Methodenartikel

Intravitreale injectie en kwantificering van infectieparameters in een muismodel van bacteriële endoftalmitis

DOI:

10.3791/61749

⸱

6 februari 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Department of Ophthalmology, Dean McGee Eye Institute, 3Dean McGee Eye Institute, 4Department of Cell Biology and Department of Family and Preventive Medicine, University of Oklahoma Health Sciences Center

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We beschrijven hier een methode van intravitreale injectie en daaropvolgende bacteriële kwantificering in muismodel van bacteriële endoftalmitis. Dit protocol kan worden uitgebreid voor het meten van gastheer immuunresponsen en bacteriële en gastheer genexpressie.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Intraoculaire bacteriële infecties vormen een gevaar voor het gezichtsvermogen. Onderzoekers gebruiken diermodellen om de gastheer- en bacteriële factoren en immuunresponstrajecten in verband met infectie te onderzoeken om levensvatbare therapeutische doelen te identificeren en om geneesmiddelen te testen om blindheid te voorkomen. De intravitreale injectietechniek wordt gebruikt om organismen, drugs of andere stoffen rechtstreeks in de glasholte in het achterste segment van het oog te injecteren. Hier hebben we deze injectietechniek aangetoond om infectie in het muizenoog te starten en de techniek van het kwantificeren van intraoculaire bacteriën. Bacillus cereus werd gekweekt in de hersenen hart infusie vloeibare media voor 18 uur en opnieuw geschorst tot een concentratie 100 kolonie vormen eenheden (CFU)/0.5 μL. Een C57BL/6J muis werd verdoofd met behulp van een combinatie van ketamine en xylazine. Met behulp van een picolitermicroinjector en glazen capillaire naalden werd 0,5 μL van de Bacillus-suspensie in het middenglas van het muizenoog geïnjecteerd. De contralaterale controle oog werd ofwel geïnjecteerd met steriele media (chirurgische controle) of werd niet geïnjecteerd (absolute controle). Na 10 uur na infectie werden muizen geëuthanaseerd en werden de ogen geoogst met steriele chirurgische pincet en in een buis geplaatst met 400 μL steriele PBS en 1 mm steriele glazen kralen. Voor ELISA's of myeloperoxidasetesten werd eiwitaseremmer aan de buizen toegevoegd. Voor RNA-extractie is de juiste lysisbuffer toegevoegd. Ogen werden gehomogeniseerd in een weefsel homogenisator voor 1-2 minuten. Homogenaten werden serieel verdund 10-voudig in PBS en track verdund op agar platen. De rest van de homogenaten werd opgeslagen bij -80 °C voor extra tests. Platen werden 24 uur lang geïncubeerd en CFU per oog werd gekwantificeerd. Deze technieken resulteren in reproduceerbare infecties in de ogen van de muis en vergemakkelijken kwantificering van levensvatbare bacteriën, de gastheer immuunrespons, en omica van gastheer en bacteriële genexpressie.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bacteriële endoftalmitis is een verwoestende infectie die ontstekingen veroorzaakt, en, indien niet goed behandeld, kan resulteren in verlies van gezichtsvermogen of blindheid. Endophthalmitis is het gevolg van de binnenkomst van bacteriën in het binnenste van het oog1,2,3,4,5. Eenmaal in het oog, bacteriën repliceren, produceren toxines en andere schadelijke factoren, en kan onomkeerbare schade aan delicate netvliescellen en weefsels veroorzaken. Oculaire schade kan ook worden veroorzaakt door ontsteking, als gevolg van de activering van ontstekingstrajecten die leiden tot inflammatoire celinstroom in het binnenste van het oog1,5,6. Endophthalmitis kan optreden na intraoculaire chirurgie (postoperatieve), een doordringende verwonding aan het oog (posttraumatisch), of van gemetastaserende verspreiding van bacteriën in het oog van een andere anatomische plaats (endogene)7,8,9,10. Behandelingen voor bacteriële endophthalmitis omvatten antibiotica, ontstekingsremmende geneesmiddelen of chirurgische ingreep3,4,11. Zelfs met deze behandelingen, visie of het oog zelf kan verloren gaan. De visuele prognose na bacteriële endophthalmitis varieert over het algemeen afhankelijk van de effectiviteit van de behandeling, de gezichtsscherpte bij de presentatie en de virulentie van het infecterende organisme.

