Methodenartikel

Studie over het metabolisme van zes systemische insecticiden in een nieuw opgerichte cel schorsing cultuur afgeleid van thee (Camellia sinensis L.) Bladeren

DOI:

10.3791/59312

⸱

15 juni 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, School of Tea and Food Science & Technology, Anhui Province Key Lab of Analysis and Detection for Food Safety, 2School of Resource & Environment, Anhui Agricultural University, Key Laboratory of Agri-food Safety of Anhui Province

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk presenteert een protocol voor de oprichting van een cel schorsing cultuur afgeleid van thee (Camellia sinensis L.) bladeren die kunnen worden gebruikt om het metabolisme van de externe verbindingen die kunnen worden opgenomen door de hele plant, zoals insecticiden studie.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een platform voor het bestuderen van insecticide metabolisme met behulp van in vitro weefsels van theeplant werd ontwikkeld. De bladeren van steriele thee plantjes werden veroorzaakt om losse aanroepus op Murashige en Skoog (Mej.) basismedia met de installatie hormonen te vormen 2, 4-dichlorophenoxyacetic zuur (2, 4-D, 1,0 mg L-1) en KINETIN (KT, 0,1 mg l-1). Aanroepus vormde zich na 3 of 4 rondes van subculturing, elk die 28 dagen duurt. Losse Callus (ongeveer 3 g) werd vervolgens geënt in B5 vloeibare media met dezelfde plantenhormonen en werd gekweekt in een schudden incubator (120 rpm) in het donker bij 25 ± 1 ° c. Na 3 − 4 subculturen, een cel schorsing afgeleid van thee blad werd vastgesteld op een subcultuur ratio variërend tussen 1:1 en 1:2 (schorsing moeder vloeistof: vers medium). Met behulp van dit platform, zes insecticiden (5 µ g mL-1 elk thiamethoxam, Imidacloprid, Acetamiprid, imidaclothiz, dimethoaat, en omethoaat,) werden toegevoegd in de thee Leaf-afgeleide cel schorsing cultuur. Het metabolisme van de insecticiden werd gevolgd gebruikend vloeibare chromatografie en de chromatografie van het gas. Om het nut van de Tea Cell Suspension cultuur te valideren, werden de metabolieten van thiamethoxan en dimethoaat aanwezig in behandelde cellen culturen en intacte planten vergeleken met massaspectrometrie. In behandelde Tea Cell culturen, zeven metabolieten van thiamethoxan en twee metabolieten van dimethoaat werden gevonden, terwijl in behandelde intacte planten, slechts twee metabolieten van thiamethoxam en een van dimethoaat werden gevonden. Het gebruik van een cel schorsing vereenvoudigde de metabole analyse in vergelijking met het gebruik van intacte thee planten, vooral voor een moeilijke matrix zoals thee.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Thee is een van de meest geconsumeerde non-alcoholische dranken in de wereld1,2. Thee wordt geproduceerd uit de bladeren en knoppen van de Woody meerjarige Camellia sinensis L. thee planten worden geteeld in grote plantages en zijn vatbaar voor tal van insectenplagen3,4. Organophosphorus en neonicotinoid insecticiden worden vaak gebruikt als systemische insecticiden5 om thee planten te beschermen tegen plagen zoals whiteflies, Leaf hoppers, en sommige Lepidoptera soorten6,7. Na toepassing, worden deze insecticiden geabsorbeerd of in de installatie verplaatst. Binnen de plant kunnen deze systemische insecticiden worden getransformeerd door middel van hydrolyse, oxidatie of reductiereacties door plantaardige enzymen. Deze transformatie producten kunnen meer polaire en minder giftig dan de bovenliggende verbindingen. Echter, voor sommige organofosfaten, de bioactiviteiten van sommige producten zijn hoger. Bijvoorbeeld, wordt acefaat omgezet in giftigere methamidofos8,9, en dimethoaat in omethoaat,10,11. De metabolische studies van de installatie zijn zo belangrijk voor het bepalen van het lot van een pesticide binnen een installatie12.

