Methodenartikel

Evaluatie van kleurverschil in placenta met dubbele anemie Polycytemie-sequentie

DOI:

10.3791/61312

⸱

17 juni 2020

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Reproductive Medicine, Affiliated Shenzhen Maternity and Child Healthcare Hospital, Southern Medical University, 2Division of Fetal Medicine, Department of Obstetrics, Leiden University Medical Center, 3Fetal Medicine Unit & Prenatal Diagnosis Center, Department of Obstetrics, Shanghai First Maternity and Infant Hospital, Tongji University School of Medicine, 4Division of Neonatology, Department of Pediatrics, Leiden University Medical Center

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bij monochoriale tweelingen met tweelinganemie polycythamiesequentie (TAPS) zijn de donortweeling en het bijbehorende placentaaandeel bleek, terwijl de ontvangende tweeling en het placentaaandeel een plethorisch aspect hebben. Hier wordt een protocol gepresenteerd om het kleurverschil aan de moederzijde van de TAPS-placenta na de geboorte te kwantificeren.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Polycytemiesequentie van tweelinganemie (TAPS) komt voor bij 5% van de monochorionische tweelingen en wordt gekenmerkt door grote verschillen tussen tweelingen in hemoglobine. De postnatale diagnostische criteria voor TAPS zijn gebaseerd op hematologische parameters en placentakenmerken. Placenta-onderzoek na de geboorte laat zien dat de kleur van de moederkant tussen de placentagebieden van de anemische en polycythemische tweelingen opmerkelijk verschillend is. Het kleurverschil in TAPS-placenta's is groter in vergelijking met monochorionische placenta's met acute peripartum foeto-foetale transfusie; dit wordt dus gebruikt als een aanvullend diagnostisch criterium voor TAPS. Software zoals ImageJ maakt het mogelijk om de kleurintensiteit in TAPS-placenta's op de computer te meten. Een gedetailleerde methode voor de berekening van kleurverschillen tussen anemische en polycythemische componenten van TAPS-placenta's is echter nog niet beschreven. Het hier gepresenteerde protocol biedt een stapsgewijze methode voor het analyseren van kleurverschillen aan de moederzijde van TAPS-placenta's met behulp van ImageJ-software.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TAPS is een chronische vorm van foeto-foetaal transfusiesyndroom en wordt gekenmerkt door een groot verschil in intertwinale hemoglobine (Hb) zonder tekenen van oligo-polyhydramniosequenties1. De belangrijkste pathogenese van TAPS houdt verband met de unieke placenta-angioarchitectuur, met slechts enkele minuscule anastomosen die chronische transfusie met lage snelheid mogelijk maken van de donor (anemische tweeling) naar ontvanger (polycythemische tweeling)2,3,4. Postnatale diagnose van TAPS is gebaseerd op hematologische testen die een groot verschil in Hb en een groot verschil in aantal reticulocyten aantonen en/of placenta-injectie met kleurstof die enkel minuscule anastomosen toont5. Het aantal reticulocyten wordt echter niet altijd gemeten bij de geboorte en placenta-injectie wordt in de meeste centra voor foetale geneeskunde niet routinematig uitgevoerd. Een aanvullend diagnostisch criterium kan nuttig zijn om gevallen te diagnosticeren zonder metingen van het aantal reticulocyten en zonder injectie van placentakleurstof. Een opvallend kleurverschil tussen de bleke huid van een donortweeling en de plethorische huid van de ontvangende tweeling is bij TAPS-tweelingen bij de geboorte consequent aanwezig. Een vergelijkbaar kleurverschil van de moederzijde tussen de placentagebieden van de anemische en polycythemische tweelingen wordt ook gedetecteerd bij grof onderzoek.

Onlangs is de hypothese geopperd dat dit kleurverschil in de placenta kan worden gebruikt als een eenvoudige en nauwkeurige methode om een TAPS-diagnose na de geboorte te bevestigen6. De kwantificering van kleurverschil in TAPS-placenta's is tijdbesparend in vergelijking met placenta-injectie. Bovendien is kwantificering van kleurverschil in TAPS-placenta's kosteneffectiever in vergelijking met het aantal reticulocyten. De materialen die bij deze methode worden gebruikt, zijn gemakkelijk verkrijgbaar in klinische omgevingen Daarom biedt deze methode eenvoudige en nauwkeurige criteria voor de diagnose van TAPS. Het protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor de kwantificering van kleurverschillen van de maternale kant van monochorionische placenta's met TAPS.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol is goedgekeurd door de Ethische Commissie van het Leids Universitair Medisch Centrum en postnataal onderzoek van menselijke monochoriale tweelingplacenta's maakt deel uit van de standaardzorg in het Leids Universitair Medisch Centrum. In het Leids Universitair Medisch Centrum wordt afgezien van het verkrijgen van toestemming voor postnataal onderzoek van menselijke monochoriale tweelingplacenta's.

