Met vet bedekte eilandjestransplantatie met behulp van epididymaal wit vetweefsel

Samenvatting

Deze met vet bedekte eilandjestransplantatiemethode is geschikt voor de detectie van geënte eilandjes in de intraperitoneale holte. Met name vereist het niet het gebruik van biobindingsmiddelen of hechten.

Samenvatting

Eilandjestransplantatie is een cellulaire vervangingstherapie voor ernstige diabetes mellitus. De intraperitoneale holte is meestal de transplantatieplaats voor deze procedure. Intraperitoneale eilandjestransplantatie heeft echter enkele beperkingen, waaronder een slechte transplantatie-efficiëntie, moeilijk transplantaatdetectievermogen en een gebrek aan graftectomievermogen voor posttransplantatieanalyse. In dit artikel wordt "met vet bedekte eilandjestransplantatie", een intraperitoneale eilandjestransplantatiemethode die gebruik maakt van epididymaal wit vetweefsel, gebruikt om de therapeutische effecten van bio-technische eilandjes te beoordelen. De eenvoud van de methode ligt in het zaaien van eilandjes op epididymaal wit vetweefsel en het gebruik van het weefsel om de eilandjes te bedekken. Hoewel deze methode kan worden gecategoriseerd als een intraperitoneale eilandjestransplantatietechniek, deelt het kenmerken met intra-vetweefseleilandjestransplantatie. De met vet bedekte eilandjestransplantatiemethode toont echter robuustere therapeutische effecten dan intra-vetweefseleilandjestransplantatie, inclusief de verbetering van de bloedglucose- en plasma-insulinespiegels en het potentieel voor transplantaatverwijdering. Wij bevelen de toepassing van deze methode aan voor het beoordelen van de mechanismen van eilandjestransplantatie in wit vetweefsel en de therapeutische effecten van bio-technische eilandjes.

Inleiding

Eilandjestransplantatie is een cellulaire vervangingstherapie voor patiënten met ernstige diabetes mellitus. Recente rapporten hebben aangetoond dat de percentages van insuline-onafhankelijkheid drie jaar na transplantatie verbeteren tot 44% ¹ en dat ongeveer 80% van de ontvangers die meer dan 600.000 totale eilandjesequivalenten ontvangen, insuline-onafhankelijkheid bereiken². Bovendien werd in het meest recente Collaborative Islet Transplant Registry-rapport onthuld dat nuchtere bloedglucosespiegels gedurende een periode van 5 jaar op 60-140 mg / dL werden gehandhaafd bij meer dan 70% van de patiënten die alleen eiland....

Protocol

De volgende procedure wordt uitgevoerd in drie stappen. De eerste stap omvat de inductie van diabetes bij de ontvangende muizen en de isolatie van donoreilandjes. De tweede stap omvat de voorbereiding van eilandjes vóór transplantatie. In de derde stap wordt eilandjestransplantatie op epididymaal vetweefsel en bedekking van de eilandjes met behulp van het vetweefsel uitgevoerd. Daarna werden de therapeutische effecten beoordeeld. De behandeling van de muizen en de experimentele procedures die in deze studie worden uitgevoerd, voldoen aan de ''Principles of Laboratory Animal Care'' (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, National Institutes of Health publica....

Resultaten

Om de transplantatie-werkzaamheid van met vet bedekte eilandjestransplantatie te vergelijken met die na intraperitoneale eilandjestransplantatie, werd hetzelfde aantal eilandjes geïmplanteerd op het peritoneum in de linker paracolische ruimte van controleontvangers diabetische dieren. De bloedglucosespiegels van muizen met met vet bedekte eilandjestransplantatie werden waargenomen om geleidelijk en significant te dalen in vergelijking met intraperitoneale eilandjes getransplanteerde muizen (p = 0,0023;

Discussie

De met vet bedekte eilandjestransplantatiemethode omvat technieken van twee verschillende transplantatietechnieken: intraperitoneale eilandjestransplantatie en intra-vetweefseleilandjestransplantatie. Aangezien het oppervlaktemembraan van epididymaal wit vetweefsel wordt beschouwd als het witte vetweefsel dat wordt bedekt door het peritoneum en dat is bevestigd aan de bijbal, kan de met vet bedekte eilandjestransplantatiemethode anatomisch worden gecategoriseerd als een soort intraperitoneale eilandjestransplantatie. De .......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
4-0 Nylon	Alfresa	ER2004NA45-KF2	Abdomen sluiten
Alexa 488-geconjugeerd ezel anti-guinea pig	Jackson Immunoresearch	706-546-148	Secundaire antilichaam voor insuline antilichaam
Alexa 647-geconjugeerd ezel anti-konijn	Jackson Immunoresearch	711-606-152	Secundaire antilichaam voor von Willebrand factor antilichaam
DMEM, lage glucose, pyruvaat	ThermoFisher Scientific	11885084	Islets cultiveren, islets transplanteren
Eosine	Fujifilm Wako Chemicals	051-06515	Gebruiken voor het kleuren van weefsel door eosine
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1,5 mL	Eppendorf	30120086	Islets verzamelen
Falcon 15 mL Conische Centrifugeerbuizen	Corning	352095	Islets verzamelen
Falcon 40 μm Cell Strainer	Falcon	352340	Gebruiken voor het scheiden van islets van ander pancreasweefsel
Falcon 50 mL Conische Centrifugeerbuizen	Corning	352070	Overtollig medium/buffer weggooien
Guinea pig anti-insuline	Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)	IR002	Primair antilichaam voor muis insuline
Hematoxyline	Muto Pure Chemicals Co., Ltd.	30002	Gebruiken voor het kleuren van weefsel door hematoxyline
Isodine oplossing 10%	Shionogi&Co., Ltd.	geen catalogusnummer	Gebruiken voor desinfectie
Isofluraan	Fujifilm Wako Chemicals	095-06573	Gebruiken voor anesthesie
Labcon 1000 μL ZapSilk Low Retention Pipette Tips	Labcon	1177-965-008	Gebruiken voor het scheiden van islets van ander pancreasweefsel
Labcon 200 μL ZapSilk Low Retention Pipette Tips	Labcon	1179-965-008	Gebruiken voor het zaaien van islets op epididymaal wit vetweefsel
Mintsensor	Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,	8AEB02E	Gebruiken voor het monitoren van bloedglucose
Pipetteman P-1000	Gilson	F123602	Gebruiken voor het scheiden van islets van ander pancreasweefsel
Pipetteman P-200	Gilson	F123601	Gebruiken voor het zaaien van islets op epididymaal wit vetweefsel
Konijn anti-vWF	Abcam	ab6994	Primair antilichaam voor muis von Willebrand factor