Deze studie presenteert methodologieën om de pathomorfologische en moleculaire mechanismen te bestuderen die ten grondslag liggen aan kikkererwten:Rhizoctonia bataticola-interactie. De blotting papier methode is nuttig om snel te bestuderen kikkererwten genotype reacties, terwijl de zieke pot-gebaseerde methode kan worden gebruikt om tegelijkertijd droogte en R. bataticola infectie en scherm voor tolerante genotypen op te leggen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Dry Root Rot Disease Assays in Chickpea: een gedetailleerde methodologie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Droge wortelrot (DRR) ziekte is een opkomende biotische stress bedreiging voor kikkererwten teelt over de hele wereld. Het wordt veroorzaakt door een door de bodem overgedragen schimmelpathogene ziekteverwekker Rhizoctonia bataticola. In de literatuur zijn uitgebreide en gedetailleerde stapsgewijze protocollen over ziektetesten schaars. Dit artikel bevat volledige details over de stappen die betrokken zijn bij het opzetten van een blotting papier techniek voor het snel screenen genotypen voor weerstand tegen DRR. De blotting papier techniek is eenvoudig en minder duur. Een andere methode, gebaseerd op de zieke pot benadering, is een nabootsing van natuurlijke infectie en kan worden toegepast op de interactie componenten-plant, ziekteverwekker, en omgeving-betrokken bij de ziekte driehoek te bestuderen.
Bovendien komt DRR in de natuur vooral voor in geregen kikkererwtenteeltgebieden, waar bodemvocht afneemt naarmate de gewasgroei vordert. Droogte stress is bekend dat kikkererwten planten predisponeren om drr ziekte. Pathomorfologische en moleculaire kennis van de interactie tussen plant en ziekteverwekker bij droogtestress kan de weg vrijmaken voor de identificatie van elite DRR-resistente rassen uit de kikkererwtenkiempool. Dit artikel biedt een stapsgewijze methodologie voor de bereiding van een zieke pot en de daaropvolgende ziektetest. Over het algemeen zal de hierin gepresenteerde informatie onderzoekers helpen bij het voorbereiden van R. bataticola schimmelinoculum, het handhaven van deze ziekteverwekker, het opzetten van de blotting papiertechniek, het voorbereiden van zieke cultuur en zieke pot, en het beoordelen van ziekteverwekkerinfectie in kikkererwtenplanten.
Inleiding
Droge wortelrot (DRR) is een van de economisch belangrijke ziekten bij kikkererwten1,2. Het is een wortel-specifieke ziekte veroorzaakt door Rhizoctonia bataticola (teleomorf, Macrophomina phaseolina). Geïnfecteerde planten missen laterale wortels en bezitten broze taproots en geel gebladerte1,3. DRR onder droogte stress is gemeld als een opkomende bedreiging voor kikkererwten teelt1,2,3. Bovendien wordt gemeld dat de drr-incidentie onder dro....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Isolatie van R. bataticola en opslag
- Details van de kikkererwtengenype en DRR symptomen
- Gebruik kikkererwtenplanten (genotype, JG 62) die over het algemeen typische DRR-symptomen vertonen, zoals droge, broze primaire wortel zonder laterale wortels en microsclerotie onder de schors en in de pith1,3.
- Inzameling en wassen
- Ontwortel planten met symptomen zoals droog strokleurig blad en broze primaire wortel met microsclerotie onder de opperhuidlaag. Tijdens het ontwortelen, een groot deel van de wortels zal blijven in de bodem als de geïnfecteerde wortel....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Deze studie was gericht op het aantonen van technieken zoals blotting papier en zieke pot technieken om pathomorfologische en moleculaire begrip van plant-pathogen interactie onder droogte stress te vergemakkelijken. Om dit te bereiken, planten vertonen DRR symptomen1,3,4 werden verzameld uit een kikkererwten veld, en de schimmel werd geïsoleerd met behulp van de hyphal tip methode8. R. bataticola
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De blotting papier techniek biedt een eenvoudige aanpak voor het scherm kikkererwten genotypen onder laboratoriumomstandigheden. Dip-inenting maakt het onderzoeken van interactie op tijdelijke basis mogelijk met eenvoudige controle over entmateriaalbelasting(aanvullende figuur 1)en vergemakkelijkt in vitro screening. Bovendien kunnen zelfs jonge zaailingen worden gebruikt. Vijf dagen oude schimmelcultuur (Figuur 1B) kan voldoende inentmateriaal opleveren om de planten te inf.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
We hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Projecten in het M.S.K lab worden ondersteund door het National Institute of Plant Genome Research kernfinanciering. VI erkent DBT- JRF (DBT/2015/NIPGR/430). Wij danken studenten in opleiding, Miss Rishika, de heer Jayachendrayan, en Miss Durgadevi voor technische hulp tijdens video-opnamen en de heer Sandeep Dixit, Miss Anjali en Dr. Avanish Rai voor het kritisch beoordelen van ruwe gegevens en de manuscriptbestanden. We danken Mr Rahim H Tarafdar en Mr. Sunder Solanki voor hun hulp in het laboratorium. Wij erkennen DBT-eLibrary Consortium (DeLCON) en NIPGR Library voor het verstrekken van toegang tot e-resources en NIPGR Plant Growth Facility voor de groei van plant....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Fungus- Rhizoctonia bataticola | Pathogeen inoculum | Indian Type Culture Collection No. 8365 | GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& id=1251&Itemid=1370) |
| Soilrite mix | Grondmedium in het lab | Keltech Energies Limited, Bangalore, India | http://www.keltechenergies.com/ |
| Filterpapier | Blotting papier om de plantengroei te ondersteunen | Himedia | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 |
| Pot | Planten kweken | Potten van 10 en 30 cm grootte | Routinematig gebruikte kwekerijpotten, bijvoorbeeld, https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html |
| Aardappel dextrose agar/bouillon | De schimmel cultiveren en onderhouden | Cat# 213400, DifcoTM, MD, USA | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| Incubator | De schimmel cultiveren | LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, incubator en shaker | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| Groeikamerbe | Planten kweken onder gecontroleerde omstandigheden | Model No. A1000, Conviron, Canada | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| Laminaire luchtstroom | Aseptische oefeningen uitvoeren | Telstar, Bio II advance, Klasse II kast, EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/, http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| Gaas | Het schimmelmycelium filteren | Nylon muggengaas | Gaas met poriëndiameter van 0,6-1 mm |
| Autoclaaf | Media en kikkererwten zaden autoclaveren | Autoclaaf | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| Microscopen | De infectie en het schimmelmycelium visualiseren | SMZ25 / SMZ18, Research Stereomicroscopen, Leica EZ4 educatief stereomicroscoop | https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| Weegschaal | Schimmel en chemicaliën wegen | Sartorius elektronische weegschaal, BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | Schimmelkleuring | Sigma | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| Anilienblauw | Schimmelkleuring | Himedia | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
Referenties
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
