Method Article

Skelet fenotype analyse van een voorwaardelijke Stat3 verwijdering muismodel

DOI:

10.3791/61390

⸱

July 3rd, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center of Craniofacial Orthodontics, Department of Oral and Cranio-maxillofacial Science, Ninth People's Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai Key Laboratory of Stomatology & Shanghai Research Institute of Stomatology, National Clinical Research center of Stomatology, 2Department of Stomatology, Dalian Medical University, 3The 2nd Dental Center, Ninth People's Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai Key Laboratory of Stomatology & Shanghai Research Institute of Stomatology, National Clinical Research center of Stomatology

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol beschrijft een canonieke methode om de kritische genen te begrijpen die de osteoclastenactiviteit in vivo controleren. Deze methode maakt gebruik van een transgeen muismodel en enkele canonieke technieken om skeletfenotype te analyseren.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transgene muismodellen zijn krachtig voor het begrijpen van de kritische genen die osteoclastendifferentiatie en -activiteit beheersen, en voor het bestuderen van mechanismen en farmaceutische behandelingen van osteoporose. Cathepsine K (Ctsk)-Cre muizen zijn veel gebruikt voor functionele studies van osteoclasten. De signaaltransducer en activator van transcriptie 3 (STAT3) is relevant bij bothomeostase, maar de rol ervan bij osteoclasten in vivo blijft slecht gedefinieerd. Om het in vivo bewijs te leveren dat STAT3 deelneemt aan osteoclastendifferentiatie en botmetabolisme, hebben we een osteoclastenspecifiek Stat3-deletiemuismodel gegenereerd (Stat3 fl/fl ; Ctsk-Cre) en analyseerde zijn skeletfenotype. Micro-CT-scanning en 3D-reconstructie impliceerden een verhoogde botmassa bij de voorwaardelijke knock-outmuizen. H&E-kleuring, calceïne en alizarine rode dubbele kleuring en tartraatresistente zuurfosfatase (TRAP) kleuring werden uitgevoerd om het botmetabolisme te detecteren. Kortom, dit protocol beschrijft enkele canonieke methoden en technieken om skeletfenotype te analyseren en de kritische genen te bestuderen die de osteoclastenactiviteit in vivo controleren.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Skeletbot is het belangrijkste dragende orgaan van het menselijk lichaam en staat onder druk van zowel de interne als externe omgeving tijdens het lopen en sporten1. Gedurende iemands hele leven ondergaan botten voortdurend zelfvernieuwing, die wordt gecompenseerd door osteoblasten en osteoclasten. Het proces van osteoclasten die oude botten en osteoblasten die nieuw bot vormen, zuivert de homeostase en mechanische functie van het skeletsysteem2. Verstoring van het evenwicht kan botmetabole ziekten veroorzaken, zoals osteoporose. Osteoporose, die wordt veroorzaakt door overmatige osteoclastische activiteit, komt wereldwijd voor en veroorzaakt aanzienlijke economische verliezen voor de samenleving2,3,4. Volgens het beperkte aantal geneesmiddelen dat beschikbaar is voor osteoporosebehandeling en hun risico op bijwerkingen4, is het belangrijk om de details van osteoclastenvorming en -activiteit te onthullen.

Osteoclasten afgeleid van de monocyt/macrofaag hematopoietische afstamming hebben meerdere kernen (kunnen 2 tot 50 kernen hebben) en zijn groot (meestal groter dan 100 μm in diameter)2. Hoewel de exploratie van mechanismen en de screening van geneesmiddelen op osteoclastische aandoeningen sterk zijn verbeterd via in vitro osteoclastencultuur, maken de gecompliceerde organische reacties in vivo bewijs onmisbaar voor de gerichte therapie. Vanwege genetische en pathofysiologische overeenkomsten tussen muizen en mensen worden genetisch gemanipuleerde muismodellen vaak gebruikt voor het bestuderen van de mechanismen en de farmaceutische behandelingen van menselijke ziekten in vivo6. Het Cre-loxP-systeem is een veelgebruikte technologie voor het bewerken van muisgen en heeft onderzoekers in staat gesteld om genfuncties op een weefsel-/celspecifieke manier te onderzoeken5. Cathepsine K (CSTK) is een cysteïne protease uitgescheiden door osteoclasten die botcollageen kunnen afbreken8. Het is algemeen aanvaard dat CTSK selectief wordt uitgedrukt in volwassen osteoclasten; daarom worden Ctsk-Cre muizen beschouwd als een nuttig hulpmiddel voor functionele studies van osteoclasten en is gebruikt6.