Bacillus cereus (B. cereus) is een van de belangrijkste bacteriële pathogenen die posttraumatische endophthalmitis7,12veroorzaakt . Een meerderheid van B. cereus endophthalmitis gevallen hebben een snelle cursus, die kan resulteren in blindheid binnen een paar dagen. De kenmerken van B. cereus endophthalmitis omvatten snel evoluerende intraoculaire ontsteking, oogpijn, snel verlies van gezichtsscherpte, en koorts. B. cereus groeit snel in het oog in vergelijking met andere bacteriën die vaak ooginfecties veroorzaken2,4,12 en bezit vele virulentie factoren. Daarom is het venster voor succesvolle therapeutische interventie relatief kort1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25. Behandelingen voor deze infectie zijn meestal succesvol in de behandeling van endophthalmitis veroorzaakt door andere minder virulente ziekteverwekkers, maar B. cereus endoftalmitis resulteert meestal in meer dan 70% van de patiënten die lijden aan aanzienlijk verlies van het gezichtsvermogen. Ongeveer 50% van deze patiënten ondergaan ontdaan of inappucleratie van het geïnfecteerde oog7,16,22,23. De destructieve en snelle aard van B. cereus endoftalmitis vraagt om onmiddellijke en juiste behandeling. De recente vooruitgang bij het onderscheiden van de onderliggende mechanismen van ziekteontwikkeling heeft potentiële streefcijfers voor interventie19,26,27vastgesteld . Experimentele muismodellen van B. cereus endophthalmitis blijven nuttig bij het onderscheiden van de mechanismen van infectie en het testen van potentiële therapieën die verlies van het gezichtsvermogen kunnen voorkomen.

Experimentele intraoculaire infectie van muizen met B. cereus is een instrumenteel model voor het begrijpen van bacteriële en gastheer factoren, evenals hun interacties, tijdens endophthalmitis28. Dit model bootst een posttraumatisch of postoperatief voorval na, waarbij bacteriën in het oog worden gebracht tijdens een verwonding. Dit model is zeer reproduceerbaar en is nuttig geweest voor het testen van experimentele therapieën en het verstrekken van gegevens voor verbeteringen in de standaard van de zorg1,6,19,29,30. Net als veel andere infectie modellen, dit model zorgt voor onafhankelijke controle van vele parameters van infectie en maakt efficiënt en reproduceerbaar onderzoek van infectie resultaten. Studies in een soortgelijk model bij konijnen in de afgelopen decennia hebben de effecten onderzocht van B. cereus virulentiefactoren in het oog2,4,13,14,31. Door b. cereus mutantstammen te injecteren zonder individuele of meervoudige virulentiefactoren, kan de bijdrage van deze virulentiefactoren aan de ernst van de ziekte worden gemeten aan de gevolgen zoals de concentratie van bacteriën op verschillende uren nainfectie of het verlies van visuele functie13,14,27,31,32. Bovendien zijn in dit model hostfactoren onderzocht door knock-outmuisstammen te infecteren zonder specifieke ontstekingsfactoren26,29,33,34,35. Het model is ook nuttig voor het testen van mogelijke behandelingen voor deze ziekte door het injecteren van nieuwe verbindingen in het oog na infectie30,36. In dit manuscript beschrijven we een gedetailleerd protocol dat het infecteren van een muizenoog met B. cereusomvat, het oogsten van het oog na infectie, het kwantificeren van intraoculaire bacteriële belasting en het bewaren van specimens om extra parameters van de ernst van de ziekte te testen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle procedures werden uitgevoerd naar aanleiding van de aanbevelingen in de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren en de Association for Research in Vision and Ofhthalmology Statement for the Use of Animals in Oogheelkundig en Vision Research. De protocollen werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee van de Universiteit van Oklahoma Health Sciences Center (protocolnummers 15-103, 18-043 en 18-087).