Plant aardige weefselculturen zijn bewezen een nuttig platform voor het onderzoek van het metabolisme van pesticiden, met de geïdentificeerde metabolieten vergelijkbaar met die gevonden in intact planten13,14,15. Het gebruik van weefselculturen, in het bijzonder de cellen schorsing culturen, heeft een aantal voordelen. Ten eerste, experimenten kunnen worden uitgevoerd vrij van micro-organismen, waardoor de interferentie van pesticide transformatie of degradatie door microben te voorkomen. Ten tweede, weefselcultuur biedt consistente materialen voor gebruik op elk gewenst moment. Ten derde, de metabolieten zijn gemakkelijker te halen uit weefselculturen dan van intacte planten, en weefselculturen hebben vaak minder interring verbindingen en lagere complexiteit van verbindingen. Ten slotte kan weefselculturen gemakkelijker worden gebruikt om een reeks van pesticiden metabolisme te vergelijken in een experiment16.

In deze studie, een cel schorsing afgeleid van de bladeren van steriel geteelde thee plantlet werd met succes vastgesteld. De Tea Cell Suspension cultuur werd vervolgens gebruikt om de dissipatie gedrag van zes systemische insecticiden te vergelijken.

Dit gedetailleerde protocol is bedoeld om enige leidraad te bieden, zodat onderzoekers kunnen een plantweefsel cultuur platform nuttig voor het bestuderen van de metabole lot van xenobiotica in thee vast te stellen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Tea oproepus cultuur

Nota: de steriele bladeren werden afgeleid uit in vitro-grown plantlet lijnen die eerst in Onderzoekgroep17worden ontwikkeld. Alle procedures tot en met sectie 5 werden uitgevoerd in een steriele laminaire stromings kap, met uitzondering van de cultuur tijd in een incubator.

  1. Pas de pH van de twee media (Murashige en Skoog [MS] basal medium en Gonsales B5 vloeistof medium) tot 5,8 voorafgaand aan autoclaaf (121 °C, 20 min).
  2. Snijd langs de middelste ader van een steriele blad met behulp van een schaar, en vervolgens onderverdelen elke helft in kleine stukjes van ongeveer 0,3 cm x 0,3 cm in een petrischaaltje.
  3. Plaats de steriele Explants (de kleine stukjes blad) op MS basale media met de planthormonen 2, 4-D (1,0 mg L-1) en KT (0,1 mg l-1). Zes Explants kunnen worden geplaatst in een kolf van 300 mL met 100 mL MS basale media.
  4. Cultuur het bovenstaande blad Explants bij een constante temperatuur van 25 °C in het donker. Na 28 dagen, selecteert u de eerste generatie van geïnduceerde Callus en transfer naar een nieuwe fles (een subcultuur). Verwerf de losse en brokkelig Callus na 3 − 4 subculturen.

2. Tea Cell schorsing cultuur

  1. Snijd de krachtige, brokkelig en losse eelt van het vaste medium in kleine stukjes (bereik hier 0,5 − 2 mm) met behulp van een steriele chirurgische mes onder steriele omstandigheden.
  2. Weeg ongeveer 3 g van de kleine stukjes van de Callus. Plaats de aanroepus in een kolf van 150 mL met 20 mL B5-vloeibare media, aangevuld met 2, 4-D (1,0 mg L-1) en KT (0,1 mg l-1).
  3. Cultuur de vloeibare cel schorsing bij een constante temperatuur (25 ± 1 ° c) in een schudden incubator op 120 rpm in het donker.
  4. Na 7 tot 10 dagen van kweken, verwijder de cultuur kolven en laat ze staan voor een paar minuten.
  5. Neem alle bovendrijvende als zaad materiaal voor subcultuur op vers medium (subcultuur ratio van Suspension moeder vloeistof tot vers medium varieerde tussen 1:1 en 1:2). Verwijder de neergeslagen, grote eelt.
  6. Verkrijg de laatste goed gekweekte cel schorsing cultuur na 3 − 4 subcultuur cycli van 28 dagen per stuk.

3. trifenylfosfaat tetrazolium chloride assay van de levensvatbaarheid van cellen

  1. Dood een steekproef van levende cellen bij 100 °C voor 10 min als controle cel vóór levensvatbaarheid het bevlekken.
  2. Centrifugeer alle cel schorsing cultuur voor 8 min bij 6000 x g. Verwijder de bovendrijvende voor de schorsing van de cellen in 2,5 mL fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) buffer (pH 7,3), en schud het voor 1 min met de hand.
  3. Voeg 2,5 mL van de 0,4% trifenylfosfaat tetrazolium chloride (TTC) oplossing toe en schud met de hand opnieuw.
  4. Incubeer het mengsel voor 1 h in een staande incubator (30 °C).

