Het onthullen van Hemolymph inzameling en inenting van anisopliae Blastospores in Rhipicephalus Microplus teken naar ongewervelde pathologie studies

Samenvatting

Analyse van Tick hemolymph vertegenwoordigt een belangrijke bron van informatie over hoe sommige ziekteverwekkers ziekte veroorzaken en hoe teken immunologisch reageren op deze infectie. De huidige studie toont aan hoe inoculeren schimmel propagulen en het verzamelen van hemolymph van Rhipicephalus Microplus engorged vrouwtjes.

Samenvatting

Teken zijn verplicht bloedzuigende ectoparasieten en Rhipicephalus Microplus heeft groot belang in de veterinaire geneeskunde, omdat het veroorzaakt bloedarmoede, gewichtsverlies, afschrijving van de dieren ' leer en kan ook fungeren als een vector van verschillende pathogenen. Wegens de exorbitante kosten om deze parasieten te controleren, schade aan het milieu dat door het ongepaste gebruik van chemische acariciden wordt veroorzaakt, en de verhoogde weerstand tegen traditionele parasieten bestrijdingsmiddelen uit, alternatieve controle van tikken, door het gebruik van entomopathogene schimmels, bijvoorbeeld, is beschouwd als een interessante aanpak. Niettemin, hebben weinig studies aangetoond hoe het immuunsysteem van de Tik handelt om deze entomopathogens te bestrijden. Daarom demonstreert dit protocol twee methodes die voor entomopathogen inenting in engorged wijfjes en twee technieken worden gebruikt die voor hemolymph inzameling en hemocytes het oogsten worden gebruikt. Inenting van ziekteverwekkers bij de been toevoeging in het lichaam van de Tik wijfje laat evaluatie van wijfjes biologische parameters in tegenstelling tot de inenting tussen Scutum en capitulum, die vaak Gené's orgaan beschadigen. Dorsale hemolymph collectie leverde een hoger volumeherstel dan de collectie door de benen. Enkele beperkingen van Tick hemolymph verzameling en verwerking omvatten i) hoge tarieven van hemocytes ' verstoring, II) hemolymph besmetting met verstoorde middendarm, en III) lage hemolymph volumeherstel. Wanneer hemolymph wordt verzameld door het been snijden, de hemolymph kost tijd om zich ophopen op het been opening, ten gunste van de stollingsproces. Bovendien worden in de collectie via het been minder hemocytes verkregen in vergelijking met de dorsale collectie, ook al wordt de eerste methode als gemakkelijker uitgevoerd. Inzicht in het immuunsysteem reactie in teken bemiddeld door entomopathogene agenten helpt om hun pathogenese onthullen en ontwikkelen van nieuwe doelen voor Tick Control. De hier beschreven inentings processen vereisen zeer lage technologische middelen en kunnen niet alleen worden gebruikt om teken aan pathogene micro-organismen bloot te stellen. Evenzo kan de collectie van Tick hemolymph vertegenwoordigen de eerste stap voor veel fysiologische studies.

Inleiding

Het vee Tick, Rhipicephalus Microplus, is een Hematophagus ectoparasite met een enorme negatieve invloed op de veestapel in tropische gebieden. Deze teek is de vector van pathogene agentia zoals Babesia bovis, Babesia Bigemina, en Anaplasma marginale dat, in combinatie met de directe hemofeeding schade, kan verminderen melk en vleesproductie, bloedarmoede veroorzaken en uiteindelijk de dood. De verliezen die door dit ectoparasite worden veroorzaakt werden geschat in 3.240.000.000 dollars jaarlijks in Brazilië¹. Er worden duurzame methoden geëist en het gebruik van entomopathogene middelen wordt beschouwd als ....

Protocol

Teken gebruikt in de huidige studie werden verkregen uit een kunstmatige kolonie, onderhouden aan de federale rurale Universiteit van Rio de Janeiro, welke methoden zijn goedgekeurd door de Commissie ethiek voor het gebruik van gewervelde dieren (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).

1. Tick engorged vrouwtjes

1. Na het tikken verzamelen, wassen engorged vrouwtjes met behulp van leidingwater en dompel ze in 0,5% (v/v) natrium hypochloriet oplossing voor 3 min in een 500 mL glas beker ontvanger, voor de cuticula hygiëne (Figuur 1), dan drogen alle vrouwen met steriele papieren handdoeken (figuur ....

Resultaten

Dit artikel benadert inenting en hemolymph inzamelings methodes die op tikken worden toegepast. Na de inenting tussen de been dij en het lichaam van de teken wijfje, wat vloeistof (hemolymph) kan tijdens het proces worden uitgescheiden; Nochtans, is het belangrijk om op te merken dat wanneer de inenting wordt gebeëindigd, geen vloeistof of weefsels in de naald uiteinde of bij de inentings plaats aanwezig waren, ervoor zorgend dat de schimmel opschorting volledig werd ingeënt. Toen het ine.......

Discussie

Inenting van ziekteverwekkers is nuttig wanneer de studie poogt de in vivo actie van micro-organismen in experimentele geleedpotige modellen te onderzoeken omdat het verzekert dat de ziekteverwekker binnen de gastheer is. De techniek kan ook worden toegepast op inoculeren moleculen zoals RNA interferentie (RNAi). De inenting tussen Scutum en capitulum wordt beschouwd als gemakkelijker uit te voeren maar vaak beschadigt Gené's orgaan, dat de eieren levensvatbaarheid^12,1.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Alkaline Hypochlorite-oplossing	Sigma-Aldrich	A1727
D-(+)-Glucose	Sigma-Aldrich	G8270-1KG
EDTA	Synth	2706
Fetaal bovien serum	Gibco	16000036
Flexibele rubber	BD
Giemsa-kleurstof	Sigma-Aldrich	48900-500ML-F
Glas capillair	CTechGlass	CT95-02
Insuline-sering (naald)	BD	SKU: 324910
KH2PO4	Vetec	60REAVET014512
Leibovitz's L-15 kweekmedium	Gibco	11415-064
Methanol	Sigma-Aldrich	34860-1L-R
Microscoopglazen	Kasvi	K5-7105
Microtubes	BRAND	Z336769-1PAK
Na2HPO4	Vetec	60REAVET014593
NaCl	Sigma-Aldrich	S7653-1KG
Neubauer-kamer	Kasvi	K5-0111
Penicilline	Gibco	15140163
Protease-remmercocktail	Sigma-Aldrich	P2714
Tween 80	Vetec	60REAVET003662