1. Steriele glazen naalden

  1. Zet de naaldpipettrekker aan.
  2. Pas de heater-knop aan totdat het display 12.6 toont.
  3. Open de deur en voer de 5 μL capillaire buis handmatig door de bovenste klem en de verwarming filament totdat de helft van de slang zich uitstrekt tot onder de gloeidraad (Figuur 1A).
  4. Bevestig dat de capillaire buis zich in de "V" groef in de bovenste klem bevindt. Draai de bovenste klem vast.
  5. Als de onderste klem open is, past u de verticale schuif handmatig aan tot de onderste klem de bovengrens bereikt. Bevestig dat de buis zich in de "V" groef in de onderste klem bevindt. Draai de onderste klem aan.
  6. Sluit de deur en bevestig dat het 'Ready' lampje aan staat. Druk op de startknop om de verwarmings- en trekvolgorde te starten(figuur 1B).
  7. Zorg ervoor dat de kachel automatisch wordt uitgeschakeld na hitte en de zwaartekracht trekt de capillaire buis uit elkaar(figuur 1C), en de dia beweegt naar beneden.
  8. Doe de deur open. Terwijl u de bovenkant van de capillaire buis vasthoudt, u de bovenste klem onttrekken. Verwijder de bovenste capillaire buis en zet deze opzij.
  9. Houd de capillaire buis in de onderste schuif en untighten de onderste klem. Verwijder de onderste capillaire buis en zet deze opzij.
  10. Gebruik een micro-elektrodeschuin met een aluminiumoxide-schuurplaat van 0,05 μm om de getrokken capillaire buis te schuintrekken om de injectienaalden te creëren.
  11. Pipette genoeg water op de slijpplaat om het oppervlak te bedekken (Figuur 1D).
  12. Zet de schuine kanter zo in dat deze begint te draaien bij 60 rpm. Plaats de getrokken capillaire buis in de pipetklem in de "V" groef. Draai de klem vast en stel de hoek van de pipetklem op 30°.
  13. Pas de punt van de puntige rand van de capillaire buis ongeveer twee derde afstand van het centrum van rotatie van de slijpplaat.
  14. Laat de geklemde capillaire buis zakken door de grove bedieningsknop aan de bovenkant van de manipulator aan te passen. Blijf de capillaire buis verlagen totdat de punt van de capillaire buis zich onder het wateroppervlak uitstrekt en het schurende oppervlak van de slijpplaat in contact komt.
  15. Controleer de afschuiningsvoortgang met behulp van de microscoop die aan de schuine kant is bevestigd. Pas na 5 minuten de fijne controle aan om de glazen naald van de slijpplaat te halen.
  16. Verwijder de glazen naald en plaats deze onder 10x vergroting om de punt van de capillaire buis te controleren (figuur 1E,F).
  17. Om ervoor te zorgen dat er geen blokkades zijn, steek je de glasnaald in een pipethouder op een spuit en duw je lucht in een buis van 99% ethanol. Als luchtbellen zich vormen aan het puntje van de naald, de naald heeft geen blokkades en kan worden gebruikt voor microinjectie. Dit proces zorgt ook voor de steriliteit van de glasnaalden.
  18. Eén capillaire buis kan tot 5 μL vloeistof bevatten. Markeer de capillaire buis in 10 secties om de afstanden op de naald te berekenen om te markeren voor 0,5 μL volumes. Markeer een weegschaal met die afstand die 0,5 μL bevat voor toekomstige voorbereiding. Voor een naald van 5 μL komen afstanden van 0,7 mm uit elkaar overeen met 0,5 μL (figuur 1G).

2. Bacillus cereus cultuur

  1. Voer alle procedures in deze sectie uit onder Biosafety Level 2 voorwaarden.
  2. Streep vriesbouillon van B. cereus ATCC 14579 voor eenkolonie isolatie van één kolonie op een 5% schapenbloed agar plaat en incubeer 's nachts bij 37 °C (Figuur 2A).
  3. Pipette 5 mL steriele Brain Heart Infusion (BHI) bouillon in een 10 mL steriele snap-cap buis (Figuur 2B). Kies met behulp van een steriele lus of naald een enkele kolonie B. cereus ATCC 14579 van de agarplaat en inent de vloeistof BHI.
  4. Vortex het monster kort. Plaats de snap-cap buis in een roterende couveuse. Stel de temperatuur in op 37 °C en snelheid op 200 tpm. Na 18 uur, verwijder de cultuur uit de couveuse (Figuur 2B).

