Methodenartikel

Synthese, Functionalization en karakterisatie van Fusogenic poreuze Silicon nanodeeltjes voor Oligonucleotide levering

7.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/59440

⸱

16 april 2019

 , 
1Materials Science and Engineering Program, University of California, San Diego, 2Department of Chemistry and Biochemistry, University of California, San Diego

In dit artikel

Samenvatting

We laten zien dat de synthese van fusogenic poreuze silicon nanodeeltjes voor effectieve in vitro en in vivo oligonucleotide levering. Poreuze silicon nanodeeltjes worden geladen met siRNA vormen de kern, die is bedekt door fusogenic lipiden door middel van extrusie te vormen van de shell. Targeting deel functionalization en karakterisering van het deeltje worden opgenomen.

Samenvatting

Met de komst van gentherapie, de ontwikkeling van een effectief in vivo nucleotide-nettolading uitvoeringssysteem geworden van parallelle invoer. Fusogenic poreuze silicon nanodeeltjes (F-pSiNPs) hebben onlangs aangetoond dat hoge in vivo gene werkzaamheid te wijten aan de hoge oligonucleotide laden capaciteit en unieke cellulaire opname traject dat endocytose vermijdt zwijgen. De synthese van F-pSiNPs is een multi-stap proces dat omvat: (1) laden en afdichten van oligonucleotide payloads in het silicium poriën; (2) gelijktijdige coating en dimensionering van fusogenic lipiden rond de poreuze silicon kernen; en (3) vervoeging van targeting peptiden en wassen als u wilt verwijderen van de overtollige oligonucleotide, silicium puin en peptide. Van het deeltje grootte uniformiteit wordt gekenmerkt door Dynamische lichtverstrooiing en de structuur van de kern-shell kan worden gecontroleerd door transmissie-elektronenmicroscopie. De opname van de fusogenic is gevalideerd door het laden van een lipofiele kleurstof, 1, 1'-dioctadecyl-3,3, 3', 3'-tetramethylindocarbocyanine perchloraat (DiI), in de fusogenic lipide dubbelgelaagde en behandelen naar cellen in vitro te observeren voor plasmamembraan kleuring endocytotische lokalisaties. De doelgerichtheid en in vivo gene silencing efficacies waren eerder gekwantificeerd in een muismodel van Staphylococcus aureus -pneumonie, waarin de targeting peptide wordt verwacht om te helpen de F-pSiNPs naar huis naar de plaats van de infectie. Buiten de toepassing ervan in S. aureus -infectie, kan de F-pSiNP-systeem worden gebruikt voor elke oligonucleotide voor gentherapie van een breed scala van ziekten, met inbegrip van virale infecties, kanker en auto-immune ziekten.

Inleiding

Gentherapie moduleert specifieke genexpressie om te verkrijgen van een therapeutische resultaat. Tal van hulpmiddelen voor gene modulatie hebben ontdekt en bestudeerd, met inbegrip van RNA zuur interferentie (RNAi) met behulp van oligonucleotides (bijvoorbeeld korte Mengend RNA (siRNA)1,2, microRNA (miRNA)3,4 ), DNA plasmiden5,6, nucleasen (bijvoorbeeld zink vinger, TALENS)7,8, en9,10van de systemen van de CRISPR/Cas9. Terwijl van elk hulpprogramma werkingsmechanisme verschilt, moet alle hulpmiddelen van de cel cytoplasma of de celkern actief bereiken. Als zodanig, terwijl deze tools hebben bewezen voor het opwekken van aanzienlijke invloed bij het moduleren van genexpressie in vitro, lijdt in vivo werkzaamheid extracellulaire en intracellulaire belemmeringen. Wijten aan het feit dat de instrumenten van biologische oorsprong zijn, bestaan vele enzymen en goedkeuring systemen in ons lichaam die hebben de mogelijkheid om te degraderen of te verwijderen van de vreemde moleculen11. Zelfs in het geval lijden dat de extra de doelcel bereiken, zij aan endocytose; een modus van cellulaire opname die kapselt en de hulpprogramma's in de zure maag-achtige blaasjes die degraderen of royement van de hulpprogramma's uit de cel overlapt. In feite, hebben studies aangetoond dat lipide nanodeeltjes endocytosed via macropinocytosis worden, waaruit zijn ongeveer 70% van de siRNA exocytosed uit de cellen binnen de 24 uur van opname12,13. De meerderheid van de resterende siRNA zijn gedegradeerd door de lysosomale traject, en uiteindelijk slechts 1-2% van de siRNA die aanvankelijk de cel met de nanodeeltjes invoert bereiken endosomal ontsnappen naar potentieel ondergaan RNAi13,14 .

