Orthotopic humane lever gemetastaseerde ukalfs melanoom xenotransplantaatmodellen is Muismodellen werden gemaakt met behulp van chirurgische orthotopic implantatie technieken met patiënt-afgeleide tumor Brok en naald injectietechnieken met gekweekte menselijke ukalfs melanoom cellijnen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Generatie van een lever Orthotopic humaan Ukalfs melanoom xenograft platform in Immunodeficiënte muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
In de afgelopen decennia, subcutaan geïmplanteerde patiënt-afgeleide xenotransplantaat tumoren of gekweekte menselijke cellijnen zijn steeds meer representatieve modellen te bestuderen van menselijke kankers in immunodeficiënte muizen dan de traditionele gevestigde menselijke cel lijnen in vitro. Onlangs, orthotopisch geïmplanteerd patiënt-afgeleide tumor xenotransplantaatmodellen is (PDX) modellen in muizen zijn ontwikkeld om beter te repliceren kenmerken van patiënt tumoren. Een lever orthotopic xenotransplantaatmodellen is muismodel wordt verwacht dat een nuttig kankeronderzoek platform, het verstrekken van inzichten in de tumor biologie en medicamenteuze therapie. Echter, lever orthotopic tumor implantatie is over het algemeen ingewikkeld. Hier beschrijven we onze protocollen voor de orthotopic implantatie van patiënten afgeleide lever-gemetastaseerde ukalfs melanoom tumoren. We gekweekte menselijke lever gemetastaseerde ukalfs melanoom cellijnen in immunodeficiënte muizen. De protocollen kunnen resulteren in consistent hoge technische succespercentages met behulp van ofwel een chirurgische orthotopic implantatie techniek met stukjes van patiënt afgeleide ukalfs melanoom tumor of een naald injectietechniek met gekweekte menselijke cellijn. We beschrijven ook protocollen voor CT-scanning om inwendige lever tumoren te detecteren en voor re-implantatie technieken met behulp van cryopreserved tumoren om re-engraftment te bereiken. Samen bieden deze protocollen een beter platform voor lever orthotopic tumor Muismodellen van lever gemetastaseerd ukalfs melanoom in translationeel onderzoek.
Inleiding
Ukalfs melanoom is de meest voorkomende intraoculaire maligne tumor onder volwassenen in de westerse wereld. Gedurende de afgelopen 50 jaar is de incidentie van ukalfs melanoom (5,1 gevallen per miljoen) in de Verenigde Staten1,2stabiel gebleven. Ukalfs melanoom ontstaat uit melanocyten in de Iris, Ciliaire lichaam, of choroïde, en het is een extreem dodelijke ziekte bij het ontwikkelen van metastasen. Het sterftecijfer van patiënten met uveale melanoom metastasen was 80% na 1 jaar en 92% na 2 jaar na de initiële diagnose van de uitzaaiingen. De tijd tussen de diagnose van metastasen en de dood is meestal kort....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Patiënten die deelnamen aan de studie dienen schriftelijke toestemming te geven voor het gebruik van afgedankte chirurgische monsters voor onderzoeksdoeleinden en genetische studies, volgens een goedgekeurd Protocol van een institutioneel herzienings Comité. Dit protocol werd uitgevoerd in strikte overeenstemming met de aanbevelingen in de gids voor de verzorging en het gebruik van laboratoriumdieren van de National Institutes of Health en goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (IACUC).