3. Bacteriële verdunning voor intravitreale injectie

  1. Voer alle procedures in deze sectie uit onder Biosafety Level 2 voorwaarden.
  2. Bereken het volume van de 's nachts B. cereus cultuur toe te voegen aan 10 mL verse BHI tot 200 kolonievormende eenheden per microliter (CFU/μL) te bereiken. Bijvoorbeeld, een nachtelijke cultuur van B. cereus in BHI repliceert tot ongeveer 2 x 108 CFU/mL, die vervolgens kan worden verdund tot 200 CFU/μL door 10 μL van de nachtelijke cultuur in 10 mL verse BHI te pipetten.
  3. Pipette 1 mL van de vers verdunde cultuur in een 1,5 mL microcentrifuge buis. Houd deze buis op ijs tot intravitreal injectie. Voer de intravitreale injectie uit binnen 60 minuten na het verdunnen van de bacteriële cultuur.

4. Intravitreale injectie van muizen

  1. Voer alle procedures in deze sectie uit onder Biosafety Level 2 voorwaarden.
  2. Bereid de procedure site door het plaatsen van medische onderpads op de operatietafel.
  3. Zet de microinjector aan en open de gasklep op de persluchttank die aan de microinjector is bevestigd. Pas de tankregelaar aan tot de gastoevoer ongeveer 60 psi is.
  4. Druk op de microinjector op Modus totdat het scherm Balanstoont. Druk op Balans en plaats de computermuis op de operatietafel. Sluit de roestvrijstalen pipethouder aan op de slang die is bevestigd aan 'Fill/Output' van de injector. Deze buis is altijd verbonden met de injector.
  5. Plaats de capillaire naald aan de andere kant van de pipethouder door de pipethouderconnector rond de naald stevig te schroeven.
  6. Zet de oogheelkundige microscoop aan en zet het licht aan tot een intensiteit van 50%. Pas de microscoop over de proceduresite op de operatietafel en pas de microscoop aan de gewenste focus aan.
  7. Voordat de procedure begint, bevestig dan dat de muis voldoende verdoofd is door de pedaalherontwenningsreflex te testen. Zorg ervoor dat u uw IACUC goedgekeurd protocol voor anesthesie te volgen.
  8. Plaats de verdoofde muis op de medische onderpads met zijn neus naar rechts gericht en leunend aan de linkerkant.
  9. Kijk naar het rechteroog van de muis door de oogheelkundige microscoop en open de deksels door het openen van de tangen van een omgekeerde actie tangen aan weerszijden van het oog om de injectieplaats bloot te stellen (Figuur 3C).
  10. Vul de capillaire naald met de 200 CFU/μL verdunning door links te klikken op de muismat die is aangesloten op de microinjector (figuur 3D).
  11. Bevestig het hoofd van het dier met de linkerhand en plaats het puntje van de naald op de limbus van het oog. Met de naald in de schuine kant positie en onder 45° hoek, punctie het oog van de muis, maar zorg ervoor dat alleen de scherpe punt van de naald (~ 0,5 mm) wordt ingevoegd bij het injecteren.
  12. Zodra de naaldpunt is ingebracht, beweegt u de linkerhand van de muiskop naar de muismat en klikt u met de rechtermuisknop op de muismat om 0,5 μL van de B. cereusverdunning te injecteren. Om lekkage te voorkomen, laat u de naaldpunt 2-3 seconden in het oog van de muis voordat u deze verwijdert (figuur 3E)1,19,26,27,32,34,36,37,38.
  13. Laat de tangen los en plaats de muis in een kooi die op een warm pad zit. Controleer deze muizen totdat ze zijn hersteld van anesthesie(figuur 3F).
  14. Zodra muizen zijn hersteld van de verdoving, de kooi terug te keren naar de juiste rack. Als de muizen zullen worden onderworpen aan retinale functie analyse door elektroretinografie, kooien moeten worden teruggestuurd naar een donkere kamer voor een goede donkere aanpassing.

