Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Een ex vivo mestceldegranulatietest met behulp van ruwe peritoneale exsudaatcellen en natuurlijke antigeenstimulatie

2.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/61556

⸱

27 april 2021

 ,  , 
1College of Pharmacy, Chungnam National University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

We hebben een ex vivo mestceldegranulatietest opgesteld die wordt uitgevoerd door ruwe peritoneale exsudaatcellen geïsoleerd uit de muizen te incuberen, behandeld met een farmacologisch middel van belang en vooraf anti-dinitrofenol (DNP) IgE toegediend, met DNP op een dragereiwit.

Samenvatting

Mestcelstabilisatoren zijn een essentieel onderdeel van allergiemedicatie. Passieve systemische anafylaxie (PSA) is een diertest die veel wordt gebruikt voor het onderzoeken van het effect van een farmacologisch middel dat van belang is op mestcellen in vivo. Aangezien de anafylactische symptomen voornamelijk worden toegeschreven aan exocytose van de korrels uit mestcellen, wordt aangenomen dat het middel om de symptomen te verbeteren een mestcelstabiliserende activiteit heeft. Ondanks het feit is het verstandig om de activiteit te bevestigen door de afname van de functionele activiteit van mestcellen na de behandeling direct aan te tonen. Daartoe worden routinematig in-vitrodegranulatietesten gebruikt met behulp van een onsterfelijke mestcellijn of gekweekte primaire mestcellen. De resultaten van de in vitro en in vivo testen zijn niet altijd verwant aan elkaar; aangezien de behandelingsomstandigheden (bijv. behandelingsdosis, tijd, omgeving) voor de in-vitro-assays echter vaak verschillen van die voor de in-vivo-assay, zoals PSA. Met het oog op een in vitro (of ex vivo) test om het effect van een farmacologisch middel op mestcellen in vivo beter weer te geven, bedachten we de ex vivo mestceldegranulatietest waarbij ruwe peritoneale exsudaatcellen (PEC's) geïsoleerd uit de muizen, behandeld met het middel en toegediend anti-dinitrofenol (DNP) IgE, rechtstreeks werden geïncubeerd met DNP op een dragereiwit. Het bleek dat de test niet alleen nuttig was bij het valideren van de mestcelstabiliserende activiteit van een farmacologisch middel dat door de in vivo test werd aangegeven, maar ook praktisch en zeer reproduceerbaar.

Inleiding

Mestcellen spelen een centrale rol bij allergie 1,2. Wanneer IgE op het oppervlak van mestcellen via interactie met de hoge-affiniteitsreceptor voor IgE (FcεRI) een verwant allergeen tegenkomt, wordt een signaalcascade uitgelokt om de afgifte van de korrels te stimuleren. Als gevolg hiervan komt een verscheidenheid aan allergie-effectormoleculen, waaronder monoaminen (bijv. histamine, serotonine), cytokinen (bijv. TNF-α) en proteolytische enzymen (bijv. tryptase, chymase), vrij om een reeks immunologische, neurologische en vasomusculaire reacties te veroorzaken 3,4.

Een klasse van geneesmiddelen wordt mestcelstabilisator genoemd die de allergiesymptomen verlicht door de mestcelfunctie te verzwakken5. Passieve systemische anafylaxie (PSA) is een diermodel dat vaak wordt gebruikt voor het onderzoeken van een mestcelstabiliserende activiteit van farmacologische middelen. Aangezien de anafylactische symptomen voornamelijk het gevolg zijn van de activering van mestcellen na interactie van passief overgedragen hapteenspecifiek IgE met het hapteen op een dragereiwit dat later in het dier wordt geïnjecteerd, wordt goed ontvangen dat een farmacologisch middel van belang een mestcelstabiliserende activiteit heeft wanneer de behandeling ervan resulteert in verbetering van de symptomen6. Toch is het vaak noodzakelijk om in een afzonderlijk experiment direct een aantasting van de mestcelfunctie door het agens aan te tonen om de mogelijkheid uit te sluiten dat verbetering van de symptomen het gevolg is van een ander mechanisme dan onderdrukking van de mestcelfunctie.