De signaaltransducer en activator van transcriptie (STAT) familie is klassiek en zeer significant in immuniteit en kankerprogressie en ontwikkeling7,8. Van de zeven STATs is STAT3 naar verluidt het meest relevant voor bothomeostase9,10. Verschillende in vivo studies hebben gemeld dat specifieke inactivatie van STAT3 in osteoblasten de botvorming vermindert9,10. Niettemin is solide bewijs met betrekking tot de deelname van STAT3 aan osteoclastenvorming en botmetabolisme in vivo nog steeds beperkt. Onlangs hebben we in vivo bewijs geleverd met een osteoclastenspecifiek Stat3-deletiemuismodel (Stat3fl/fl; Ctsk-Cre, hierna Stat3Ctskgenoemd) dat STAT3 deelneemt aan osteoclastendifferentiatie en botmetabolisme11. In deze studie beschrijven we de methoden en protocollen die we gebruikten om de veranderingen in botmassa, bot histomorfologie en bot anabolisme en katabolisme van de Stat3Ctsk muizen te analyseren om de invloed van osteoclasten-specifieke STAT3 deletie op bothomeostase te bestuderen.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle methoden met betrekking tot de hier beschreven dieren zijn goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Shanghai Jiaotong University School of Medicine.

1. Fokken van osteoclasten specifieke Stat3 deletie muizen

OPMERKING: Stat3fl/fl muizen werden commercieel verkregen. Ctsk-Cre muizen werden geleverd door S. Kato (Universiteit van Tokio, Tokio, Japan12). De muizen werden gefokt en onderhouden onder specifieke ziekteverwekkervrije (SPF) omstandigheden in de institutionele dierenfaciliteit onder gestandaardiseerde omstandigheden.

  1. Koppel een geslachtsrijpe mannelijke muis met twee vrouwelijke muizen van dezelfde leeftijd. Controleer na 18 dagen de dagelijkse controles op pasgeborenen. Scheid de zwangere vrouwelijke muizen en houd deze indien nodig alleen. Verander mannelijke muizen tussen verschillende fokkooien als de vrouwelijke muizen niet zwanger waren binnen 1 maand na de koppeling.
  2. Kruis Stat3fl/fl muizen naar Ctsk-Cre muizen (F0). Knip de staarten voor genotypering en houd de mannelijke Stat3fl/+; Ctsk-Cre muizen tot ze geslachtsrijp zijn, wat ongeveer 6 weken oud is (F1). Gebruik de volgende primers: Stat3 F-TTGACCTGTGCTCCTACAAAAA; Stat3 R-CCCTAGATTAGGCCAGCACA; Ctsk-cre F-GAACGCACTGATTTCGACCA; Ctsk-cre R-GCTAACCAGCGTTTTCGTTC.
  3. Cross 6 weken oude man Stat3fl/+; Ctsk-Cre muizen met vrouwelijke Stat3fl/fl muizen. Knip de staarten voor genotypering en houd de mannelijke Stat3 fl/fl; Ctsk-Cre muizen tot ze geslachtsrijp zijn, wat ongeveer 6 weken oud is (F2).
  4. Cross 6 weken oude man Stat3 fl/fl; Ctsk-Cre muizen met vrouwelijke Stat3fl/fl muizen (F3). Knip de staarten voor genotypering en vervang de oude fokmuizen op tijd door jongere muizen (F3+N).

