Hier gepresenteerd is een protocol voor het vaststellen van acute pontine infarct in een rat model via elektrische stimulatie met een enkele puls.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Hier gepresenteerd is een protocol voor het vaststellen van acute pontine infarct in een rat model via elektrische stimulatie met een enkele puls.
Pontine infarct is de meest voorkomende slag subtype in de achterste circulatie, terwijl er ontbreekt een knaagdier model nabootsen pontine infarct. Mits hier is een protocol voor het succesvol vaststellen van een rat model van acute pontine infarct. Ratten met een gewicht van ongeveer 250 g worden gebruikt, en een sonde met een geïsoleerde schede wordt geïnjecteerd in de pons met behulp van een stereotaxic apparaat. Een laesie wordt veroorzaakt door de elektrische stimulatie met een enkele puls. De Longa score, Berderson score, en balk balans test worden gebruikt om neurologische tekorten te beoordelen. Daarnaast wordt de kleefverwijdering somatosensorische test gebruikt om de sensorimotorische functie te bepalen, en de ledemaat plaatsing test wordt gebruikt om proprioceptie te evalueren. MRI-scans worden vervolgens gebruikt om het infarct in vivo te beoordelen, en TTC-kleuring wordt gebruikt om het infarct in vitro te bevestigen. Hier wordt een succesvol infarct geïdentificeerd dat zich in de anterolaterale basis van de rostralpons bevindt. Tot slot wordt een nieuwe methode beschreven om een acuut pontïneinfarct rat model vast te stellen.
Sinds de jaren 1980, de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAO) model geïnduceerd door siliconen filamenten is op grote schaal gebruikt in de fundamentele slag onderzoek1. Er zijn ook andere methoden gebruikt (d.w.z. het hechten van één tak van de MCA2 en fotochemisch geïnduceerde focale infarcten). Deze modellen zijn genoemd MCA-gebaseerde slagmodellen en hebben sterk bijgedragen aan onderzoeken van de pathofysiologische mechanismen die ten grondslag liggen aan beroerte en potentiële therapieën. Hoewel er beperkingen van deze experimentele modellen3,4, deze methoden zijn gebruikt veel laboratoria5,6. Op MCA gebaseerde slagmodellen vertegenwoordigen een beroerte in de voorste circulatie; echter, weinig rapporten hebben onderzocht modellen nabootsen beroerte in de achterste circulatie7.
Er zijn significante verschillen tussen de etiologie, mechanismen, klinische manifestatie en prognose tussen voorste en achterste circulatieslagen8. Daarom kunnen de resultaten die zijn afgeleid van voorste circulatieslagmodellen niet worden toegepast op een circulatieslag achteraf. Zo is het reperfusietijdvenster voor voorste circulatie uitgebreid tot 6 uur, met een klein deel van de studies die zich uitstrekken tot 24 uur op basis van beeldvormingsbevindingen9. Echter, het tijdvenster voor achterste circulatie kan langer zijn dan 24 uur, volgens eerdere rapporten10 en onze eigen klinische ervaringen. Dit langwerpige reperfusietijdvenster moet verder worden bestudeerd en bevestigd in experimentele modellen.
Wat de achterste circulatieslagen betreft, is het pontijninfarct het meest voorkomende subtype, goed voor 7% van alle ischemische beroertegevallen11,12. Volgens infarcttopografie, pontine infarcten zijn verdeeld in geïsoleerde en niet-geïsoleerde pontine infarcten13. Geïsoleerde pontijn infarcten zijn gecategoriseerd in drie soorten op basis van de onderliggende mechanismen: grote slagaderziekte (LAD), basilarslagader tak ziekte (BABD), en kleine slagaderziekte (SAD). Kennis van de mechanismen, manifestatie en prognose van pontine infarct is afgeleid van klinische onderzoeken van gevallen14. Echter, een knaagdier model nabootsen pontine infarct is minder onderzocht.
In eerdere studies, diffuse hersenstam tegmentum letsel waarbij de pons is onderzocht7. Een groep probeerde een pontine infarct model te creëren via ligatie van de basilaire slagader (BA)15. Een andere groep gebruikte een 10-0 nylon monofilament hechting om selectief te ligate vier punten van de proximale BA selectief16. Dit model bootst LAD na, maar de meeste pontine infarcten zijn het gevolg van BABD en SAD. Bovendien is selectieve ligatie van de BA een ingewikkelde operatie en heeft een hoog sterftecijfer.
Hier is een gedetailleerd protocol voor een gemakkelijk uit te voeren, gemakkelijk gereproduceerd, en succesvolle rat model van acute pontine infarct door elektrische stimulatie.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Het protocol werd beoordeeld en goedgekeurd door de Institution Animal Care and Use Committee van the Second Affiliated Hospital van guangzhou Medical University, een instelling geaccrediteerd door AAALACi. De ratten werden geleverd door het Animal Center van de Southern Medical University.
1.
2. Vaststelling van een infarct in de pons
3. Gedragstests
4. Infarct bevestiging door MRI
5. Infarct bevestiging door TTC kleuring
6. Statistieken
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Zes dieren werden onderworpen aan het hierboven beschreven operatieprotocol. De controlegroep zoals weergegeven in figuur 4 bestond uit zes ratten. De hersenplakjes in figuur 4 zijn afgeleid van één rat per groep.
Uit de MRI-scan bleek dat het infarct zich bevond in de basis van de pons(figuur 4A). Aangezien de sonde 2 mm aan de linkerkant van de middellijn werd geïnjecteerd, werd het infarct zijdelings g...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De huidige studie biedt een protocol voor het genereren van een acute pontine infarct rat model. Dit model kan worden gebruikt voor onderzoek naar prognose en revalidatie (inclusief chronische pijn na beroerte) bij patiënten met een pausstreekstreek.
Er zijn verschillende sterke punten van deze methode. Ten eerste biedt het een ratmodel van een acuut pontïneinfarct voor toekomstige studies. Zoals hierboven vermeld, pontine infarct is een veel voorkomende beroerte subtype dat minder aandacht he...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Geen belangenverstrengeling.
Deze studie werd financieel ondersteund door de National Science Foundation of China (81471181 en 81870933) aan Y. Jiang en de National Science Foundation of China (nr. 81601011), Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (nr. BK20160345) aan J. Zhu en door het Wetenschappelijk Programma van Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) aan Z. Qiu.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 4-0 sucture | Shanghai Jinzhong | Chirurgische instrumenten | |
| Plaster | Shanghai Jinzhong | Chirurgische instrumenten | |
| Dier anesthesie systeem | RWD | Draag een masker bij het gebruik van het systeem | |
| Botcement | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Genezen klem | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Algemene weefselschaar | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| IndoPhors | Guoyao van China | Sterilisatie | |
| Isofluraan | RWD | 217181101 | |
| Lesie-aanmaakapparaat | Shanghai Yuyan | Het maken van een lesie | |
| MRI-systeem | Bruker Biospin | Bevestiging van infarct in vivo | |
| Naaldhaak | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Penicilline | Guoyao van China | Infectinebestrijding | |
| Sondes | Anke | Enige modificatie nodig | |
| Q-tips | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Schaar voor snijden | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Stereotaxisch apparaat | RWD | ||
| Naainaald | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| Weefselhoudende pincetten | Shanghai Jinzhong | Chirurgisch instrument | |
| TTC | Sigma-Aldrich | BCBW5177 | Voor infarctbevestiging in vitro |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.