Mestceldegranulatietest, die wordt uitgevoerd door mestcellen te stimuleren met een chemisch reagens of een specifiek antigeen van IgE dat een complex vormt met FcεRI op het oppervlak van mestcellen om exocytose van secretoire korrels te induceren (d.w.z. degranulatie), wordt over het algemeen gebruikt voor het bepalen van een mestcelstabiliserende activiteit van een farmacologisch reagens in vitro7. In die test worden verschillende soorten cellen gebruikt, waaronder de basofiele leukemie (RBL) cellijn8 van de rat, van beenmerg afgeleide mestcellen (BMMC)9 en van peritoneale cellen afgeleide mestcellen (PCMC)10. Hoewel nuttig omdat een groot aantal cellen gemakkelijk kan worden verkregen, is RBL een onsterfelijke kankercellijn waarvan de cellulaire eigenschappen niet langer verwant zijn aan die van mestcellen in het lichaam. Het verkrijgen van een voldoende aantal BMMC of PCMC, ook al lijken hun cellulaire eigenschappen meer op die van mestcellen in het lichaam, is vaak kostbaar en tijdrovend.

Een degranulatietest met gezuiverde primaire mestcellen is een wenselijk alternatief11. Desalniettemin is het gebruik van een dergelijke test niet wijdverbreid als een gemakkelijke methode voor het zuiveren van mestcellen uit dierlijk weefsel, met name uit muizenweefsel, met een hoge opbrengst, en zuiverheid is nog niet beschikbaar. Aangezien de concentratie en de duur van de behandeling met een farmacologisch middel om de mestcelfunctie in vitro te remmen niet altijd samenvallen met die in vivo, kunnen de resultaten die worden verkregen met een in-vitrodegranulatietest bovendien een verkeerde voorstelling geven van die van een in-vivotest zoals PSA, en vice versa. Daarom is er veel vraag naar een nieuwe degranulatietest, die niet alleen de manier waarop mestcelactivering in vivo plaatsvindt nauwkeurig nabootst, maar ook de effecten van een farmacologisch reagens dat in vivo op mestcellen wordt uitgeoefend, nauwkeurig weergeeft. Om aan die behoeften te voldoen, hebben we een ex vivo mestceldegranulatietest ontwikkeld waarbij mestcellen in peritoneale exsudaatcellen (PEC's) geïsoleerd uit de muizen, behandeld met een interessant farmacologisch middel en vooraf IgE specifiek voor dinitrofenol (DNP) toegediend, worden gestimuleerd met DNP-geconjugeerd runderserumalbumine (BSA).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierproeven zijn uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijn van de IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) van de Chungnam National University (Animal Protocol Number: CNU-00996).