2. Specimen collectie

  1. Euthanaseer zes paren van 8 weken oude mannelijke Stat3fl/fl en Stat3Ctsk littermate muizen afzonderlijk met koolstofdioxide verstikking.
    OPMERKING: Het CO2-debiet verplaatst 30% van het kooivolume per minuut (bijv. voor een kooi van 45 cm x 30 cm x 30 cm is het CO2-debiet 40 L/min).
  2. Plaats de muizen in een liggende positie. Ontwricht de bilaterale heupgewrichten voorzichtig met de hand. Gebruik een oogheelkundige schaar om de huid verticaal af te snijden van het distale scheenbeen en ontleed vervolgens de hele huid van de achterste ledemaat.
  3. Snijd het gewrichtsbandje van het rechter heupgewricht en het kniegewricht af met een schaar om de achterpoot te scheiden. Snijd de trochanter en de verbinding van het kuitbeen door en dompel de achterste ledemaat onder in 4% paraformaldehyde. Houd de rechter achterpoten voor stap 3. Snijd het bot aan beide uiteinden op de juiste manier om het beenmerg volledig onder te dompelen en te fixeren met 4% paraformaldehyde.
  4. Knip het gewrichtsbandje van het linker heupgewricht en kniegewricht met een schaar, verwijder voorzichtig het zachte weefsel en scheid voorzichtig het scheenbeen en dijbeen. Dompel het scheenbeen en dijbeen apart onder in 75% ethanol. Houd de femora voor stap 4 en tibiae voor stap 6. Zorg ervoor dat de trochanter intact blijft.

3. Paraffine sectie voorbereiding

  1. Bevestig de rechter achterpoot in 4% paraformaldehyde bij 4 °C gedurende 48 uur.
  2. Ontkalken: Was de monsters voorzichtig 3 keer met 1x PBS gedurende 10 min. Ontkalk de monsters in 15% EDTA (150 g EDTA in 800 ml ddH2O en 100 ml 10x PBS) met een ultrasone ontkalker gedurende 3 tot 4 weken totdat de botten kunnen worden gebogen. Om de dag vervangen door verse ontkalkingsvloeistof.
  3. Was de monsters voorzichtig 3x met 1x PBS en dompel ze vervolgens 's nachts onder in 75% ethanol bij 4 °C.
  4. Dehydrateren: Dompel op de tweede dag monsters achtereenvolgens onder in 95% ethanol, 100% ethanol en xyleen, elk gedurende 1 uur tweemaal.
  5. Dompel de specimens gedurende 30 minuten onder in 1/2 xyleen 1/2 paraffine. Dompel de specimens 's nachts onder in paraffine bij 65 °C.
  6. Insluiten: Selecteer een geschikte insluittank voor insluiten. Plaats het scheenbeen gelijkmatig eronder. Plaats het dijbeen en scheenbeen onder een hoek van 90°. Nadat de paraffine volledig is afgekoeld en gestold, verwijdert u deze uit de insluittank. Nummer de specimens en bewaar ze 's nachts bij -20 °C.
  7. Snijd continu 5 μm dikke secties met behulp van de microtome. Snijd 20-40 secties. Verdeel de secties over 37 °C water, plak ze aan microscoopglaasjes en bak 's nachts op 42 °C.

4. Micro-CT scannen en analyseren

  1. Scan de linker femora met een micro-CT scanner. Resolutie: 10 μm; Spanning: 70 kV; Stroom: 114 μA; Fliter: 0,5 mm Al; Rotatiestap: 0,5°.
  2. Reconstrueer 3D-beelden van het corticale bot en trabeculair bot met behulp van de ondersteunende software van de scanner volgens de instructies van de fabrikant. ROI's bevinden zich in een totale breedte van 1 mm trabeculair bot dicht bij de distale groeiplaat en in een totaal 1 mm breed deel van corticale bot in het midden van de femora.
  3. Bereken de kwantitatieve microarchitectuurparameters: botmineraaldichtheid (BMD), botvolumefractie (BV/TV), trabeculaire dikte (Tb.Th.), trabeculair getal (Tb.N.), trabeculaire scheiding (Tb.Sp.) en corticale botdikte (Ct.Th.).

