Een gedetailleerd experimenteel protocol wordt gepresenteerd in dit document voor de evaluatie van neurobehavioral toxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van een zebravis larven model, met inbegrip van het blootstellingsproces en tests voor neurobehavioral indicatoren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Neurobehavioral Effecten van milieuverontreinigende stoffen op zebravissenlarven bestuderen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De laatste jaren zijn steeds meer milieuverontreinigende stoffen neurotoxisch gebleken, vooral in de vroege ontwikkelingsstadia van organismen. Zebravislarven zijn een bijuitstek model voor de neurobehavioral studie van milieuverontreinigende stoffen. Hier wordt een gedetailleerd experimenteel protocol verstrekt voor de evaluatie van de neurotoxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van zebravissenlarven, waaronder het verzamelen van de embryo's, het blootstellingsproces, neurogedragsindicatoren, het testproces en data-analyse. Ook de cultuuromgeving, het blootstellingsproces en de experimentele omstandigheden worden besproken om het succes van de test te garanderen. Het protocol is gebruikt bij de ontwikkeling van psychopathische geneesmiddelen, onderzoek naar milieuneurotoxische verontreinigende stoffen, en kan worden geoptimaliseerd om overeenkomstige studies te maken of nuttig te zijn voor mechanistische studies. Het protocol toont een duidelijk operatieproces voor het bestuderen van neurogedragseffecten op zebravissenlarven en kan de effecten van verschillende neurotoxische stoffen of verontreinigende stoffen onthullen.
Inleiding
In de afgelopen jaren zijn steeds meer milieuverontreinigende stoffen neurotoxisch gebleken1,2,3,4. De beoordeling van neurotoxiciteit in vivo na blootstelling aan milieuverontreinigende stoffen is echter niet zo eenvoudig als die van hormoonontregeling of ontwikkelingstoxiciteit. Bovendien heeft vroegtijdige blootstelling aan verontreinigende stoffen, met name bij milieurelevante doses, steeds meer aandacht getrokken in toxiciteitsstudies5,6,7....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Het protocol is in overeenstemming met richtlijnen goedgekeurd door de Animal Ethics Committee van Tongji University.
1. Embryocollectie zebravissen
- Zet twee paar gezonde volwassen Tubingen zebravissen in de paaibox op de avond voor de blootstelling, het houden van de geslachtsverhouding op 1:1.
- Verwijder de volwassen vis terug naar het systeem 30-60 min na daglicht de volgende ochtend.
- Verwijder de embryo's uit de paaidoos.
- Spoel de embryo's af met systeemwater.
- Breng de embryo's over in een glazen petrischaal (9 cm diameter) met voldoende systeemwater.
- Observeer de embryo's onder....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Hier beschrijven we een protocol voor het bestuderen van de neurogedragseffecten van milieuverontreinigende stoffen met behulp van zebravissenlarven onder lichte stimuli. De bewegings-, padhoek- en sociale activiteitstests worden gedefinieerd in de inleiding. De opstelling van de microplaten in de bewegings- en padhoektests en de beelden van de software worden hieronder weergegeven. Daarnaast worden onze eigen onderzoeksresultaten gepresenteerd als voorbeelden. Twee studies presenteren de.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit werk biedt een gedetailleerd experimenteel protocol om de neurotoxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van zebravissenlarven te evalueren. Zebravissen gaan tijdens de blootstellingsperiode door het proces van embryo's tot larven, wat betekent dat goede verzorging van de embryo's en larven essentieel is. Alles wat de ontwikkeling van de embryo's en larven beïnvloedt, kan het eindresultaat beïnvloeden. Hier worden de cultuuromgeving, het blootstellingsproces en de experimentele omstandigheden besproken.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs zijn dankbaar voor de financiële steun van de National Natural Science Foundation of China (21876135 en 21876136), het National Major Science and Technology Project of China (2017ZX07502003-03, 2018ZX07701001-22), de Stichting van MOE-Shanghai Key Laboratory of Children's Environmental Health (CEH201807-5) en Swedish Research Council (nr. 639-2013-6913).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 48-well-microplate | Corning | 3548 | Embyros behuizing |
| 6-well-microplate | Corning | 3471 | Embyros behuizing |
| BDE-47 | AccuStandard | 5436-43-1 | Verontreiniging |
| DMSO | Sigma | 67-68-5 | Co-solvent |
| Microscope | Olympus | SZX 16 | Observatie-instrument |
| Pipette | Eppendorf | 3120000267 | Oplossing overbrengen |
| Zebrabox | Viewpoint | ZebraBox | Gedragsinstrument |
| Zebrafish | Shanghai FishBio Co., Ltd. | Tubingen | Zebrafish leverancier |
| ZebraLab | Viewpoint | ZebraLab | Gedragssoftware |
Referenties
- Sun, L., et al. Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes). Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).
- Tian, L., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
