Het doel van dit manuscript en protocol is uit te leggen en in detail de chirurgische ingreep van orthotopic nier transplantatie bij ratten te tonen. Deze methode is vereenvoudigd om de juiste doorbloeding van de donor nier te bereiken en de reperfusie tijd te verkorten met behulp van de veneuze en urineleider manchet anastomosis techniek.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Orthotopic rat nier transplantatie: een nieuwe en vereenvoudigde chirurgische aanpak
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Nier transplantatie biedt verhoogde overlevingskansen en een betere kwaliteit van leven voor patiënten met een eindstadium nierziekte, in vergelijking met elk type van renale substitutietherapie. In de afgelopen decennia, de rat nier transplantatie model is gebruikt om de immunologische verschijnselen van afwijzing en tolerantie studie. Dit model is uitgegroeid tot een onmisbaar instrument om nieuwe immunomodulerende geneesmiddelen en regimes te testen voorafgaand aan de procedure met dure preklinische grote dierlijke studies.
Dit protocol biedt een gedetailleerd overzicht van hoe op betrouwbare wijze uit te voeren orthotopic nier transplantatie bij ratten. Dit protocol omvat drie onderscheidende stappen die de kans op succes te vergroten: doorbloeding van de donor nier door blozen door de poortader en het gebruik van een manchet systeem om de renale aderen en urineleiders te anastomose, waardoor afnemende koude en warme ischemie keer. Gebruikend deze techniek, hebben wij overlevingstarieven voorbij 6 maanden met normaal serumcreatinine bij dieren met syngeneic of verdraagzaam nier transplantaties bereikt. Afhankelijk van het doel van de studie, kan dit model door pre-of posttransplant behandelingen worden gewijzigd om de scherpe, chronische, cellulaire, of antilichaam-bemiddelde afwijzing te bestuderen. Het is een reproduceerbaar, betrouwbaar en kosteneffectief diermodel om verschillende aspecten van de nier transplantatie te bestuderen.
Inleiding
Historisch, de eerste transplantatie afwijzing studies werden uitgevoerd door Brent en Medawar met behulp van huidtransplantaties in knaagdieren1. Het werd al snel duidelijk dat de huid heeft verschillende immunologische kenmerken, waardoor het een zeer immunogeen orgaan dat anders is in afwijzing van andere vasculaire vaste organen2. Rat studies van Solid orgaantransplantatie afwijzing zijn gewoonlijk beperkt tot hart-, lever-en nier transplantaties. Hoewel elk van deze organen geschikt is om afwijzing te bestuderen, zijn er voordelen en nadelen aan elk van hen. Harttransplantaties worden vaak geplant in de buik en gean....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Lewis (RT11) en Dark AGOUTI (da) (RT1Aa) ratten werden gekocht bij commerciële leveranciers (Zie de tabel van de materialen). Deze volledig MHC-niet-gematchte stammen worden vaak gebruikt om acute renale Allograft afwijzing te bestuderen. Alle dieren werden gehuisvest en onderhouden volgens de nationale instituten van gezondheid (NIH) richtlijnen in een specifieke ziekteverwekker-vrije faciliteit aan de Johns Hopkins University. Alle procedures werden goedgekeurd door de institutionele Commissie van het dierzorg en gebruik.
1. donor procedure
- Bereid en autoclaaf alle chirurgische instrumenten....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
We voerden syngeneic (n = 5) en allogene nier transplantaties (n = 5). De dieren met een syngeneic transplantatie bereikten lange termijn Overleving zonder enige immunosuppressieve behandeling. Dieren die een allogene transplantatie kregen zonder immunosuppressie verwierpen hun Graft en bezweken aan nierfalen met een mediane overleving van 8 dagen (Figuur 4a). Gemiddelde serumcreatinine steeg bescheiden in de syngeneic groep, terwijl het steeg met 14-voudig.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In dit manuscript beschrijven we de chirurgische methode voor orthotopic KT in ratten in detail, met inbegrip van alle benodigde apparatuur die nodig is om deze procedure uit te voeren (Figuur 5). In 1965, Fisher en Lee publiceerde het eerste rapport over KT in ratten, die werd het begin van een spannend onderzoek veld18. Sindsdien zijn er veel wijzigingen aangebracht om de reproduceerbaarheid van dit model te verbeteren. Het heeft gediend als een effectief diermodel .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gefinancierd door een gulle gift van het Bombeck familielandgoed.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
```html
```
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Buprenorphine HCL | Reckitt Benckiser Healthcare UK | NDC12496-0757-5 | |
| Dissecting forceps, curved | Zhenbang, China | 11cm Flat handle | |
| Heparin sodium injection USP | Sagent Pharmaceuticals | NDC25021-400-10 | |
| Micro-forceps, straight, smooth | Jingzhong, China | WA3010 | |
| Micro needle holder | Jingzhong, China | WA2010 | |
| Micro vessel clamps | Jingzhong, China | WA40120 | |
| Micro spring sciccor 1 | ROBOZ | RS-5620 | |
| Micro spring sciccor 2 | F.S.T. | 91501-09 | |
| Micro spring sciccor 3 | Zhenbang, China | 8.5cm Vannas,curved | |
| Prograf (Tacrolimus/FK506) | Astellas | ||
| Rats | Charles River & Taconic Biosciences | LEW/Crl & DA-M | |
| Shaver | Wahl | 79600-2101 | |
| Suture 4-0 | Ethicon | J304H | |
| Suture, 4-0 | Ethicon | 683G | |
| Suture, 10-0 | Ethicon | 2820G | |
| Syringes & Needles | BD | ||
| Thread, 8-0 | Ashaway | 75290 | |
| Ureteral cuff | Microlumen | 160-1 | Polymide Tubing, Diameter 0.41 mm |
| Venous cuff | Intramedic BD | 7441 | PE-200 Non-radiopaque polyethylene tubing ID: 1.4 mm, OD: 1.9 mm |
Referenties
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. Actively acquired tolerance of foreign cells. Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).
- Murray, J. E. Organ transplantation (skin, kidney, heart) and the plastic surgeon. Plastic and Reconstructive Surgery. 47 (5)....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