5. TRAP kleuring

  1. Bak de paraffinedelen 30 minuten op 65 °C.
  2. Dewax: Dompel de secties 10 minuten onder in xyleen. Voer deze stap 3x uit met verse xyleen.
  3. Rehydrateren: Dompel de secties opeenvolgend onder in 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol en ddH2O, elk gedurende 5 minuten tweemaal.
  4. Bereid de kleuroplossing met behulp van de TRAP-kleurset volgens de instructies van de fabrikant en verwarm tot 37 °C.
    OPMERKING: TRAP-kleuroplossing moet onmiddellijk voor elke test vers worden bereid.
  5. Voeg 50-100 μL kleuroplossing toe aan elk monster en incubeer gedurende 20-30 minuten in een vochtige kamer van 37 °C. Controleer elke 5 minuten de kleuringsstatus van de osteoclasten onder een lichtmicroscoop totdat rode multinucleated osteoclasten te zien zijn. Beëindig de reactie met ddH2O.
  6. Counterstain in hematoxyline oplossing gedurende 30 s. Creëer een stabiele blauwe kleur door onderdompeling in 1% ammoniakoplossing gedurende 1 min. Spoel langzaam stromend leidingwater af.
  7. Monteer de secties met afdeklips met neutrale balsem en droog 's nachts.
  8. Leg 3-5 interessegebieden vast met een microscoop. Analyseer de trabeculaire omtrek met afbeelding J: meet de lengte van de schaalbalk (Ls) met behulp van het gereedschap 'rechte lijn' als L1 en meet vervolgens de lengte van de trabeculaire omtrek met behulp van het gereedschap 'gesegmenteerde lijn' als L2, de fysieke lengte (Lp)= Ls *L2 /L1). Tel het aantal TRAP-positieve cellen met meer dan drie kernen.

6. Calcein en alizarin rode dubbele etikettering

  1. Monsterpreparaat: Intraperitoneaal injecteren 20 mg/kg calceïne (1 mg/ml in 2% NaHCO3-oplossing) op dag 0 en 25 mg/kg alizarinerood S (AL, 2 mg/ml in H2O) op dag 4. Offer muizen op dag 7. Ontkoppel het scheenbeen voorzichtig en fixeer 4% paraformaldehyde bij 4 °C gedurende 48 uur.
  2. Uitdrogen: Was na fixatie het scheenbeen voorzichtig 3x met 1x PBS. Dompel de monsters achtereenvolgens onder in 95% ethanol, 100% ethanol en xyleen gedurende 5 minuten tweemaal afzonderlijk.
  3. Dompel de specimens gedurende 12 uur onder in aceton, in 1/2 aceton 1/2 hars gedurende 2 uur en 's nachts in zuivere hars in een droogoven.
    OPMERKING: De hars is bereid met in de handel verkrijgde hars (bijv. Embed 812 Resin) volgens de instructies van de fabrikant.
  4. Insluiten: Voeg zuivere hars toe aan een geschikte silicagel insluittank en plaats de monsters voorzichtig om bellen te voorkomen. Polymeriseer de hars in een droogoven bij 60 °C gedurende 48 uur.
  5. Snijd de monsters continu in 5 μm dikke secties met een roterende microtome. Bewaar de rest van de monsters met droogmiddel bij kamertemperatuur.
  6. Plak de secties met een pincet in een druppel van 75% alcohol. Monteer de secties met afdeklips met neutrale balsem. Leg rode en groene fluorescentielabels vast met een fluorescentiemicroscoop.
  7. Meet de breedte tussen twee labellijnen (Ir.L.Wi), enkel gelabelde trabeculaire omtrek (sL.Pm), dubbel gelabelde trabeculaire omtrek (dL.Pm) en totale trabeculaire omtrek (Tb.Pm). Bereken de minerale appositiesnelheid (MAR) en botvormingssnelheid (BFR/BS). MAR = Ir.L.Wi/intervaldagen. BFR/BS= (dL.Pm±sL.Pm/2)*MAR/Tb.Pm*100 %.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Met behulp van dit protocol werden osteoclastenspecifieke Stat3-deletiemuizen gegenereerd om de invloed van STAT3-deletie op osteoclastendifferentiatie te bestuderen. Stat3Ctsk muizen en hun wildtype (WT) nestgenoten werden gefokt en gehouden na genotypering. Beenmergmafagen werden geïsoleerd en gekweekt tot osteoclasten, en STAT3-deletie bij Stat3Ctsk-muizen werd aangetoond (figuur 1).

