Dolioliden, met inbegrip van de soort Dolioletta gegenbauri, zijn kleine gelatineuze mariene zoöplankton van ecologische betekenis gevonden op productieve Subcontinentale plank systemen wereldwijd. De moeilijkheid van het kweken van deze delicate organismen beperkt hun onderzoek. In deze studie beschrijven we de teelt benaderingen voor het verzamelen, fokken en onderhouden van de doliolid Dolioletta gegenbauri.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Teelt van de mariene pelagische Tunicate Dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) voor experimentele studies
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Gelatineuze zooplanktons spelen een cruciale rol in de oceaan ecosystemen. Het is echter over het algemeen moeilijk om hun fysiologie, groei, feconiteit en trofische interacties te onderzoeken, voornamelijk als gevolg van methodologische uitdagingen, waaronder het vermogen om ze te cultuur. Dit geldt met name voor de doliolid, Dolioletta gegenbauri. D. gegenbauri komt vaak voor in productieve subtropische, continentale schapsystemen wereldwijd, vaak bij bloei concentraties die een grote fractie van de dagelijkse primaire productie kunnen consumeren. In deze studie beschrijven we de teelt benaderingen voor het verzamelen, fokken en onderhouden van D. gegenbauri met het oog op het uitvoeren van laboratorium studies. D. gegenbauri en andere doliolid soorten kunnen levend worden gevangen met behulp van schuin getrokken conische 202 μm mesh plankton netten van een drifting schip. Culturen worden het meest betrouwbaar vastgesteld wanneer de watertemperaturen lager zijn dan 21 °C en worden gestart vanuit onrijpe gonozooids, rijpende phorozooids en grote verpleegkundigen. Culturen kunnen worden gehandhaafd in afgeronde kweekvaten op een langzaam draaiend plankton wiel en gedurende vele generaties worden gesteund op een dieet van gekweekte algen in natuurlijk zeewater. Naast de mogelijkheid om laboratorium culturen van D. gegenbaurivast te stellen, tonen we aan dat de opvang toestand, algen concentratie, temperatuur en blootstelling aan natuurlijk geconditioneerd zeewater essentieel zijn voor de cultuur oprichting, groei, overleving en reproductie van D. gegenbauri.
Inleiding
Zooplankton is voor de grootste dierlijke biomassa in de Oceaan, zijn belangrijke componenten in mariene voedsel webben, en spelen belangrijke rollen in de oceaan biogeochemische cycli1,2. Zooplankton, hoewel het bestaat uit een enorme diversiteit aan organismen, kan worden onderscheiden in twee categorieën: gelatineuze en niet-gelatineuze met weinig tussenliggende taxa3,4. In vergelijking met het niet-gelatineuze zoöplankton zijn gelatineuze zoöplankton bijzonder moeilijk te bestuderen vanwege hun complexe levens geschiedenissen5
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. het voorbereiden van kweek faciliteiten voor het fokken van D. gegenbauri
Opmerking: alle benodigde materialen en apparatuur worden vermeld in de tabel met materialen.
- Bereid 1 M natrium hydroxide (NaOH), 0,06 M kaliumpermanganaat (KMnO4) oplossing. Om deze oplossing voor te bereiden, Los 400 g NaOH op in 10 L gedeïoniseerd water. Voeg 100 g KMnO4 toe aan de NaOH-oplossing en meng goed.
- Bereid een 0,1 M natrium natriumbisulfiet (nahso3) oplossing door het oplossen van 100 g van nahso3 in 10 L gedeïoniseerd water en meng goed.
Let op: deze reagent....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Volgens de beschreven procedures voor het verzamelen en kweek van de doliolid, D. gegenbauri geschetst in Figuur 3, is het mogelijk om een cultuur van D. gegenbauri in zijn complexe levensgeschiedenis te behouden (Figuur 1) en het voor vele generaties ondersteunen. Hoewel de teelt van D. gegenbauri hier wordt beschreven, moeten deze procedures ook relevant zijn voor de teelt van andere doliolid soorten.
Het .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het vermogen tot cultuur doliolids is in de afgelopen decennia vastgesteld en is gebruikt om onderzoek op verschillende gebieden te ondersteunen. Experimentele studies in onze laboratoria hebben de publicatie ondersteund van ten minste 15 wetenschappelijke studies gericht op de voeding en groei18,26, reproductie18,28, dieet6, 29, fysiologie
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te verklaren.