1. Kwantificering van mestcelspecifieke moleculen in het lysaat van ruwe PEC's

  1. Isoleer de cellen uit de buikholte van de muis12.
    1. Verdoof een muis (8 weken oud, mannetje, BALB/C) met isofluraan. Euthanaseren via cervicale dislocatie.
    2. Plaats de muis op een schuimblok. Veeg de buik af met 70% ethanol.
    3. Knip de ventrale huid in de lengterichting af met een schaar met stompe randen. Verwijder de huid van de muis met een tang en een schaar.
    4. Injecteer 6 ml ijskoude Tyrode's B buffer13 in de peritoneale holte met behulp van een spuit van 10 ml met een naald van 26 G. Steek de naald voorzichtig in om te voorkomen dat u in organen prikt.
    5. Masseer de buik van de muis gedurende 60-90 s om peritoneale cellen te verzamelen in de B-buffer van Tyrode. Doe het voorzichtig om de bloedvaten niet te beschadigen.
    6. Steek de naald (20 G) die is bevestigd in een schuine afschuining van een spuit van 10 ml. Zuig de vloeistof langzaam op uit de peritoneale holte (meestal 5-6 ml).
    7. Haal de naald uit de spuit. Doseer de peritoneale vloeistof in een conische buis van 50 ml. Houd de tube op ijs.
    8. Herhaal stap 1.1.4 - 1.1.7.
    9. Centrifugeer de buis bij 300 x g gedurende 5 minuten bij 10 °C. Resuspendeer de cellen in 1 ml 1x lysisbuffer van rode bloedcellen (RBC). Houd de cellen 3 minuten op ijs.
    10. Verdun de celsuspensie met 2 ml B-buffer van Tyrode. Centrifugeer de buis bij 300 x g gedurende 5 minuten bij 10 °C.
    11. Verwijder de supernatant. Resuspendeer de cellen in 0,5 ml Tyrode's A-buffer13.
    12. Tel de cellen met een hemocytometer. Pas het celnummer aan naar 5 x 106/ml met de A-buffer van Tyrode.
  2. Bereid mestcelverarmde PEC's voor met behulp van een magnetisch celzuiveringssysteem14.
    1. Centrifugeer 5 x 105 ruwe PEC's bij 300 x g gedurende 5 minuten bij 10 °C. Resuspendeer de pellet in 200 μL PBSBE-celzuiveringsbuffer (0,5% BSA, 2 mM EDTA, 1 x PBS, pH 7,4).
    2. Voeg 1 μL Fc-blokker (0,5 mg/ml) toe aan de cellen om niet-specifieke binding van anti-c-kit monoklonaal antilichaam (mAb) te voorkomen dat vervolgens wordt toegevoegd. Houd de cellen 5 minuten op ijs.
    3. Voeg 1 μL gebiotinyleerde anti-muis c-kit mAb15 (0,5 mg/ml) toe. Bewaar de cellen 10 minuten op ijs.
    4. Voeg 2 ml PBSBE-buffer toe. Centrifugeer de cellen bij 300 x g gedurende 10 minuten bij 10 °C.
    5. Verwijder de supernatant. Was de cellen opnieuw met 2 ml PBSBE-buffer.
    6. Resuspendeer de cellen in 90 μL PBSBE-buffer. Voeg 10 μL streptavidine-geconjugeerde microbeads toe. Bewaar de cellen 15 minuten op ijs.
    7. Voeg 2 ml PBSBE-buffer toe. Centrifugeer de cellen bij 300 x g gedurende 10 minuten bij 10 °C.
    8. Laad tijdens het centrifugeren 500 μL PBSBE-buffer op een middelgrote magnetische zuil. Laat de buffer door de kolom stromen.