Onlangs hebben we de fusogenic poreus silicon nanodeeltjes (F-pSiNPs) die een siRNA-geladen kern bestaat uit poreus silicon nanodeeltjes en een fusogenic lipide shell15hebben ontwikkeld. De F-pSiNPs presenteren drie grote voordelen ten opzichte van andere conventionele oligonucleotide levering systemen: (1) een fusogenic lipide coating waardoor de deeltjes te omzeilen endocytose en de hele lading leveren rechtstreeks in het cytoplasma van de cel (tegenover de 1-2% bereikt door endocytosed deeltjes13,14) (Figuur 1); (2) hoge massa laden van siRNA in de pSiNPs (> 20 wt % vergeleken met 1-15 wt % door conventionele systemen)15, die snel degraderen in het cytoplasma (zodra de kern deeltjes werpen de lipide coating via fusogenic opname) tot het vrijgeven van siRNA; en (3) peptide vervoeging voor selectieve homing te richten gewenst celtypes in vivo.

De F-pSiNP systeem gebleken belangrijke gene werkzaamheid zwijgen (> 95% in vitro; > 80% in vivo) en latere therapeutisch effect in een fatale muismodel van S. aureus -pneumonie; de resultaten van die werden gepubliceerd eerder15. De complexe structuur van de F-pSiNP-systeem vereist echter delicate behandeling en verfijnd optimalisatie voor het genereren van homogeen en bestendig nanodeeltjes. Dus, is het doel van dit werk te presenteren een grondige protocol, evenals optimalisatie strategieën voor de synthese, functionalization en karakterisatie van F-pSiNPs moet worden gebruikt bij gerichte levering van siRNAs voor krachtige gene silencing effect.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. synthese van poreuze silicon nanodeeltjes (pSINPs)

Let op: Wees altijd voorzichtig bij het werken met waterstoffluoride (HF). Alle gidsen van veiligheid volgens het veiligheidsinformatieblad (SDS) volgen, omgaan met een HF-bevattende chemicaliën in een zuurkast en dragen van geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen (PPE; dubbele handschoenen met butyl handschoenen aan de buitenkant, butyl schort met laboratoriumjas onder, gezicht schild met veiligheidsbril onder). Alle universiteiten en R & D labs vereisen specifieke opleiding op HF veiligheid voorafgaand aan gebruik. Probeer niet om te werken met HF zonder voorafgaande goedkeuring van de veiligheidscoördinator van uw lokale lab, zoals aanvullende veiligheidsmaatregelen die hier niet worden beschreven, vereist zijn.