5. Bereiding van de oogstbuis

  1. Plaats 1 mm steriele glazen kralen in 1,5 mL schroefdopbuizen.
  2. Steriliseren deze buizen in een autoclave op een droge instelling. Laat de buizen afkoelen tot kamertemperatuur voor gebruik.
  3. Voeg 10 mL 1x steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) toe aan een steriele centrifugebuis van 15 mL.
  4. Voeg 1 tablet protease inhibitor cocktailtablet toe aan de buis. Meng door19,27,29,34,35tevortexen .
  5. Pipette 400 μL van 1x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met proteaseremmer in elke autoclaved oogstbuis. Label de buizen en plaats op ijs. (Figuur 4A).

6. Het oogsten van de ogen

  1. Voer alle procedures in deze sectie uit onder Biosafety Level 2 voorwaarden.
  2. Euthanaserië de muis door CO 2-inademing. Gebruik een secundaire methode om euthanasie te bevestigen.
  3. Houd de geëuthanaseerde muiskop veilig en open de fijne punt tang aan weerszijden van het geïnfecteerde oog. Duw naar beneden naar het hoofd om het oog te proptose. Zodra de tang achter de aardbol van het oog, knijp de tang samen. Trek tangen van het hoofd weg om de oogbol los te maken(figuur 4B).
  4. Plaats de oogbol onmiddellijk in een gelabelde oogstbuis. Plaats buizen op ijs voor niet meer dan 60 min (Figuur 4C).

7. Intraoculair bacterieaantal

  1. Voer alle procedures in deze sectie uit onder Biosafety Level 2 voorwaarden.
  2. Bevestig dat alle oogstbuizen goed gesloten zijn en in evenwicht zijn in de weefselhomogenisator(figuur 5A). Zet de weefselhomogenisator gedurende 1 min aan om de monsters te homogeniseren. Wacht tot 30 s, dan weer voor een minuut. Plaats buizen op ijs (figuur 5B,C).
  3. Verdun elk monster in serie 10-voudig door achtereenvolgens 20 μL van het homogenaat over te brengen in 180 μL steriele 1x PBS. Verdun tot een factor 10-7 is bereikt (figuur 5D).
  4. Label elke rij van een warme, vierkante BHI plaat met de juiste verdunningsfactoren. Breng 10 μL van elke verdunning op een rij over naar de bovenste BHI-plaat die ongeveer 45° gekanteld is. Laat het monster lopen totdat het bijna de onderkant van de plaat bereikt, leg dan de plaat plat (Figuur 5E)39.
  5. Wanneer het monster in de BHI agar wordt opgenomen, brengt u de plaat over naar een couveuse van 37 °C. Kolonies moeten 8 uur na plaatsing in de couveuse zichtbaar beginnen te zijn.
  6. Verwijder de plaat uit de couveuse voordat de groei van de B. cereuskolonies interfereert met het identificeren van individuele kolonies(figuur 5F).
  7. Voor een nauwkeurige weergave van de concentratie in het monster, tel de rij die tussen de 10-100 kolonies heeft. Bijvoorbeeld, een rij met de verdunningsfractie van 10-4 die 45 kolonies heeft, heeft een concentratie van 4,5 x 105 CFU/mL.
  8. Om het totale aantal bacteriën per oog te berekenen, vermenigvuldigt u de concentratie met 0,4, wat het millilitervolume van 1x PBS vertegenwoordigt dat wordt gebruikt om het oog te homogeniseren. De 4,5 x 105 CFU/mL-concentratie zou bijvoorbeeld zich vertalen naar 1,8 x 105 CFU B. cereus per oog.

8. Behoud van monsters

  1. Plaats homogenaatmonsters in een gelabelde vrieskist en plaats deze doos in een vriezer van -80 °C. Deze monsters kunnen later worden gebruikt voor ontstekingsmediatoranalyse door ELISA.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het genereren van een reproduceerbaar entmateriaal en nauwkeurigheid van de intravitreale injectieprocedure zijn belangrijke stappen in het ontwikkelen van modellen van microbiële endoftalmitis. Hier hebben we aangetoond dat de intravitreal injectie procedure met behulp van Gram-positieve Bacillus cereus. We injecteerden 100 CFU/0,5 μL B. cereus in het middenglas van vijf C57BL6 muizen. Na 10 uur nainfectie zagen we intraoculaire groei van B. cereus tot ongeveer 1,8 x 105 CFU/oog.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zelfs met de beschikbaarheid van krachtige antibiotica, ontstekingsremmende geneesmiddelen en vitrectomiechirurgie, bacteriële endophthalmitis kan een patiënt blind maken. Klinische studies zijn nuttig geweest bij het bestuderen van endophthalmitis; echter, experimentele modellen van endoftalmitis bieden snelle en reproduceerbare resultaten die kunnen worden vertaald naar vooruitgang in de standaard van de zorg, wat resulteert in een betere visuele uitkomst voor patiënten.