    9. Verwijder het bovenstaande na het centrifugeren. Resuspendeer de cellen in 500 μL PBSBE-buffer.
    10. Laad de cellen op de kolom. Verzamel de cellen die vrij door de kolom gaan.
    11. Was de kolom met 500 μL PBSBE-buffer. Verzamel de cellen die door de kolom gaan opnieuw.
    12. Herhaal stap 1.2.11.
    13. Combineer de cellen uit stap 1.2.9-1.2.11 in één buis. Centrifugeer de cellen bij 300 x g gedurende 10 minuten bij 10 °C.
    14. Resuspendeer de cellen in de A-buffer van Tyrode. Tel de cellen. Pas het celnummer aan op 5 x 106 cellen/ml.
  3. Bereid het lysaat van PEC's voor.
    1. Plaat PEC's (bijv. 5 x 105) in een plaat met 96 putjes met ronde bodem. Centrifugeer de plaat op 300 x g gedurende 2 minuten bij 10 °C om de cellen te verzamelen. Verwijder het bovenstaande voorzichtig met een pipet.
    2. Voeg 100 μL cellysisbuffer toe aan de celpellet. Resuspendeer de cellen door meerdere keren voorzichtig op en neer te pipetteren. Houd de plaat 60 minuten op ijs.
    3. Centrifugeer de plaat op 300 x g gedurende 5 minuten bij 10 °C om celresten te verwijderen. Breng het bovenstaande (het cellysaat) over naar een nieuwe plaat met 96 putjes.
  4. Meet de enzymatische activiteit van β-hexosaminidase16.
    1. Voeg het cellysaat (50 μl) toe aan de voorverwarmde β-hexosaminidase-substraatoplossing (50 μl) in een microtiterplaat met 96 putjes. Meng ze voorzichtig met een pipet.
    2. Incubeer de plaat in een broedmachine van 37 °C. Voeg na 30 minuten 50 μL stopoplossing (100 mM glycine, pH 10,7) toe om de enzymreactie te beëindigen.
    3. Lees de O.D. van de reactiemengsels af met een microplaatlezer met UV-zichtbare absorptie in dubbele golflengte-instelling; 405 nm voor het bepalen van het niveau van de enzymreactie en 620 nm voor automatische achtergrondaftrekking.
  5. Meet de concentratie histamine17.
    1. Breng 100 μL van de geklaarde cellysaten over naar de anti-histamine mAb-gecoate plaat die bij de histamine ELISA-kit is geleverd. Voer een competitieve histamine-ELISA-test uit volgens de handleiding van de fabrikant.
    2. Lees de OD van de monsters af met een UV-zichtbare absorptiemicroplaatlezer bij een golflengte van 450 nm.
  6. Bepaal de verhouding van mestcellen in PEC's met flowcytometrie18.
    1. Breng 1 x 105 ruwe of mastcelverarmde PEC's over in een ronde bodem plaat met 96 putjes. Centrifugeer de plaat 2 minuten bij 300 x g bij 10 °C.
    2. Resuspendeer de cellen in 50 μL FACS-buffer. Voeg 1 μL anti-muis c-kit (0,5 mg/ml) en anti-muis IgE mAbs (0,5 mg/ml) toe.
    3. Draai de cellen kort vortex. Bewaar de cellen 20 minuten op ijs in het donker.
    4. Vul de putjes met 150 μL FACS-buffer. Centrifugeer de plaat 2 minuten bij 300 x g bij 10 °C. Gooi de buffer weg door de plaat snel om te draaien.
    5. Resuspendeer de cellen met 150 μl FACS-buffer die propidiumjodide bevat (1 μg/ml). Analyseer de cellen met een flowcytometer.