  1. Voorbereiding van de ETS-oplossingen
    1. Om de 3:1 HF oplossing voor etsen (gebruikt in stappen 1.3 en 1.4), vul een plastic studeerde aan de cilinder met waterige 48% HF 30 mL en 10 mL van absolute ethanol (EtOH). De oplossing moet worden opgenomen in de hoge dichtheid kunststoffen (bijvoorbeeld HDPE), zoals de HF glas lost.
    2. Om een 1:29 studeerde HF oplossing voor astronauten (gebruikt in stap 1.5), vul een plastic cilinder met 1 mL waterige 48% HF en 29 mL absolute ethanol. De oplossing moet worden opgenomen in de hoge dichtheid kunststoffen (bijvoorbeeld HDPE), zoals de HF glas lost.
    3. Maak van de 1 M KOH-oplossing in 10% EtOH voor ontbinding van de overtollige pSi (gebruikt in stappen 1.3 en 1.5).
  2. De etsen-cel instellen
    1. In een Teflon etch cel met een 8.6 cm2 etch goed (gebied wordt berekend door het meten van de diameter van het silicium oppervlak beschikbaar voor etsen binnen de O-ring, en het berekenen van het gebied door A = πr2), plaats in aflopende volgorde (Figuur 2a): (1) de Teflon cel top; (2) een O-ring; (3) in een kwartaal stuk van de enkele kristallen (1 0 0) - georiënteerde p ++ - type silicium wafer gesneden in kwarten (met behulp van een diamantslijper); (4) aluminium folie; en (5) de Teflon cel basis met schroeven voorzichtig verscherpt ter voorkoming van lekkage.
    2. Vul de put met EtOH. Neem een veeg en invoegen in de spleet tussen de Teflon cel boven- en base. Als het veeg droog na verwijdering is, is de cel etsen verzegeld. Als NAT, de cel lekt, en draai verder de schroeven totdat verzegeld.
  3. Elektrolytisch polijsten de silicium wafer
    1. Doen de geassembleerde etsen-cel in een zuurkast.
    2. Vul de put met 10 mL 3:1 HF-oplossing.
    3. Sluit de positieve leiding aan de aluminiumfolie (elektrode) uit de etsen-cel en de negatieve lood met de platinum spoel (contra elektrode) ondergedompeld in de 3:1 HF-oplossing van de etsen-cel te voltooien van het circuit (Figuur 2b).
    4. Uitvoeren van een constante stroom bij 50 mA cm-2 voor 60 s. Eenmaal etch is klaar, de cel verwijderen uit het circuit, en de 3:1 HF zorgvuldig met behulp van een injectiespuit spoelen. Spoel met EtOH driemaal.
    5. Ontbinden weg de geëtste laag door het invullen van de put langzaam met 10 mL van 1 M KOH. Wacht totdat de borrelen afneemt.
    6. Spoel de KOH met water drie keer, waarna met EtOH driemaal.
  4. Elektrochemisch etsen poreuze lagen in silicium wafer
    1. Uitvoeren van een wisselstroom van een vierkante golfvorm, met lagere current density 50 mA/cm,2 voor 0,6 s en hoge stroomdichtheid van 400 mA/cm2 voor 0.36 s herhaald voor 500 cycli.
    2. Eenmaal etch is klaar, de cel verwijderen uit het circuit, en de 3:1 HF zorgvuldig met behulp van een injectiespuit spoelen. Spoel met EtOH driemaal.
  5. Tillen-off van de poreuze laag van het silicium wafer
    1. Vul de put met 10 mL van de 1:29 HF-oplossing.
    2. Uitvoeren van een constante van 3.7 mA/cm2 voor 250 s. Eenmaal etch is klaar, het verwijderen van de cel van het circuit. De pSi-laag wellicht zichtbaar rimpels die aangeeft detachement van het zegel van de kristallijn silicium. Voorzichtig wassen de 1:29 HF-oplossing en spoel met EtOH drie keer, daarna met water drie keer.
    3. Met behulp van een pipet tip, stevig barst van de omtrek van de pSi-laag voor volledige detachement. Met behulp van EtOH, etch verzamelen de pSi fragmenten (chips) uit de Teflon cel in een wegende boot. De chips overbrengen in een glazen ampul. De pSi-chips mogen worden bewaard bij kamertemperatuur in EtOH meer dan 6 maanden voor opslag.
    4. Los eventuele resterende poreuze silicium op het zegel weg door het invullen van de put langzaam met 10 mL van 1 M KOH. Wacht totdat de borrelen afneemt.
    5. Spoel de KOH met water drie keer, waarna met EtOH driemaal.
    6. Herhaal stap 1.3-1.5 totdat de gehele wafer dikte heeft is geëtst.
  6. Sonicating poreuze lagen voor nanoparticle vorming
    1. Vervang het oplosmiddel van de flacon van glas met pSi chips uit EtOH tot 2 mL DI water.
    2. Stevig sluiten van het GLB, en verzegel met behulp van parafilm.
    3. Plaats de glazen ampul in een ultrasoonapparaat bad en opgeschort zodat het volume van pSi chips is volledig ondergedompeld onder het oppervlak.
    4. Bewerk ultrasone trillingen ten voor 12u bij 35 kHz en RF vermogen van 48W. Om te voorkomen dat belangrijke waterverlies tijdens ultrasoonapparaat, plaats een maatkolf gevuld met water, omgekeerd zodat de opening van de kolf het oppervlak van het waterbad raakt.
    5. Plaats de glazen ampul op een vlakke ondergrond voor 1 h om grotere deeltjes te vestigen op de bodem. Verzamelen van de bovendrijvende vloeistof met behulp van een precisiepipet; de schorsing bevat sub-100 nm pSiNPs.

