Isolatie en kwantificering van het Zikavirus van meerdere organen in een muis

James  D. Brien; Mariah Hassert; E. Taylor Stone; Elizabeth Geerling; Lillian Cruz-Orengo; Amelia K. Pinto

doi:10.3791/59632

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Isolatie en kwantificering van het Zikavirus van meerdere organen in een muis

7.3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/59632

⸱

15 augustus 2019

James D. Brien^*¹ , Mariah Hassert^*¹ , E. Taylor Stone¹ , Elizabeth Geerling¹ , Lillian Cruz-Orengo² , Amelia K. Pinto¹

¹Department of Molecular Microbiology and Immunology, Saint Louis University, ²School of Veterinary Medicine University of California Davis

^* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Het doel van het protocol is om de technieken aan te tonen die worden gebruikt om virale ziekten te onderzoeken door het Zikavirus te isoleren en te kwantificeren, van meerdere organen in een muis na infectie.

Samenvatting

De gepresenteerde methoden tonen laboratorium procedures voor de isolatie van organen van besmette dieren van het Zikavirus en de kwantificering van de virale belasting. Het doel van de procedure is het kwantificeren van virale Antilichaamtiters in perifere en CZS-gebieden van de muis op verschillende tijdstippen na infectie of onder verschillende experimentele omstandigheden om virologische en immunologische factoren te identificeren die de Zikavirus infectie reguleren. De orgel isolatie procedures laten zien dat zowel de bepaling van de focus vormende assay als de kwantitatieve PCR-beoordeling van virale titers mogelijk is. De snelle orgel isolatietechnieken zijn ontworpen voor het behoud van de virus titer. Virale titer kwantificering door focus vormende assay zorgt voor de snelle doorvoer beoordeling van het Zikavirus. Het voordeel van de focus vormende assay is de beoordeling van infectieuze virus, de beperking van deze test is het potentieel voor orgaantoxiciteit vermindering van de aantoonbaarheidsgrens. Virale titer beoordeling wordt gecombineerd met kwantitatieve PCR, en met behulp van een recombinant RNA kopie controle virale genoom kopie nummer binnen het orgel wordt beoordeeld met lage aantoonbaarheidsgrens. Over het algemeen bieden deze technieken een nauwkeurige snelle hoge doorvoer methode voor de analyse van Zika-virale Antilichaamtiters in de periferie en CNS van besmette dieren van het zikavirus en kunnen worden toegepast op de beoordeling van virale Antilichaamtiters in de organen van dieren die zijn geïnfecteerd met de meeste pathogenen, waaronder Denguevirus.

Inleiding

Zika virus (zikv) is een Arbovirus dat behoort tot de familie van de virussen, die belangrijke neuroinvasieve menselijke pathogenen zoals Powassan virus (powv), Japanse encefalitis virus (JEV) en West Nile Virus (WNV)¹bevat. Na de isolatie en identificatie zijn er periodieke meldingen geweest van menselijke zikv-infecties in Afrika en Azië²^,³^,⁴^,⁵en epidemieën in Midden-en Zuid-Amerika (beoordeeld in Referentie⁶). Echter, het was niet tot voor kort dat ZIKV werd gedacht te veroorzaken ernstige z....