4. behandeling en bemonstering van thee cel schorsing culturen met insecticiden

  1. Voeg een hoeveelheid van 400 µ L van filter-gesteriliseerde stockoplossing (500 µ g mL-1) van vier neonicotinoids (thiamethoxam, Acetamiprid, Imidacloprid, en imidaclothiz) of twee organofosfaten (dimethoaat en omethoaat,) in de cel schorsing culturen, Respectievelijk.
    Opmerking: als het doel is om xenobiotische gedrag te vergelijken, gebruik maken van dezelfde moeder partij van cel schorsingen om de verschillende verbindingen te testen.
  2. Cultuur de monsters van de cel schorsingen met insecticiden bij constante temperatuur (25 ± 1 ° c) en schudden incubator snelheid (120 rpm). Neem de monsters (zie stap 4,3 of 4,4) op 0, 3, 5 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 en 75 dagen.
  3. Als u een monster met een neonicotinoid wilt testen, verwijdert u een hoeveelheid van 1 mL van de homogene cellen cultuur, plaatst u deze in een 1,5 mL plastic centrifugebuis en centrifugeer bij 4000 x g gedurende 2 minuten.
    1. Passeer de supernatants door middel van een 0,22-µm porie-size filter membraan voor analyse door High-Performance vloeistofchromatografie-ultraviolet (HPLC-UV) en ultra-high performance vloeistofchromatografie-quadrupole time-of-Flight (UPLC-QTOF) massa spectrometrie (lijst van materialen).
  4. Om een monster met een organofosfaat te testen, verwijdert u een 500 µ L hoeveelheid van de cel cultuur en plaats in een 35 mL centrifugebuis of een 1,5 mL plastic centrifugebuis (bereid het laatste monster als dat van neonicotinoid).
    1. Voeg 0,1 g natriumchloride en 5 mL aceton/ethylacetaat (3:7, v/v) toe aan de 35 mL centrifugebuis van de 500 µ L-monsters.
    2. Draai de mengsels voor 1 minuut en laat ze dan 10 minuten rusten.
    3. Neem 2,5 mL van de bovendrijvende in een 10 mL glazen buis en verdampen tot bijna-droogheid met behulp van een stikstof verdamper bij 40 °C.
    4. Los het residu op met 1 mL aceton, Vortex voor 1 min, doorgeven door middel van een 0,22-µm filter membraan voor analyse door Gas Chromatografie-vlam fotometrische detector (GC-FPD).

5. sample voorbereiding van intacte theeplant met insecticiden

Opmerking: de intact Tea plant trial werd uitgevoerd in een hydrocultuur systeem met behulp van thee zaailingen geteeld in 50 mL van een voedingsoplossing (30 NH4+, 10 nr3-, 3,1 PO4-, 40 K+, 20 CA2 +, 25 mg2 +, 0,35 Fe2 +, 0,1 B 3 +, 1,0 MN2 +, 0,1 Zn2 +, 0,025 cu2 +, 0,05 mo+, en 10 al3 +, in mg L-1)18. Een experimentele serre was onder een licht-donkere cyclus (12 h van licht en 12 h van duisternis) bij 20 °C bij de Landbouwuniversiteit van Anhui.

  1. Zet vijf planten in een 4 L plastic pot voor 15 dagen.
  2. Voeg 0 ppm (controle) of 100 ppm van thiamethoxam of dimethoaat in plastic potten, respectievelijk.
  3. Bereid het intacte plant monster volgens de vorige methode, met uitzondering van voor weken19, en vervolgens analyseren met massaspectrometrie voor een nauwkeurige massaspectrum.