2. bereiding van fusogenic lipide film

  1. Voorbereiding van de voorraadoplossingen van lipide
    1. Zorg in een zuurkast, 10 mg/mL voorraden van lipiden door hydraterende DMPC, DSPE-PEG-MAL en DOTAP lipiden in chloroform. Deze stamoplossingen kunnen worden bewaard bij-20 ° C voor maximaal 6 maanden onder strakke parafilm zegel.
  2. Maken van de fusogenic-lipide-film
    Opmerking: De samenstelling van de fusogenic is gemaakt van de lipiden, DMPC, DSPE-PEG en DOTAP, op de molaire verhouding tussen 76.2:3.8:20 en 96.2:3.8:0, respectievelijk.
    1. Meng in een glazen ampul, 72.55 μL van 19.63 μL van DOTAP, DMPC en 15.16 μL van DSPE-PEG door pipetteren.
    2. Optioneel: Voor fluorescerende etikettering van de lipide-coating, bovendien toevoegen 20 µL van DiI opgelost in EtOH bij een concentratie van 1 mg/mL.
    3. Plaats de ampul in een zuurkast met een losse dop om de chloroform te verdampen 's nachts. De gedroogde film zullen een bewolkt harde gel-achtige substantie aan de onderkant van de flacon.

3. veilig laden en afdichten van siRNA in pSiNPs

  1. Voorbereiding van het calciumchloride laden voorraad
    1. Los 1.11 g CaCl2 in 10 mL water RNAse-vrij te maken van een 2 M CaCl2 oplossing.
    2. Centrifugeer de oplossing bij > 10.000 x g voor 1 min te regelen van de aggregaten en verzamelen de bovendrijvende vloeistof met behulp van een precisiepipet. Als alternatief, filtreer de oplossing door een 0,22 µm filter.
  2. Voorbereiding van siRNA laden voorraad
    1. Hydrate of siRNA tot 150 µM in RNAse-gratis water verdund. Deze stamoplossing kan worden aliquoted en bevroren bij-20 ° C bewaard gedurende ten minste 30 dagen gezien het feit dat het geen frequente bevriezen-ontdooien cycli ondergaan.
  3. Laden van siRNA in pSiNPs met calciumchloride
    1. Bereiden een iced ultrasoonapparaat bad.
    2. Onder de 15 min met ultrasone trillingen, zachtjes Pipetteer 150 µL van siRNA en 700 µL van 2 M CaCl2 in 150 µL van pSiNP. Zorg ervoor dat het deksel van de microcentrifuge buis openlaten voor gas generatie.
    3. Het verwijderen van de buis met 1 mL van siRNA-geladen calcium gecoat pSiNPs uit het ultrasoonapparaat.

4. coating siRNA-geladen pSiNPs met lipiden van fusogenic

  1. Voorbereiding van de liposomen extrusie kit
    1. Vul een groot bekerglas met DI water. Weken 1 polycarbonaat membraan (200 nm poriën), en 4 filter ondersteunt door hen drijvend op het watervlak. De liposomen extrusie kit monteren door het volgen van de instructies van de fabrikant
  2. Hydraterende de lipide-film met siRNA-geladen pSiNps
    1. Hydrateer de gedroogde lipide-film in de glazen ampul met 1 mL van siRNA-geladen calcium gecoat pSiNPs verkregen uit stap 3.3.3. Pipetteer totdat alle lipiden film hebben opgeheven vanaf de onderkant van de flacon en hebben gemengd in een homogene oplossing van bewolkt.
    2. Plaats van een magnetische roeren bar in de glazen ampul, en plaats de ampul op een hete plaat voor het opwarmen van de deeltjes naar 40 ° C (of hoog genoeg boven de lipiden fase transformatietemperatuur om de lipiden in de meer fluidic vloeibare fase) terwijl magnetisch Roer de oplossing voor 20 min.
  3. Diepte van het lipide-gecoate pSiNPs voor controle van de grootte
    1. De 1 mL van lipide-gecoate pSiNP-siRNA oplossing in de extrusie spuit gecombineerd. Voeg een lege spuit aan één zijde van de extruder, en de gevulde spuit aan de andere kant.
    2. Allereerst dat extrusie duwen de zuiger langzaam in te duwen de deeltjes uit een spuit, door het membraan van polycarbonaat, en in de andere. Herhaal 20 keer. Als de zuiger vastzit, kunnen het filter en de membraan worden verstopt. Demonteren van de extruder en vervangen van het membraan en filter ondersteunt. Als het probleem aanhoudt, Verdun de deeltjes tot verstopping beheersbaar is.
    3. De geëxtrudeerde deeltjes in een buis van microcentrifuge verzamelen.