1. Afname van de TAPS-placenta en bruto onderzoek

  1. Gebruik alle menselijke monochoriale tweelingplacenta's met TAPS die op elke zwangerschapsduur worden toegediend. Houd de menselijke monochorionische tweeling placenta zo intact mogelijk. Breng de monochoriale placenta zo voorzichtig mogelijk toe, als handmatige verwijdering nodig is.
    OPMERKING: Na de geboorte moeten verloskundigen of neonatologen de TAPS-placenta's overbrengen in een plastic doos en vervolgens naar het laboratorium.
  2. Wanneer de eerste baby wordt geboren, gebruikt u één klem om de navelstreng vast te klemmen om de geboortevolgorde als eerste te markeren. Wanneer de andere baby wordt afgeleverd, gebruikt u twee klemmen om de navelstreng vast te klemmen om de geboortevolgorde als tweede te markeren.
  3. Onderzoek de placenta macroscopisch, inclusief de intactheid van de placenta, soorten invoegingen van de navelstreng, het aantal navelstrengvaten en grof onderzoek van het scheidingsmembraan om de chorioniciteit te bevestigen. Verzamel het intertweelingmembraan voor pathologische diagnose van monochorioniciteit. De diameter van de TAPS-placenta's is afhankelijk van de zwangerschapsduur.
    OPMERKING: Het onderzoek moet binnen 1 week na de bevalling worden uitgevoerd om de vorming van adhesieve bloedstolsels aan de kant van de moeder te voorkomen.
  4. Bewaar de placenta gekoeld (1-4 °C) in een droge, plastic doos tot onderzoek, indien nodig.

2. Voorbereiding van de placenta maternale zijde

  1. Knip het vruchtwater langs de rand van de placenta af met een schaar. Let op de bloedvaten op het membraan en of het velamenteuze koord is ingebracht om te voorkomen dat er bloed uit de placentamassa stroomt.
    OPMERKING: Bij het inbrengen van de velamenteuze navelstreng bewegen bloedvaten uit de navelstreng over enige afstand naar het oppervlak van het vruchtwater voordat ze zich aan de placentamassa hechten. Als de "naakte" bloedvaten worden doorgesneden, kan het bloed van de placentamassa naar buiten stromen en er een puinhoop van maken.
  2. Verwijder bloedstolsels voorzichtig om schade aan de placentakwabben te voorkomen.
  3. Organiseer de placentakwabben aan de kant van de moeder om de opening tussen de lobben te elimineren. Placenta's hebben meestal ongeveer 15 lobben en kunnen aan de kant van de moeder worden geïdentificeerd.

3. Voorbereiding voor documentatie

  1. Plaats de placenta op een plastic paneel met de moederzijde naar boven.
  2. Stel de moederzijde van de placenta bloot aan licht (gelijkmatige verdeling met behulp van twee identieke lampen aan de linker- en rechterkant). Gebruik lampen die een functie hebben voor het aanpassen van de lichtintensiteit.
  3. Om reflectie te verminderen, maakt u digitale foto's met een camera (Materiaaltabel) bij milde lichtomstandigheden en vermijdt u directe blootstelling aan de lichtbron.
  4. Maak foto's loodrecht op de maternale zijde van de placenta.