6. instrument analyse

  1. HPLC-analyse van het metabolische gedrag van neonicotinoids
    1. Gebruik een HPLC-UV (tabel met materialen) om de inhoud en de metabole producten van thiamethoxam en Acetamiprid te detecteren bij een golflengte van 254 nm, en van Imidacloprid en imidaclothiz bij 270 nm in monsters van punt 4,3.
      Nota: de HPLC-UV voorwaarde was het zelfde als vorige studie19.
  2. GC analyse van het metabolische gedrag van organofosfaten
    1. Detecteren van de inhoud van dimethoaat en omethoaat, in monsters van punt 4,4 door een GC-FPD met behulp van een chirale kolom (tabel van materialen).
    2. Gebruik stikstof als de vervoerder gas en zet de debiet op 1,0 mL min-1.
    3. Stel de begintemperatuur in op 120 °C en houd deze 5 min. Verhoog de temperatuur tot 150 °C bij 30 °C min-1 en houd gedurende 3 min. te verhogen tot 170 °c bij 10 °c min-1 en houd voor 7 min. Tot slot verhogen tot 210 °C bij 30 °C min-1 en dan greep 5 min.
    4. Zet de injectie temperatuur op 200 °C in splitloze modus; Stel de detector temperatuur in op 250 °C.
    5. Stel het injectie volume in op 1 µ L.
  3. UPLC-QTOF analyse van de insecticide metabolieten in de cel cultuur
    1. Detecteren van de metabolieten van de insecticiden in de cel cultuur (monsters van punt 4,3) met behulp van UPLC-QTOF met een C18 kolom (tabel van materialen).
    2. Stel het debiet in op 0,2 mL min-1. Stel het injectie volume in op 10 µ L.
    3. Voor de neonicotinoid-behandelde monsters stelt u de initiële mobiele fase in op 85% A (5 mM ammonium formate water) en 15% B (acetonitril). Meer dan 10 min, verhoog mobiele fase B tot 38% en terug te keren naar 15% meer dan 1 min, houd voor 9 min.
    4. Voor de organofosfaat-behandelde monsters, zet de initiële mobiele fase tot 55% A (0,1% vorm zuur water) en 45% B (acetonitril). Meer dan 5 min, verhoog mobiele fase B tot 70%, dan terug te keren naar 45% van B meer dan 0,5 min, vast te houden voor 2,5 min.
    5. Stel de QTOF operatie parameters als volgt in: temperatuur van het gas, 325 °C; droog gas (stikstof), 10 L min-1; de temperatuur van het schede gas, 350 °C; het gas stroom van de schede, 11 L min-1; capillair voltage, 4000 V; Nozzle voltage, 1000 V; het voltage van de fragmentatie, 100 V voor neonicotinoid insecticiden of 110 V voor organophosphorus insecticiden; het voltage van de skimmer, 65 V; actief in de positieve Ion-modus.
    6. Stel het instrument in op het volledige scan spectrum en doel MS/MS-modus.
    7. Verwerken van de gegevens met behulp van nauwkeurige massa tools; Afleiden van de metabolieten met geen standaard producten uit de MS/MS annotatie, alsmede de literatuur12,15,20,21,22.
  4. UPLC-Orbitrap analyse van de insecticide metabolieten in intact plantenextract
    1. Sporen van de metabolieten van insecticiden in intact plantenextract met behulp van UPLC-Orbitrap massaspectrometrie (tabel van materialen).
    2. Zet de massaspectrometrie (tabel van materialen) werking parameters als volgt: schede gasdruk, 35 arb; de temperatuur van het gas, 300 °C; Nozzle voltage, 3,5 KV; capillaire temperatuur, 350 °C.
    3. Stel de elutie Programma's als het bovenstaande (stappen 6.3.3 en 6.3.4) voor UPLC-QTOF analyse van de cel cultuur.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De inductie van eelt uit bladeren geoogst uit veld-geteelde thee bomen en uit bladeren van thee plantjes geteeld in vitro in een steriele omgeving werd vergeleken door het meten van verontreiniging, Browning, en inductie na 28 dagen van de teelt op MS Media ( Figuur 1a). De groei van Callus werd opgenomen bij 20, 37, 62 en 90 dagen van cultuur (Figuur 1b). De eelt afkomstig van de in vitro-grown bladeren toonde een krachtiger gro...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit artikel presenteert het gedetailleerde proces van de vaststelling van een model van het metabolisme van pesticiden in theeplant weefsel, met inbegrip van de selectie van Explants, de bepaling van de levensvatbaarheid van de cellen, en de oprichting van een thee-cel schorsing cultuur met een hoge metabole Activiteit. Om het even welke delen van een installatie weefsel zouden kunnen worden gebruikt om aanroepus in een gesteriliseerde milieu te initialiseren25. Thee bladeren werden gekozen voor C...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd gesteund door het nationale belangrijkste onderzoek & ontwikkelingsprogramma (2016YFD0200900) van China, de nationale natuurlijke wetenschappelijke stichting van China (nr. 31772076 en nr. 31270728), de postdoctorale Stichting van de wetenschap van China (2018M630700), en open fonds van Staat zeer belangrijk laboratorium van de biologie en het gebruik van de thee installatie (SKLTOF20180111).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Acetamiprid (99.8%)Dr. Ehrenstorfer46717CAS-nr: 135410-20-7
Acetonitrile (CAN, 99.9%)TediaAS1122-801CAS-nr: 75-05-8
AgarSolarbio Science & TechnologyA8190CAS-nr: 9002-18-0
Clothianidin (99.8%)Dr. Ehrenstorfer525CAS-nr: 210880-92-5
Dimethoate (98.5%)Dr. Ehrenstorfer109217CAS-nr: 60-51-5
Imidacloprid (99.8%)Dr. Ehrenstorfer91029CAS-nr: 138261-41-3
Imidaclothiz (99.5%)Toronto Research ChemicalI275000CAS-nr: 105843-36-5
Kinetin (KT, >98.0%)Solarbio Science & TechnologyK8010CAS-nr: 525-79-1
Omethoate (98.5%)Dr. Ehrenstorfer105491CAS-nr: 1113-02-6
Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)Solarbio Science & TechnologyP8070CAS-nr: 25249-54-1
SucroseTocris Bioscience5511CAS-nr: 57-50-1
Thiamethoxam (99.8%)Dr. Ehrenstorfer20625CAS-nr: 153719-23-4
Triphenyltetrazolium Chloride (TTC, 98.0%)Solarbio Science & TechnologyT8170CAS-nr: 298-96-4
2,4-Dichlorofenoxyacetic Acid (2,4-D, >98.0%)Guangzhou Saiguo BiotechD8100CAS-nr: 94-75-7
chirale kolomAgilent CYCLOSIL-B112-6632Chromatografiekolom (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm)
Gaschromatografie (GC)Shimadu2010-PlusGekoppeld met Flame Photometric Detector (FPD)  
Hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC)Agilent1260Gekoppeld met Ultraviolet detector (UV)
HSS T3 C18 kolomWaters186003539Chromatografiekolom (100 mm × 2,1 mm × 1,8 µm)
Ultrahogedrukvloeistofchromatografie (UPLC)Agilent1290-6545Tandem quadrupole time-of-flight massaspectrometer (QTOF)
Ultrahogedrukvloeistofchromatografie (UPLC)Thermo ScientificUltimate 3000-Q Exactive FocusVerbonden met een Orbitrap massaspectrometer