5. de vervoeging van targeting van peptiden

  1. Conjugating targeting peptide aan lipide coating
    1. Bereid de voorraad van de peptide met 1 mg/mL peptide concentratie in RNAse-gratis water.
    2. In de buis van de microcentrifuge met fusogenic Voeg lipide-gecoate pSiNPs, 100 µL van de 1 mg/mL peptide materieel en Pipetteer zachtjes. Houd de buis statische bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten (als alternatief, > 2 uur bij 4 ° C).
    3. Als u wilt verwijderen van de overtollige peptide of siRNA en andere hulpstoffen, wassen in een 30 kDa centrifugaal filteren door spinnen bij 5.000 x g bij 25 ° C gedurende 1 h. Centrifuge tweemaal meer met 1 mL PBS onder dezelfde instelling.
    4. Resuspendeer de uiteindelijke peptide-geconjugeerde fusogenic lipide-gecoate pSiNPs in PBS met de gewenste concentratie. De deeltjes kunnen nu aliquoted en bevroren bij-80 ° C voor opslag van ten minste 30 dagen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Een succesvolle synthese van fusogenic pSiNPs moet produceren een homogene, enigszins ondoorzichtig oplossing (Figuur 3a). Falen om de verhouding en de concentratie van pSiNPs te optimaliseren: siRNA: CaCl2 kan leiden tot samenvoeging bij het laden van (Figuur 3b). De deeltjes zijn warm geperst door 200 nm membranen, de gemiddelde hydrodynamische diameter van de pSiNPs van de fusogenic gemeten door DLS moeten ongeveer ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Synthese van poreuze silicon nanodeeltjes is afgebeeld in Figuur 5. De kritische stap in de synthese van fusogenic pSiNPs is in de laden stap (stap 3). Als de fusogenic-nanodeeltjes zijn aggregeren na synthese (Figuur 3), de reden kan worden veroorzaakt door het volgende: (1) calciumchloride voorraad homogeen niet bereid was, dus stap 3.1.2 moet zorgvuldig gevolgd of geraffineerd; of (2) de verhouding tussen pSiNP: siRNA: CaCl2 of de concentratie van ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

MJS is een wetenschappelijke grondlegger van Spinnaker Biosciences, Inc., en heeft een aandelenbelang in het bedrijf.  Hoewel deze subsidie is vastgesteld voor het beheer van de belangenconflicten op basis van het algemene toepassingsgebied van het project en zijn potentiële voordelen voor Spinnaker Biosciences, Inc., kunnen de onderzoeksresultaten opgenomen in deze bijzondere publicatie niet noodzakelijkerwijs betrekking hebben op de belangen van Spinnaker Biosciences, Inc. De bepalingen van deze overeenkomst zijn herzien en goedgekeurd door de University of California, San Diego overeenkomstig haar beleid van belangenverstrengeling. Andere auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk wordt ondersteund door de National Institutes of Health door contract # R01 AI132413-01.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC)Avanti Polar Lipids850345PPoeder
1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propaan (chloridezout) (DOTAP)Avanti Polar Lipids890890PPoeder
1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[maleimide(polyethyleenglycol)-2000] (ammoniumzout) (DSPE-PEG(2000) Maleimide)Avanti Polar Lipids880126PPoeder
AluminiumfolieVWR International, LLC12175-001
Calciumchloride (CaCl2)SpectrumC1977Watervrij, Pellets
ChloroformFisher ScientificC6061
ComputerDellDimension 9200Elke computer met PCI-kaartsleuf is acceptabel
Dil Stain (1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindocarbocyanine Perchlorate ('DiI'; DiIC18(3)))Life TechnologiesD3911
Ethanol (EtOH)UCSD Store111200 Proof
Waterstoffluoride (HF)VWR International, LLCMK264008 Zuiverheid: 48%
Keithley 2651a SourcemeterKeithley2651A
LabVIEWNational InstrumentsVoorbeeldprogramma beschikbaar op: http://sailorgroup.ucsd.edu/sofware/
LysoTracker Green DND-26Thermo Fisher ScientificL7526
Liposomenextrusieset met verwarmingsblokAvanti Polar Lipids610000
Microcon-30kDa Centrifugaal FiltereenheidEMD MilliporeMRCF0R030
O-ringChemGlassCG-305-220
Fosfaatgebufferd zout (PBS)Thermo Fisher Scientific10010-049
PlatinumspiraalVWR International, LLCAA10285-BU
Kaliumhydroxide (KOH)Fisher ScientificP250-3
Silicion waferSiltronixOp bestelling
siRNADharmaconOp bestellingIRF5, zin 5’-dTdT-CUG CAG AGA AUA ACC CUG A-dTdT-3’ en antisense 5’-dTdT UCA GGG UUA UUC UCU GCA G dTdT-3’
SonicatorVWR International, LLC97043-960
Doelpeptide (CRV)CPC ScientificOp bestellingsequentie CRVLRSGSC; gemaakt cyclisch door een disulfidebinding tussen de zijketens van de twee cysteïneresidu's
Teflon etch celInterface Performance Materials, Inc.Op bestelling
UltraPure DNase/RNase-Free Gedistilleerd Water Thermo Fisher Scientific10977015