Dankbetuigingen
We zijn dankbaar voor de vele personen die in de loop der jaren opgebouwde kennis hebben bijgedragen aan dit project, waaronder G.-A. Paffenhöfer en D. Deibel die deze protocollen oorspronkelijk ontwikkelden. M. Köster en L. Lamboley hebben ook een aanzienlijke bijdrage geleverd aan de ontwikkeling van deze procedures. N.B. López-Figueroa en Á.E. Rodríguez-Santiago genereerden de schattingen van de overvloed aan doliolid in tabel 1. Deze studie werd deels gesteund door de US National Science Foundation Awards OCE 082599, 1031263 tot MEF, collaboratieve projecten OCE 1459293 en OCE 14595010 naar MEF en DMG en, de National Oceanic and atmosferische Administration Award....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Algal culture tubes (55 mL sterile disposable glass culture tubes) | Any | NA | Voor algencultures |
| Autoclaaf | Any | NA | Voor het steriliseren van apparatuur en zeewater voor algencultures |
| Bekers (2 L glazen) | Any | NA | Voor het sorteren van verdunde plankton net tow inhoud |
| Emmer (5 gallon, ~20L) | Any | NA | Voor het verdunnen van de inhoud van planton net tow - moet voor het eerste gebruik worden geconditioneerd met zeewater |
| Carboys (20 L) | Any | NA | Voor het bewaren van zeewater |
| Doliolid glas kweekpot (1,9 L glazen pot met smalle hals en dop) | Qorpak | GLC-01882 | Container voor kweek |
| Doliolid glas kweekpot (3,8 L glazen pot met smalle hals en dop) | Qorpak | GLC-01858 | Container voor kweek |
| Milieukamer (temperatuur gecontroleerde omgevingskamer) | Any | NA | Om plankton wiel en kweekonderhoud te accommoderen |
| Filtratie apparaat voor 47 mm filters | Any | NA | Voor het filteren van zeewater voor culturen |
| Glas microvezel filters, 47 mm | Whatman | 1825-047 | Voor het filteren van zeewater voor culturen |
| Glas pipette (borosilicaat glas pipette (glasbuis), OD 10mm, ID 8 mm, wanddikte 1mm) | Science Company | NC-10894 | Op maat gesneden en randen gepolijst |
| Slangklemmen, roestvrij staal, #104 (178 mm) | Any | NA | Om kweekpotten aan de plankton wiel vast te houden |
| Isochrysis galbana stam CCMP1323 | National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA) | stam CCMP1323 | Voor het voeren van doliolid culturen |
| L1 Media Kit, 50 L | National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA) | MKL150L | Voor het kweken van algen |
| Lamp (Fluorescent tafellamp met een verstelbare arm) | Any | NA | Voor het verlichten van doliolids in de potten en bekers |
| Verlichte temperatuur gecontroleerde incubator | Any | NA | Voor algencultures |
| Micropipetten en steriele tips (0-20 µl, 20-200 µl, 200-1000 µl) | Any | NA | Voor algencultures |
| Plankton Net (202 µm 0,5 m, 5:1 lengte) met cod end ring en 4 L aquarium cod-end | Sea-Gear Corporation | 90-50x5-200-4A/BB | Voor het verzamelen van levende doliolids (zie Figuur 4) |
| Plankton Wiel | NA | NA | Op maat gebouwd (zie Figuur 2) |
| Plasticfolie | Any | NA | Om de binnenkant van de deksel van doliolid kweekpotten te bedekken |
| Kaliumpermanganaat | Fisher Scientific | P279-500 | Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk |
| Rhodomonas sp. stam CCMP740 | National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA) | stam CCMP740 | Voor het voeren van doliolid culturen |
| Rubberslang | NA | NA | Voor het vasthouden van kweekpotten aan de plankton wiel (kan gemaakt worden van tygon slang) |
| Natriumbisulfiet | Fisher Scientific | S654-500 | Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk |
| Natriumhydroxide | Fisher Scientific | BP359-212 | Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk |
| Steriele serologische pipetten (1 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL) | Any | NA | Voor algencultures |
| Thalassiosira weissflogii stam CCMP1051 | National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA) | stam CCMP1051 | Voor het voeren van doliolid culturen |
| Weefselkweek flesjes (250 mL) | Any | NA | Voor algencultures |
Referenties
- Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
- Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northe....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