2. Test van mestceldegranulatie met behulp van ruwe PEC's

  1. Bepaal de mate van mestceldegranulatie (% degranulatie).
    1. Injecteer 3 BALB/C-muizen (8 weken oud, mannetje) intraveneus (i.v.) met 3 μg anti-DNP mAb (muis IgE). Isoleer PEC's één dag na Ab-injectie (zie stap 1.1).
    2. Plaat 90 μL ruwe PEC's (5,5 x 106/ml) in een plaat met 96 putjes met platte bodem (totaal 4 putjes). Incubeer de plaat gedurende 30 minuten in een bevochtigde CO2 -incubator van 37 °C.
    3. Voeg 10 μL DNP-BSA (5 ng/ml in 1x PBS) toe aan de putjes met PEC's. Incubeer de plaat gedurende 10 minuten in een CO2 -incubator van 37 °C.
    4. Centrifugeer de plaat direct na incubatie 5 minuten bij 300 x g bij 10 °C. Neem de bovenstaande middelen (100 μL) voorzichtig met een pipet. Bewaar ze in een nieuwe plaat met 96 putjes met ronde bodem op ijs.
    5. Voeg 100 μL cellysebuffer (0,1% Triton X-100 in 1 x PBS, pH 7,4) toe aan de microplaatputjes die PEC's bevatten. Houd de plaat 60 minuten op ijs.
    6. Voer de β-hexosaminidase-test uit.
      1. Neem twee van de vier sets van de supernatanten en de overeenkomstige cellysaten die na de degranulatietest in ijs zijn opgeslagen (zie de stappen 2.1.4 en 2.1.5). Splits het bovenstaande en het cellysaat in twee afzonderlijke putjes (elk 50 μl) voor duplicatie van de test.
      2. Voeg 50 μL β-hexosaminidase-substraatoplossing toe aan elk putje. Incubeer de plaat gedurende 30 minuten bij 37 °C. Voeg 50 μL stopoplossing (100 mM glycine, pH 10,7) toe aan het reactiemengsel.
      3. Lees de O.D. van de reactiemengsels af (zie stap 1.4.3). Bereken de mate van mestceldegranulatie als volgt.
        % Degranulatie = ODsupernatans /(ODsupernatans + ODlysaat) X 100%
    7. Voer de histaminetest uit.
      1. Voeg 100 μL 1x PBS toe aan nog eens twee putjes van de supernatanten en de overeenkomstige cellysaten die na de degranulatie zijn opgeslagen om het totale volume van de monsters op 200 μL te brengen. Verdeel elk monster in twee afzonderlijke putjes in een histamine-ELISA-plaat die bij de histamine ELISA-kit wordt geleverd.
      2. Voer de ELISA-test uit volgens de handleiding van de fabrikant. Lees de OD van de monsters af met een UV-zichtbare absorptiemicroplaatlezer bij een golflengte van 450 nm. Bereken de mate van degranulatie zoals in 2.1.6.3.
        % Degranulatie = [histamine]sup /([histamine]sup + [histamine]lysaat) X 100%
  2. Evalueer de effecten van anti-allergiemedicatie op mestcellen die in vivo worden uitgeoefend met de ex vivo mestceldegranulatietest.
    1. Oraal (p.o.) 200 μL dexamethason19 (DEX) en ketotifen20 (KET) respectievelijk toedienen aan muizen (6 weken oud, mannetje) eenmaal daags gedurende 3 dagen (6 muizen/groep).
    2. Injecteer de muizen intraveneus (i.v.) met 3 μg anti-DNP IgE na de3e behandeling. Verdeel elke groep muizen in twee afzonderlijke kooien (3 muizen/kooi); één voor PSA-test en de andere voor ex vivo mestceldegranulatietest.
    3. PSA-test uitvoeren
      1. Injecteer de muizen met DNP-BSA (80 μg) één dag na injectie van anti-DNP IgE. Meet de lichaamstemperatuur met een rectale thermometer elke 15 minuten gedurende 1 uur, te beginnen onmiddellijk na injectie met DNP-BSA.
      2. Neem het bloed af één dag na injectie met DNP-BSA. Meet de niveaus van MCPT-1 in het serum met ELISA.
    4. Voer een ex vivo mestceldegranulatietest uit.
      1. Isoleer PEC's van de muizen een dag na injectie van anti-DNP IgE. Tel het aantal geïsoleerde PEC's.
      2. Plaat 90 μL ruwe PEC's (5,5 x 106/ml) in een plaat met 96 putjes (4 putjes per muis). Incubeer de platen gedurende 30 minuten in een bevochtigde CO2 -incubator van 37 °C.
      3. Voeg 10 μL DNP-BSA (5 ng/ml) toe. Incubeer de plaat gedurende 10 minuten bij 37 °C bevochtigde CO2 -incubator.
      4. Centrifugeer de plaat 5 minuten bij 300 x g bij 10 °C. Neem de bovenstaande stoffen (100 μL) voorzichtig en laat de cellen achter in de putjes.
      5. Voeg 100 μL cellysisbuffer toe aan de putjes. Incubeer de plaat 60 minuten op ijs.
      6. Voer een β-hexosaminidase-test en een histamine-ELISA-test uit zoals beschreven in de punten 2.1.6 en 2.1.7. Bereken de degranulatie zoals in stap 2.1.6.3.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Bepaling van het optimale aantal PEC's voor ex vivo mestceldegranulatietest

Mestcellen (c-kit+· IgE+ dubbel positieve cellen)15 vertegenwoordigen slechts ongeveer 2% van de PEC's (Figuur 1A). Bij het schatten van de maximale niveaus van mestcelspecifieke moleculen die in de kweeksupernatans kunnen worden gedetecteerd, in de veronderstelling dat 100% van de korrels werd...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De bevinding dat mestceldegranulatietest kan worden uitgevoerd met een relatief klein aantal ruwe PEC's van muizen is significant. Hoewel PEC's een uitstekende bron van primaire mestcellen bij muizen moeten zijn, is het veeleisend om mestcellen in PEC's te zuiveren. Hoewel een dichtheidsgradiëntmedium zoals Percoll25 met succes is gebruikt voor de zuivering van mestcellen uit PEC's van ratten, is het gebruik ervan voor de zuivering van peritoneale mestcellen van m...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