Het glasvochtvolume ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen financiële conflicten te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs bedanken Dr. Feng Li en Mark Dittmar (OUHSC P30 Live Animal Imaging Core, Dean A. McGee Eye Institute, Oklahoma City, OK, USA) voor hun hulp. Ons onderzoek is ondersteund door National Institutes of Health subsidies R01EY028810, R01EY028066, R01EY025947 en R01EY024140. Ons onderzoek is ook ondersteund door P30EY21725 (NIH CORE subsidie voor Live Animal Imaging and Analysis, Molecular Biology, en Cellular Imaging). Ons onderzoek is ook ondersteund door de NEI Vision Science Pre-doctoral Trainee programma 5T32EY023202, een Presbyterian Health Foundation Research Support subsidie, en een onbeperkte subsidie aan de decaan A. McGee Eye Institute van Research to Prevent Blindness.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2-20 µL pipetteRANINL0696003GNA
37oC IncubatorFisher Scientific11-690-625DNA
Bacto Brain Heart InfusionBD90003-032NA
Cell MicroinjectorMicroData Instrument, Inc.PM2000NA
Fine tip forcepsThermo Fisher Scientific12-000-122NA
Glass beads 1.0 mmBioSpec11079110NA
Incubator ShakerNew Brunswick ScientificNB-I2400NA
Microcapillary Pipets 5 MicrolitersKimble71900-5NA
Micro-Pipette BevelerSutter Instrument Co.BV-10NA
Microscope Axiostar PlusZeissNA
Microscope OPMI LumeraZeissNA
Mini-Beadbeater-16BioSpecModel 607NA
Multichannel pipette 30-300 µLBiohit15626090NA
Multichannel pipette 5-100 µLBiohit9143724NA
Needle/Pipette PullerKopf730NA
PBSGIBCO1897315Moleculair graad
Protease Inhibitor CocktailRoche4693159001Moleculair graad
Reverse action forcepsKatenaK5-8228NA