1. inzameling van vers van de patiënt afkomstige tumor weefsel
- Verkrijgen van patiënt afgeleide tumorw....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Chirurgische orthotopic implantatie met behulp van de lever Pocket methode kan menselijke lever metastatische ukalfs melanoom tumor in de lever van de muis met een hoog succespercentage van 80% binnen zes maanden transplantatie. De xenotransplantaatmodellen is tumor engrafts in de lever als een eenzame tumor zonder dochter knobbeltjes (Figuur 1 en Figuur 3a). De chirurgische orthotopic injectietechniek in de lever met behulp van .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De huidige orthotopic xenotransplantaatmodellen is modellen zijn arbeidsintensief, tijdrovend en duur om te creëren. Orthotopic tumor xenotransplantaatmodellen is Muismodellen voor leverkanker werden opgericht meer dan twee decennia geleden19,20,21. Deze techniek is echter ingewikkeld en vereist gebruik van speciale apparatuur, zoals een micro-naald houder en 6-0 tot 8-0 fijne hechtingen onder een microscoop. Tumor en normale le.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
We zijn M. Ohara, K. Saito en M. Terai dankbaar voor het reviseren van het manuscript. De auteurs erkennen kritische recensie voor redactionele en Engelse assistentie van dit manuscript door Dr. R. Sato bij Fox Chase Cancer Center. Het hierin beschreven werk werd ondersteund door het Bonnie Kroll Research Fund, het Mark Weinzierl Research Fund, het Eye melanoma Research Fund aan de Thomas Jefferson University, de Osaka Community Foundation en JSPS KAKENHI Grant nummer JP 18K15596 in Osaka City Universiteit. Studies in Dr. A. Aplin's laboratorium werden ondersteund door NIH Grant R01 GM067893. Dit project werd ook gefinancierd door een Decan's Transformative Science Aw....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Materialen, weefsels en dieren | |||
| Buprenorfine | |||
| CO2 tank | |||
| Cryomedium | |||
| Exitron nano 12000 (alkalische aardmetaal-gebaseerde nanodeeltjescontrastmiddel) | Miltenyl Biotec | 130-095-700 | |
| HBSS 1x, met calcium & magnesium | Corning | 21-020-CM | |
| Menselijk levermetastatisch uveaal melanoomcel lijn | |||
| Menselijk uveaal melanoomweefsel in de lever | Alle weefselbehandelingen moeten in een Bioveiligheidsniveau 2-kap worden uitgevoerd. Wees voorzichtig bij het werken met menselijk weefsel; gebruik altijd handschoenen en vermijd direct contact met de huid. Ga ervan uit dat patiënten mogelijk besmet zijn met HIV of andere zeer overdraagbare organismen. Verwerk geen monsters waarvan bekend is dat ze infecties dragen. | ||
| Jodium | |||
| Isofluraan | Purdue Products | 67618-150-17 | |
| Isopropanol | Fisher scientific | A416-1 | Vermijd direct contact met huid en oog en inademing van verdovingsmiddel. |
| Vloeibare stikstof | |||
| Matrigel HC | BD | 354248 | |
| NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) muizen | Jackson Lab | 5557 | 4 tot 8 weken oud |
| PBS 1x, zonder calcium en magnesium | Corning | 21-031-CM | |
| RPMI 1640 | Corning | 10-013-CV | |
| Sterile alcohol prep pad (70% isopropyl alcohol) | Nice-Pak products | B603 | |
| 4% paraformaldehyde fosfaatbufferoplossing | Wako | 163-20145 | |
| 70% Ethyl alcohol oplossing | Fisher Scientific | 04-355-122 | |
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
| Uitrustingen | |||
| Absorbeerbare hemostaat | Johnson and Johnson | 63713-0019-61 | |
| Autoclaaf | |||
| Lichaamsgewichtsmaat | |||
| Cautery | Bovie Medical | MC-23009 | |
| Celteller | |||
| Centrifuzer | |||
| Katoenen staafje | |||
| Cryo vriescontainer | NALGENE | 5100-0001 | |
| Cryobuis | SARSTEDT | 72.379 | |
| Gebogen schaar | World Precision Instruments | 503247 | |
| Gebogen ultrafijne pincet | World Precision Instruments | 501302 | |
| Stofvel | |||
| Vriezer | |||
| F/AIR Filter Canister | Harvard Apparatus | 600979 | |
| Verwarmingspad | |||
| Isofluraan verdamper | Artisan Scientific | 66317-1 | |
| Vloeibare stikstof | |||
| Vloeibare stikstofpot | Thermo Fisher Scientific | 2123 | |
| Micro-CT scan | Siemens | ||
| Naaldhouder | World Precision Instruments | 501246 | |
| Petrischalen | Fisher Scientific | FB0875713 | |
| Pipet | |||
| Sproeifles | |||
| Sterile kap | Bioveiligheidsniveau 2 kast | ||
| Steriele Nr.11 scalpel | AD Surgical | A300-11-0 | |
| Rechte pincet | World Precision Instruments | 14226 | |
| Chirurgisch doek | |||
| Staartvene beperker | Braintree Scientific | TV-150-STD | |
| Waterbad | |||
| 1 mL TB-spuit met 27 G naald | BD | 309623 | |
| 1,7 mL buis | Bioexpress | C-3260-1 | |
| 5-0 PDO Naald | AD Surgical | S-D518R13 | |
| 15 mL kegelbuizen | AZER SCIENTIFIC | ES-9152N | |
| 27 G naald | BD | 780301 | |
| 27 G naald | Hamilton | 7803-01 | |
| 50 mL kegelbuizen | AZER SCIENTIFIC | ES-9502N | |
| 50 µL micro spuit | BD | 80630 | |
| 50 µL micro spuit | Hamilton | 7655-01 | |
| 100 mL container | Fisher Scientific | 12594997 | |
| 200μL tip |
Referenties
- Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4 (3), 145-151 (2018).
- Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