We danken de heer Wonhee Lee en mevrouw Eunjoo Lee voor hun technische en administratieve hulp. We danken ook Dr. Thi Minh Nguyet Nguyen voor haar attente opmerkingen. Dit werk werd ondersteund door de onderzoeksbeurzen van de Chungnam National University (CNU Research Grant 2017-2098-01) en van de National Research Foundation of Korea (NRF-2019R1F1A1061894 en NRF-2019M3A9G4067293).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1 mL spuit1757589701
1.5 mL microbuisjeHisolMT-15003
10 mL spuit1757593161
15 mL conische buisThermo Fisher scientific14-959-53A
20xPBSTech & InnovatieBPB-9121-500mL
4-nitrofenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminideSIGMAN9376
5 mL ronde bodempolystyreenbuisLife sciences352003
50 mL conische buisThermo Fisher scientific14-959-49A
Aluminium FiolBioFactTS1-3330
Anti-muis CD117(c-kit)Biolegend135129bewaar bij 2-8°C
Anti-muis IgE mAbsThermo Fisher scientific11-5992-81bewaar bij 2-8°C
Antiti-DNP-IgESIGMAD8406-.2MGbewaar bij -20°C
CentrifugeHANIL396150
D-(+)-gluouseSIGMAG8270
DexamethasonSIGMAD2915-100MG
DNP-BSAInvitrogen2079360bewaar bij -20°C
EDTABiofactPB131-500
Foetaal runder serumThermo Fisher scientific11455035
GelatineSIGMAG1890
GlycineJUNSEI27185-0350
HemocytometerZEISS176045
HEPESThermo Fisher scientific15630130
Histamine ELISA kitAbcamGK3275957-4bewaar bij 2-8°C
Hotplate roerderLab teachzso-9001
IsofluranceTroikaaI29159
Ketotifen fumaraat zoutSIGMAK2628
MCPT-1 ELISA kitThermo Fisher scientific88-7503-22bewaar bij 2-8°C
Muis Fc blokBD Biosciences553141bewaar bij 2-8°C
Propidium jodideSIGMA81845bewaar bij 2-8°C
RBC lysis bufferBiolegend420301
Rondbodem 96 wellSPL-life sciences30096
Spuitfilter voor eenmalig gebruikStartoriusag16555
Streptavidine microbeadsMilteryiBiotec130-048-101bewaar bij 2-8°C
Triton X-100JUNSEIchemical49415-1601
TWEEN 20SIGMA9005-64-5
WaterbadCHANGSHINSCIENCE190107