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ramadan, R. T., Ramirez, R., Novosad, B. D., Callegan, M. C. Acute inflammation and loss of retinal architecture and function during experimental Bacillus endophthalmitis. Current Eye Research. 31 (11), 955-965 (2006).
  2. Callegan, M. C., Booth, M. C., Jett, B. D., Gilmore, M. S. Pathogenesis of gram-positive bacterial endophthalmitis. Infection and Immunity. 67 (7), 3348-3356 (1999).
  3. Durand, M. L. Bacterial and Fungal Endophthalmitis. Clinical Microbiology Reviews. 30 (3), 597-613 (2017).
  4. Callegan, M. C., Engelbert, M., Parke, D. W., Jett, B. D., Gilmore, M. S. Bacterial endophthalmitis: Epidemiology, therapeutics, and bacterium-host interactions. Clinical Microbiology Reviews. 15 (1), 111-124 (2002).
  5. Livingston, E. T., Mursalin, M. H., Callegan, M. C. A Pyrrhic Victory: The PMN Response to Ocular Bacterial Infections. Microorganisms. 7 (11), 537(2019).
  6. Ramadan, R. T., Moyer, A. L., Callegan, M. C. A role for tumor necrosis factor-alpha in experimental Bacillus cereus endophthalmitis pathogenesis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (10), 4482-4489 (2008).
  7. Davey, R. T., Tauber, W. B. Posttraumatic endophthalmitis: The emerging role of Bacillus cereus infection. Reviews of Infectious Dissease. 9 (1), 110-123 (1987).
  8. Ramappa, M., et al. An outbreak of acute post-cataract surgery Pseudomonas sp. endophthalmitis caused by contaminated hydrophilic intraocular lens solution. Ophthalmology. 119 (3), 564-570 (2012).
  9. Coburn, P. S., et al. Bloodstream-To-Eye Infections Are Facilitated by Outer Blood-Retinal Barrier Dysfunction. PLoS One. 11 (5), 015560(2016).
  10. Ness, T., Pelz, K., Hansen, L. L. Endogenous endophthalmitis: Microorganisms, disposition and prognosis. Acta Ophthalmologica Scandinavica. 85 (8), 852-856 (2007).
  11. Novosad, B. D., Callegan, M. C. Severe bacterial endophthalmitis: Towards improving clinical outcomes. Expert Review of Ophthalmology. 5 (5), 689-698 (2010).
  12. Mursalin, M. H., Livingston, E. T., Callegan, M. C. The cereus matter of Bacillus endophthalmitis. Experimental Eye Research. 193, 107959(2020).
  13. Callegan, M. C., et al. Relationship of plcR-regulated factors to Bacillus endophthalmitis virulence. Infection and Immunity. 71 (6), 3116-3124 (2003).
  14. Beecher, D. J., Pulido, J. S., Barney, N. P., Wong, A. C. Extracellular virulence factors in Bacillus cereus endophthalmitis: Methods and implication of involvement of hemolysin BL. Infection and Immunity. 63 (2), 632-639 (1995).
  15. Callegan, M. C., et al. Contribution of membrane-damaging toxins to Bacillus endophthalmitis pathogenesis. Infection and Immunity. 70 (10), 5381-5389 (2002).
  16. Cowan, C. L. Jr, Madden, W. M., Hatem, G. F., Merritt, J. C. Endogenous Bacillus cereus panophthalmitis. Annals of Ophthalmology. 19 (2), 65-68 (1987).
  17. Callegan, M. C., et al. Virulence factor profiles and antimicrobial susceptibilities of ocular Bacillus isolates. Current Eye Research. 31 (9), 693-702 (2006).
  18. Callegan, M. C., et al. Bacillus endophthalmitis: Roles of bacterial toxins and motility during infection. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46 (9), 3233-3238 (2005).
  19. Mursalin, M. H. Bacillus S-layer-mediated innate interactions during endophthalmitis. Frontiers in Immunology. 11 (215), (2020).
  20. Moyer, A. L., Ramadan, R. T., Novosad, B. D., Astley, R., Callegan, M. C. Bacillus cereus-induced permeability of the blood-ocular barrier during experimental endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (8), 3783-3793 (2009).
  21. Callegan, M. C., et al. Efficacy of vitrectomy in improving the outcome of Bacillus cereus endophthalmitis. Retina. 31 (8), 1518-1524 (2011).
  22. David, D. B., Kirkby, G. R., Noble, B. A. Bacillus cereus endophthalmitis. British Journal of Ophthalmology. 78 (7), 577-580 (1994).
  23. Vahey, J. B., Flynn, H. W. Jr Results in the management of Bacillus endophthalmitis. Ophthalmic Surgery. 22 (11), 681-686 (1991).
  24. Wiskur, B. J., Robinson, M. L., Farrand, A. J., Novosad, B. D., Callegan, M. C. Toward improving therapeutic regimens for Bacillus endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (4), 1480-1487 (2008).
  25. Alfaro, D. V., et al. Experimental Bacillus cereus post-traumatic endophthalmitis and treatment with ciprofloxacin. British Journal of Ophthalmology. 80 (8), 755-758 (1996).