Referenties

  1. Ryther, R. C. C., Flynt, A. S., Phillips Iii, J. A., Patton, J. G. siRNA therapeutics: big potential from small RNAs. Gene Therapy. 12, 5(2004).
  2. Scherman, D., Rousseau, A., Bigey, P., Escriou, V. Genetic pharmacology: progresses in siRNA delivery and therapeutic applications. Gene Therapy. 24, 151(2017).
  3. Broderick, J. A., Zamore, P. D. MicroRNA therapeutics. Gene Therapy. 18, 1104(2011).
  4. Geisler, A., Fechner, H. MicroRNA-regulated viral vectors for gene therapy. World Journal of Experimental Medicine. 6 (2), 37-54 (2016).
  5. Williams, P. D., Kingston, P. A. Plasmid-mediated gene therapy for cardiovascular disease. Cardiovascular Research. 91 (4), 565-576 (2011).
  6. Ferreira, G. N. M., Monteiro, G. A., Prazeres, D. M. F., Cabral, J. M. S. Downstream processing of plasmid DNA for gene therapy and DNA vaccine applications. Trends in Biotechnology. 18 (9), 380-388 (2000).
  7. Shim, G., et al. Therapeutic gene editing: delivery and regulatory perspectives. Acta Pharmacologica Sinica. 38, 738(2017).
  8. Carlson, D. F., Fahrenkrug, S. C., Hackett, P. B. Targeting DNA With Fingers and TALENs. Molecular Therapy - Nucleic Acids. 1, (2012).
  9. Dai, W. -J., et al. CRISPR-Cas9 for in vivo Gene Therapy: Promise and Hurdles. Molecular Therapy - Nucleic Acids. 5, e349(2016).
  10. Adli, M. The CRISPR tool kit for genome editing and beyond. Nature Communications. 9 (1), 1911(2018).
  11. Houseley, J., Tollervey, D. The Many Pathways of RNA Degradation. Cell. 136 (4), 763-776 (2009).
  12. Sahay, G., et al. Efficiency of siRNA delivery by lipid nanoparticles is limited by endocytic recycling. Nature Biotechnology. 31 (7), 653-658 (2013).
  13. Wang, Y., Huang, L. A window onto siRNA delivery. Nature Biotechnology. 31 (7), 611-612 (2013).
  14. Gilleron, J., et al. Image-based analysis of lipid nanoparticle-mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape. Nature Biotechnology. 31 (7), 638-646 (2013).
  15. Kim, B., et al. Immunogene therapy with fusogenic nanoparticles modulates macrophage response to Staphylococcus aureus. Nature Communications. 9 (1), 1969(2018).
  16. Zhang, X., et al. Targeted Disruption of G0/G1 Switch Gene 2 Enhances Adipose Lipolysis, Alters Hepatic Energy Balance, and Alleviates High-Fat Diet–Induced Liver Steatosis. Diabetes. 63 (3), 934-946 (2014).
  17. Schlosser, K., Taha, M., Deng, Y., Stewart, D. J. Systemic delivery of MicroRNA mimics with polyethylenimine elevates pulmonary microRNA levels, but lacks pulmonary selectivity. Pulmonary Circulation. 8 (1), 2045893217750613(2018).
  18. Komarov, A. P., et al. Functional genetics-directed identification of novel pharmacological inhibitors of FAS- and TNF-dependent apoptosis that protect mice from acute liver failure. Cell Death & Disease. 7, e2145(2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Dynamische LichtverstrooiingTransmissie elektronenmicroscopieLiposoomextrusieConfocale MicroscopiePeptideconjugatiesiRNA ladenZetapotentiaalmetingHydrodynamische Diameter

Gerelateerde artikelen