4. Geautomatiseerde meting met behulp van ImageJ

  1. Open ImageJ op de computer door op het softwarepictogram te klikken.
  2. Klik op "Bestand" en vervolgens op "Openen" om de placentafoto te openen. Zodra de gewenste afbeelding is geopend, klikt u op "Afbeelding" | "Kleur" en vervolgens "Kanalentool" om de "Kleur" uit de vervolgkeuzelijst te kiezen.
    OPMERKING: De software kan automatisch de kleur van het gemeten object identificeren. De placenta is rood. In de software wordt na het klikken op "Kleur" de placentafoto automatisch omgezet in een rood spectrumkanaal.
  3. Klik op "Selecties uit de vrije hand" om respectievelijk het plethorische en bleke placenta-aandeel van de polycythemische en anemische tweelingen te contouren via visuele inspectie van de verschillende kleurintensiteit van de moederzijde van de placenta.
  4. Klik op "Analyseren" | "Histogram". Verkrijg het histogram van de kleurintensiteit na het selecteren van respectievelijk het plethorische gebied of het bleke gebied. De modus die in het intensiteitshistogram wordt weergegeven, vertegenwoordigt de kleur die het meest aanwezig is in het geselecteerde placentagebied.
  5. Bereken de kleurverschilverhouding door de kleurintensiteit van de bloedarme tweeling te delen door de kleurintensiteit van de polycythemische tweeling.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Placenta-onderzoek levert waardevolle informatie op voor de diagnose van TAPS. TAPS-placenta's worden gekenmerkt door de aanwezigheid van enkele kleine vasculaire anastomosen1 (Figuur 1, Figuur 2). Dit kenmerk van TAPS-placenta's is gerelateerd aan de pathogenese van TAPS en is een postnataal diagnostisch criterium. Net als de kleur van pasgeborenen bij de geboorte, is het placenta-aandeel van de ontvange...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De belangrijkste punten voor het bereiken van een optimaal onderzoek op basis van onze ervaring zijn onder meer: 1) toediening van de placenta zo voorzichtig mogelijk om schade te voorkomen, vooral wanneer handmatige verwijdering geïndiceerd is; 2) onderzoek van MC-placenta's kort na de geboorte om de vorming van adhesieve stolsels te voorkomen (bij voorkeur binnen een paar dagen); 3) zachte verwijdering van alle bloedstolsels, waardoor schade aan de placentakwabben wordt voorkomen; 4) b...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze studie werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (subsidienummer: 81801465), het Sanming Project of Medicine in Shenzhen (subsidienummer: SZSM201512012) en het National Key Research and Development Program of China (subsidienummer: 2018YFC1002900).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
20 ml spuitenBD Plastipak300613
KleurkleurstofRoyal Talens Schoolverf36716010 (blauw); 36715010 (groen); 36712350 (geel); 36713570 (roze)
Digitale cameraCanon Inc.ixus 125 hs
ImageJNational Institute of HealthVoor Windows ImageJ gebundeld met 64-bit Java 1.8.0_112
NavelsnaarkathetersVygon1270.08 (8 F)
1270.08 (5 F)
1270.04 (4 F)
1270.03 (3.5 F)
1270.02 (2.5 F)

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lopriore, E., et al. Twin anemia-polycythemia sequence in two monochorionic twin pairs without oligo-polyhydramnios sequence. Placenta. 28 (1), 47-51 (2007).
  2. Zhao, D., et al. Placental share and hemoglobin level in relation to birth weight in twin anemia-polycythemia sequence. Placenta. 35 (12), 1070-1074 (2014).
  3. Lopriore, E., et al. Assessment of feto-fetal transfusion flow through placental arterio-venous anastomoses in a unique case of twin-to-twin transfusion syndrome. Placenta. 28 (2-3), 209-211 (2007).
  4. Lopriore, E., et al. Quantification of feto-fetal transfusion rate through a single placental arterio-venous anastomosis in a monochorionic twin pregnancy. Placenta. 30 (3), 223-225 (2009).
  5. Tollenaar, L. S. A., et al. Improved prediction of twin anemia-polycythemia sequence by delta middle cerebral artery peak systolic velocity: new antenatal classification system. Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 53 (6), 788-793 (2019).
  6. Tollenaar, L. S., et al. Color Difference in Placentas with Twin Anemia-Polycythemia Sequence: An Additional Diagnostic Criterion. Fetal Diagnosis and Therapy. 40 (2), 123-127 (2016).
  7. Zhao, D. P., et al. Prevalence, size, number and localization of vascular anastomoses in monochorionic placentas. Placenta. 34 (7), 589-593 (2013).
  8. De Paepe, M. E., Burke, S., Luks, F. I., Pinar, H., Singer, D. B. Demonstration of placental vascular anatomy in monochorionic twin gestations. Pediatric and Developmental Pathology. 5 (1), 37-44 (2002).
  9. Lewi, L., et al. Placental sharing, birthweight discordance, and vascular anastomoses in monochorionic diamniotic twin placentas. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 197 (6), 581-588 (2007).
  10. Robertson, E. G., Neer, K. J. Placental injection studies in twin gestation. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 147 (2), 170-174 (1983).
  11. Lewi, L., et al. The outcome of monochorionic diamniotic twin gestations in the era of invasive fetal therapy: a prospective cohort study. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 199 (5), (2008).
  12. Slaghekke, F., et al. Fetoscopic laser coagulation of the vascular equator versus selective coagulation for twin-to-twin transfusion syndrome: an open-label randomised controlled trial. Lancet. 383 (9935), 2144-2151 (2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Kleuranalyse van de placentaImageJ softwaremeting van kleurverschilmoederzijde van de placentaTAPS diagnoseplacentaonderzoekcomputergestuurde metinganalyse van kleurintensiteitplacentagebieden
Video binnenkort beschikbaar

Gerelateerde artikelen