  26. Coburn, P. S., et al. TLR4 modulates inflammatory gene targets in the retina during Bacillus cereus endophthalmitis. BMC Ophthalmology. 18 (1), 96(2018).
  27. Mursalin, M. H., et al. S-layer Impacts the Virulence of Bacillus in Endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (12), 3727-3739 (2019).
  28. Astley, R. A., Coburn, P. S., Parkunan, S. M., Callegan, M. C. Modeling intraocular bacterial infections. Progress in Retinal and Eye Research. 54, 30-48 (2016).
  29. Parkunan, S. M., et al. CXCL1, but not IL-6, significantly impacts intraocular inflammation during infection. Journal of Leukocyte Biology. 100 (5), 1125-1134 (2016).
  30. LaGrow, A. L., et al. A Novel Biomimetic Nanosponge Protects the Retina from the Enterococcus faecalis Cytolysin. mSphere. 2 (6), 00335(2017).
  31. Beecher, D. J., Olsen, T. W., Somers, E. B., Wong, A. C. Evidence for contribution of tripartite hemolysin BL, phosphatidylcholine-preferring phospholipase C, and collagenase to virulence of Bacillus cereus endophthalmitis. Infection and Immunity. 68 (9), 5269-5276 (2000).
  32. Callegan, M. C., et al. The role of pili in Bacillus cereus intraocular infection. Experimental Eye Research. 159, 69-76 (2017).
  33. Miller, F. C., et al. Targets of immunomodulation in bacterial endophthalmitis. Progress in Retinal and Eye Research. 73, 100763(2019).
  34. Parkunan, S. M., Astley, R., Callegan, M. C. Role of TLR5 and flagella in Bacillus intraocular infection. PLoS One. 9 (6), 100543(2014).
  35. Parkunan, S. M., et al. Unexpected roles for Toll-Like receptor 4 and TRIF in intraocular infection with Gram-positive bacteria. Infection and Immunity. 83 (10), 3926-3936 (2015).
  36. Coburn, P. S., et al. Disarming Pore-Forming Toxins with Biomimetic Nanosponges in Intraocular Infections. mSphere. 4 (3), 00262-00319 (2019).
  37. LaGrow, A., et al. Biomimetic nanosponges augment gatifloxacin in reducing retinal damage during experimental MRSA endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 60 (9), 4632(2019).
  38. Novosad, B. D., Astley, R. A., Callegan, M. C. Role of Toll-like receptor (TLR) 2 in experimental Bacillus cereus endophthalmitis. PLoS One. 6 (12), 28619(2011).
  39. Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria. Biotechniques. 23 (4), 648-650 (1997).
  40. Yu, D. Y., Cringle, S. J. Oxygen distribution in the mouse retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 47 (3), 1109-1112 (2006).
  41. Beyer, T. L., O'Donnell, F. E., Goncalves, V., Singh, R. Role of the posterior capsule in the prevention of postoperative bacterial endophthalmitis: experimental primate studies and clinical implications. British Journal of Ophthalmology. 69 (11), 841-846 (1985).
  42. Tucker, D. N., Forster, R. K. Experimental bacterial endophthalmitis. Archives of Ophthalmology. 88 (6), 647-649 (1972).
  43. Alfaro, D. V., et al. Experimental pseudomonal posttraumatic endophthalmitis in a swine model. Treatment with ceftazidime, amikacin, and imipenem. Retina. 17 (2), 139-145 (1997).
  44. Silverstein, A. M., Zimmerman, L. E. Immunogenic endophthalmitis produced in the guinea pig by different pathogenetic mechanisms. American Journal of Ophthalmology. 48 (5), 435-447 (1959).
  45. Ravindranath, R. M., Hasan, S. A., Mondino, B. J. Immunopathologic features of Staphylococcus epidermidis-induced endophthalmitis in the rat. Current Eye Research. 16 (10), 1036-1043 (1997).
  46. Kumar, A., Singh, C. N., Glybina, I. V., Mahmoud, T. H., Yu, F. S. Toll-like receptor 2 ligand-induced protection against bacterial endophthalmitis. The Journal of Infectious Diseases. 201 (2), 255-263 (2010).
  47. Mylonakis, E., et al. The Enterococcus faecalis fsrB gene, a key component of the fsr quorum-sensing system, is associated with virulence in the rabbit endophthalmitis model. Infection and Immunity. 70 (8), 4678-4681 (2002).
  48. Sanders, M. E., et al. The Streptococcus pneumoniae capsule is required for full virulence in pneumococcal endophthalmitis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (2), 865-872 (2011).
  49. Hunt, J. J., Astley, R., Wheatley, N., Wang, J. T., Callegan, M. C. TLR4 contributes to the host response to Klebsiella intraocular infection. Current Eye Research. 39 (8), 790-802 (2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

CFU QuantitationTissue HomogenizationSerial DilutionAgar Plate IncubationColony Forming UnitsProtease InhibitorGlass Capillary Needle

Gerelateerde artikelen