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhao, Y., et al. Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS. Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).
  2. Alcazar, A., et al. Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).
  3. Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves. Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).
  4. Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry. Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).
  5. Hou, R. Y., et al. Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles. Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).
  6. Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).
  7. Fang, Q., et al. Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes. Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).
  8. Pan, R., et al. Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis). PloS One. 10 (9), e0138309(2015).
  9. Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. Fatal intoxication with omethoate. International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).
  10. Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.). Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).
  11. Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal. International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).
  12. Ford, K. A., Casida, J. E. Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).
  13. Frear, D. S., Swanson, H. R. Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton. Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).
  14. Sandermann, H. Jr, Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals. Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).
  15. Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).
  16. Lichtner, F. Phloem mobility of crop protection products. Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).
  17. Sun, J., et al. Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea. Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).
  18. Meng, M. T., et al. Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L). Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).
  19. Hou, R. Y., et al. Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).
  20. Karmakar, R., Kulshrestha, G. Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop. Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).
  21. Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).
  22. Lucier, G. W., Menzer, R. E. Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).
  23. Yang, G. W. Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties. , College of Food Science and Nutrition Engineering. China Agricultural University. (2004).
  24. Jiao, W., et al. Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).
  25. Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures. Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).
  26. Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium. Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).
  27. Grover, A., et al. Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).
  28. Lei, P. D., et al. Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis. Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).
  29. Hou, X., Guo, W. The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell. Guihaia. 18, 169-172 (1998).
  30. Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques. ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Theesuspensie van cellenInsecticidenmetabolismePlantencelkweekVloeistofchromatografieGaschromatografieMassaspectrometrieCallusinductiePesticidenanalyseCelviabiliteitSteriele plantjes

Gerelateerde artikelen