Femora-rec...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genetisch gemanipuleerde muismodellen worden vaak gebruikt voor het bestuderen van het mechanisme en de farmaceutische behandeling van menselijke ziekten13. Ctsk-Cre muizen zijn veel gebruikt voor functionele studies van osteoclasten6. De huidige studie beschreef de protocollen van de methoden om skeletfenotype te analyseren en de kritische genen te bestuderen die de osteoclastische activiteit in vivo controleren.

Histologische analyse i...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets bekend te maken.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wij danken prof. Weiguo Zou en S. Kato voor reagentia en muizen en de leden van het Zou laboratorium voor nuttige discussies. We danken ook het Laboratorium voor Gedigitaliseerde Stomatologie en Onderzoekscentrum voor Craniofaciale Anomalieën van het Shanghai Ninth People's Hospital voor hulp. Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (NSFC) [81570950,81870740,81800949], Shanghai Summit & Plateau Disciplines, het SHIPM-mu fonds van het Shanghai Institute of Precision Medicine, Shanghai Ninth People's Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine [JC201809], het Incentive Project of High-Level Innovation Team for Shanghai Jiao Tong , het cross-disciplinaire onderzoeksfonds van het Shanghai Ninth People's Hospital, Shanghai JiaoTong university School of Medicine [JYJC201902]. En L.J. is een geleerde van de Outstanding Youth Medical Talents, Shanghai "Rising Stars of Medical Talent" Youth Development Program en het "Chen Xing" project van shanghai Jiaotong University.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

```html

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
4% Paraformaldehyde oplossingSangon biotech Co., Ltd.E672002
AcetonShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.80000360
AlizarineSigma-AldrichA5533
Ammoniak oplossingShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.
CalceinSigma-AldrichC0875
Ctsk-Cre muizeneen geschenk van S. Kato, Universiteit van Tokyo, Tokyo, Japan
DDSAElectron Microscopy Sciences13710
DeCa RapidlyDecalcifierPro-CureDX1100
DMP-30Electron Microscopy Sciences13600
EDTAShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.60-00-4
EMBED 812 RESINElectron Microscopy Sciences14900
fluorescentiemicroscoopOlympusIX73
Hematoxyline oplossingBeyotime BiotechanologyC0107
Micro-CTScanco Medical AGμCT 80
NaHCO3Shanghai Experimental Reagent Co., Ltd.10018918
Neutrale balsemSangon biotech Co., Ltd.E675007
NMAElectron Microscopy Sciences19000
ParaffineSangon biotech Co., Ltd.A601889
roterende microtoomLeicaRM2265
Stat3fl/fl muizenGemPharmatech Co., LtdD000527
TRAP kleuringskitSigma-Aldrich387A
XYleenShanghai Experimental Reagent Co., Ltd.1330-20-7
```

