen van insect sensilla ultrastructuren. De volgende stap van dit preparaat was het bepalen van de posities van insectensensilla in het monster ingebed in het harsblok met behulp van fluorescentiemicroscopie om de precisie van de positionering van het doel sensilla te verhogen. Dit verbeterde snijnauwkeurigheid.

Introduction

Scanning elektronenmicroscopie is een belangrijk instrument in veel morfologie studies, dat SEM oppervlaktestructuren^1,2toont. De aantrekkingskracht van transmissieelektronenmicroscopie is dat het kan worden gebruikt om een breed scala aan biologische structuren op nanometerschaal te bestuderen, van de architectuur van cellen en de ultrastructuur van organellen, tot de structuur van macromoleculaire complexen en eiwitten. TEM toont binnenstructuren^3,4,5.

Coleoptera is de grootste groep inse....

Protocol

LET OP: Raadpleeg de materiaalveiligheidsinformatiebladen van reagentia voordat u ze gebruikt. Verscheidene van de chemische stoffen die tijdens het monsterpreparaat worden gebruikt, zijn giftig, mutageen, kankerverwekkend en/of reprotoxisch. Gebruik persoonlijke beschermingsmiddelen (handschoenen, labjas, broek over de hele lengte en schoenen met gesloten teen) en werk onder een rookkap tijdens het hanteren van het monster.

1. SEM-monstervoorbereiding en beeldvorming

1. Proeffixatie en reiniging
   1. Werken in een gebied waar C. caragana voorkomen, trekken volwassenen in het veld vallen aas met planten lokmiddelen, zoals....

Results

Met behulp van reinigings- en fixatieve oplossing met Tween 20 werd een schoner SEM-beeld waargenomen dan dat zonder Tween 20 (figuur 3). Tween 20 bevestigingsoplossing drong door tot de glutaraldehydebevestigingsoplossing in het weefsel. Microtubuli structuur was duidelijk te zien. TEM-afbeelding van de interne structuur van het monster is vervaagd zonder Tween 20 (figuur 4).

Discussion

In dit artikel presenteerden we een monster voorbereiding sschema voor scanning en transmissie elektronenmicroscopie voor houtboring kever. Met behulp van insectenaanhangsel als representatief studieonderwerp hebben we verschillende verbeteringen ten opzichte van traditionele monsterbereidingsmethoden aangetoond.

De vloeibare olie die loskomt van het vaste oppervlak wordt geëmulgeerd tot kleine druppeltjes, die goed kunnen worden verspreid en opgehangen in het wasmedium om het opnieuw storten .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anatomical lens	Chongqing Auto Optical limited liability company	1425277
Carbon adhesive tape	SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.	7311
Carbon tetrachloride	Sigma	56-23-5
Copper grids	GilderGrids	G300
Disodium hydrogen phosphate	Sinopharm group chemical reagent co., LTD	10039-32-4
Ethanol	J.T. Baker	64-17-5
Flat embedding molds	Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.	70900
Fluorescence microscope	LEICA	DM2500
Glutaraldehyde	Sigma-Aldrich	111-30-8	Anhydrous EM Grade
Isophorone	Sigma	78-59-1
Lead citrate	Sigma	512-26-5
Methanol	Sigma	67-56-1
Monobasic sodium phosphate	Its group chemical reagent co., LTD	7558-80-7
Objective micrometer	Olympus	0-001-034
Osmium tetroxide	Sigma	541-09-3
Petri dish	Aldrich	1998
Razor blade	Gillette
Resin	Spurr	ERL4221
Scalpel	Lianhui	GB/T19001-2008
SEM	Hitachi	S-3400
Silica gel desiccant	Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd.	112926-00-8
Small brush	Martol	G1220
Sodium hydroxide	Sigma	1310-73-2
Sputter ion instrument	Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japan	E-1010
Stereo microscope	Leica	EZ4 HD
TEM	Hitachi	H-7500
Tween 20	Tianjin Damao Chemical Reagent	9005-64-5
Ultramicrotome	Leica	UC6
Ultrasonic cleaner	GT Sonic	GT-X1
Uranyl acetate	Sigma	6159-44-0