Referenties

  1. Amin, K. The role of mast cells in allergic inflammation. Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).
  2. Holgate, S., et al. The anti-inflammatory effects of omalizumab confirm the central role of IgE in allergic inflammation. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 115 (3), 459-465 (2005).
  3. Galli, S. J., Tsai, M. IgE and mast cells in allergic disease. Nature Medicine. 18 (5), 693(2012).
  4. Roth, K., Chen, W. M., Lin, T. J. Positive and negative regulatory mechanisms in high-affinity IgE receptor-mediated mast cell activation. Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis. 56 (6), 385-399 (2008).
  5. Finn, D., Walsh, J. Twenty-first century mast cell stabilizers. British Journal of Pharmacology. 170 (1), 23-37 (2013).
  6. Lu, Y., et al. Emodin, a naturally occurring anthraquinone derivative, suppresses IgE-mediated anaphylactic reaction and mast cell activation. Biochemical Pharmacology. 82 (11), 1700-1708 (2011).
  7. Demo, S., et al. Quantitative measurement of mast cell degranulation using a novel flow cytometric annexin-V binding assay. Cytometry: The Journal of the International Society for Analytical Cytology. 36 (4), 340-348 (1999).
  8. Passante, E., Ehrhardt, C., Sheridan, H., Frankish, N. RBL-2H3 cells are an imprecise model for mast cell mediator release. Inflammation Research. 58 (9), 611-618 (2009).
  9. Fukuishi, N., et al. Does β-hexosaminidase function only as a degranulation indicator in mast cells? The primary role of β-hexosaminidase in mast cell granules. The Journal of Immunology. 193 (4), 1886-1894 (2014).
  10. Malbec, O., et al. Peritoneal cell-derived mast cells: an in vitro model of mature serosal-type mouse mast cells. The Journal of Immunology. 178 (10), 6465-6475 (2007).
  11. Arock, M., Le Nours, A., Malbec, O., Daëron, M. Innate Immunity. , Springer. 241-254 (2008).
  12. Befus, A., Pearce, F., Gauldie, J., Horsewood, P., Bienenstock, J. Mucosal mast cells. I. Isolation and functional characteristics of rat intestinal mast cells. The Journal of Immunology. 128 (6), 2475-2480 (1982).
  13. Yoon, S. C., et al. Anti-allergic and anti-inflammatory effects of aqueous extract of Pogostemon cablin. International Journal of Molecular Medicien. 37 (1), 217-224 (2016).
  14. Mierke, C. T., et al. Human endothelial cells regulate survival and proliferation of human mast cells. Journal of Experimental Medicien. 192 (6), 801-812 (2000).
  15. Hermes, B., et al. Altered expression of mast cell chymase and tryptase and of c-Kit in human cutaneous scar tissue. Journal of Investigative Dermatology. 114 (1), 51-55 (2000).
  16. Wendeler, M., Sandhoff, K. J. Hexosaminidase assays. Glycoconjugate Journal. 26 (8), 945-952 (2009).
  17. Russell, M., et al. Learned histamine release. Science. 225 (4663), 733-734 (1984).
  18. Darzynkiewicz, Z., et al. Features of apoptotic cells measured by flow cytometry. Cytometry. 13 (8), 795-808 (1992).
  19. Kitamura, Y., et al. Dexamethasone suppresses histamine synthesis by repressing both transcription and activity of HDC in allergic rats. Allergology International. 55 (3), 279-286 (2006).
  20. Grant, S. M., Goa, K. L., Fitton, A., Sorkin, E. M. Ketotifen. A review of its pharmacodynamic and pharmacokinetic properties, and therapeutic use in asthma and allergic disorder. Drugs. 40 (3), 412-448 (1990).
  21. Cook, E., Stahl, J., Barney, N., Graziano, F. Mechanisms of antihistamines and mast cell stabilizers in ocular allergic inflammation. Current Drug Targets-Inflammation & Allergy. 1 (2), 167-180 (2002).
  22. Schoch, C. In vitro inhibition of human conjunctival mast-cell degranulation by ketotifen. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 19 (1), 75-81 (2003).
  23. Franchimont, D., et al. Inhibition of Th1 immune response by glucocorticoids: dexamethasone selectively inhibits IL-12-induced Stat4 phosphorylation in T lymphocytes. The Journal of Immunology. 164 (4), 1768-1774 (2000).
  24. Simmons, C. P., et al. The clinical benefit of adjunctive dexamethasone in tuberculous meningitis is not associated with measurable attenuation of peripheral or local immune responses. The Journal of Immunology. 175 (1), 579-590 (2005).
  25. Cavalher-Machado, S. C., et al. The anti-allergic activity of the acetate fraction of Schinus terebinthifolius leaves in IgE induced mice paw edema and pleurisy. International Immunopharmacology. 8 (11), 1552-1560 (2008).
  26. Dhakal, H., et al. Gomisin M2 inhibits mast cell-mediated allergic inflammation via attenuation of FcεRI-mediated Lyn and Fyn activation and intracellular calcium levels. Frontiers in Pharmacology. 10, 869(2019).
  27. Galli, S. J., Wedemeyer, J., Tsai, M. Analyzing the roles of mast cells and basophils in host defense and other biological responses. International Journal of Hematology. 75 (4), 363-369 (2002).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Ex vivo assayisolatie van ruwe PECbehandeling met anti DNP IgEincubatie met DNP dragerprote nevalidatie van mastcelstabilisatorentesten van allergiemedicatiepassieve systemische anafylaxie

Dit artikel is gepubliceerd

Video binnenkort beschikbaar

Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.