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zaidi, M. Skeletal remodeling in health and disease. Nature Medicine. 13 (7), 791-801 (2007).
  2. Boyle, W. J., Simonet, W. S., Lacey, D. L. Osteoclast differentiation and activation. Nature. 423 (6937), 337-342 (2003).
  3. Cummings, S. R., Melton, L. J. Epidemiology and outcomes of osteoporotic fractures. Lancet. 359 (9319), 1761-1767 (2002).
  4. Black, D. M., Rosen, C. J. Clinical Practice. Postmenopausal Osteoporosis. New England Journal of Medicine. 374 (3), 254-262 (2016).
  5. Kos, C. H. Cre/loxP system for generating tissue-specific knockout mouse models. Nutrition reviews. 62 (6), Pt 1 243-246 (2004).
  6. Elefteriou, F., Yang, X. Genetic mouse models for bone studies-Strengths and limitations. Bone. 49 (6), 1242-1254 (2011).
  7. Hirano, T., Ishihara, K., Hibi, M. Roles of STAT3 in mediating the cell growth, differentiation and survival signals relayed through the IL-6 family of cytokine receptors. Oncogene. 19 (21), 2548-2556 (2000).
  8. Yu, H., Lee, H., Herrmann, A., Buettner, R., Jove, R. Revisiting STAT3 signalling in cancer: new and unexpected biological functions. Nature Reviews Cancer. 14 (11), 736-746 (2014).
  9. Itoh, S., et al. A critical role for interleukin-6 family-mediated Stat3 activation in osteoblast differentiation and bone formation. Bone. 39 (3), 505-512 (2006).
  10. Zhou, H., et al. Osteoblast/osteocyte-specific inactivation of Stat3 decreases load-driven bone formation and accumulates reactive oxygen species. Bone. 49 (3), 404-411 (2011).
  11. Yang, Y., et al. STAT3 controls osteoclast differentiation and bone homeostasis by regulating NFATc1 transcription. Journal of Biological Chemistry. 294 (42), 15395-15407 (2019).
  12. Nakamura, T., et al. Estrogen prevents bone loss via estrogen receptor alpha and induction of Fas ligand in osteoclasts. Cell. 130 (5), 811-823 (2007).
  13. Kim, H., Kim, M., Im, S. K., Fang, S. Mouse Cre-LoxP system: general principles to determine tissue-specific roles of target genes. Laboratory animal research. 34 (4), 147-159 (2018).
  14. Minkin, C. Bone acid phosphatase: tartrate-resistant acid phosphatase as a marker of osteoclast function. Calcified Tissue International. 34 (3), 285-290 (1982).
  15. Vaaraniemi, J., et al. Intracellular machinery for matrix degradation in bone-resorbing osteoclasts. Journal of Bone and Mineral Research. 19 (9), 1432-1440 (2004).
  16. Ljusberg, J., et al. Proteolytic excision of a repressive loop domain in tartrate-resistant acid phosphatase by cathepsin K in osteoclasts. The Journal of Biological Chemistry. 280 (31), 28370-28381 (2005).
  17. Janckila, A. J., Takahashi, K., Sun, S. Z., Yam, L. T. Naphthol-ASBI phosphate as a preferred substrate for tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b. Journal of Bone and Mineral Research. 16 (4), 788-793 (2001).
  18. Janckila, A. J., Li, C. Y., Lam, K. W., Yam, L. T. The cytochemistry of tartrate-resistant acid phosphatase. Technical considerations. American Journal of Clinical Pathology. 70 (1), 45-55 (1978).
  19. Janckila, A. J., Simons, R. M., Yam, L. T. Alternative immunoassay for tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b using the fluorogenic substrate naphthol ASBI-phosphate and heparin. Clinica Chimica Acta: International Journal of Clinical Chemistry. 347 (1-2), 157-167 (2004).
  20. Janckila, A. J., Yam, L. T., Li, C. Y. Immunoalkaline phosphatase cytochemistry. Technical considerations of endogenous phosphatase activity. American Journal of Clinical Pathology. 84 (4), 476-480 (1985).
  21. Solberg, L. B., et al. Increased tartrate-resistant Acid phosphatase expression in osteoblasts and osteocytes in experimental osteoporosis in rats. Calcified Tissue International. 94 (5), 510-521 (2014).
  22. Tambutté, E., et al. Calcein labelling and electrophysiology: insights on coral tissue permeability and calcification. Proceedings. Biological Sciences. 279 (1726), 19-27 (2012).
  23. Han, Y., et al. Lkb1 deletion in periosteal mesenchymal progenitors induces osteogenic tumors through mTORC1 activation. Journal of Clinical Investigation. 130 (5), 1895-1909 (2019).
  24. Dai, Q., et al. mTOR/Raptor signaling is critical for skeletogenesis in mice through the regulation of Runx2 expression. Cell Death and Differentiation. 24 (11), 1886-1899 (2017).
  25. Sun, J., et al. Histone demethylase LSD1 regulates bone mass by controlling WNT7B and BMP2 signaling in osteoblasts. Bone Research. 6, 14(2018).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Stat3 Deletion Mouse ModelOsteoclast DifferentiationSkeletal Phenotype AnalysisMicro CT ScanningTRAP StainingCalcein Alizarin Red LabelingH and E StainingParaffin SectioningBone Mass MeasurementOsteoclastogenic Activity

Related Articles