Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Er kunnen verschillende toedieningsroutes worden gebruikt om mesenchymale stamcellen (MSC's) aan de hersenen af te leveren. In de huidige studie werden MSC's toegediend in de neuraxis en de hersenen via injectie in de spinale holte. MSC's werden geïnjecteerd in de ruggengraatholten van ratten en de migratie van stamcellen werd gevolgd en gekwantificeerd.
Mesenchymale stamcellen (MSC's) zijn bestudeerd voor de behandeling van verschillende ziekten. Bij neurodegeneratieve ziekten met defecten in zowel de hersenen als het ruggenmerg is de toedieningsweg erg belangrijk, omdat MSC's zowel naar de hersenen als naar het ruggenmerg moeten migreren. Dit artikel beschrijft een methode voor het toedienen van MSC's in het wervelkanaal (injectie in de intraspinale holte) die zich kan richten op de hersenen en het ruggenmerg in een rattenmodel. Een miljoen MSC's werden geïnjecteerd in de wervelkanalen van ratten ter hoogte van lendenwervels 2-3. Na toediening werden de ratten 0, 6 en 12 uur na de injectie geëuthanaseerd. Optische beeldvorming en kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (qPCR) werden gebruikt om de geïnjecteerde MSC's te volgen. De resultaten van de huidige studie toonden aan dat MSC's die via de ruggenmergholte werden toegediend, vervolgens om 12 uur in zowel de hersenen als het ruggenmerg konden worden gedetecteerd. Intraspinale holte-injectie heeft het voordeel dat er geen algehele anesthesie nodig is en heeft weinig bijwerkingen. Het nadeel van de lage migratiesnelheid van MSC's naar de hersenen moet echter worden overwonnen.
Mesenchymale stamcellen
Onder ziekteomstandigheden scheiden MSC's ziektespecifieke therapeutische stoffen af via paracriene acties1 waarvan is gemeld dat ze de immuunrespons reguleren, beschadigde weefsels herstellen en giftige stoffen verwijderen2. Daarom wordt MSC-therapie als effectiever beschouwd dan single-target therapie bij de behandeling van multifactoriële ziekten zoals de ziekte van Alzheimer en sarcopenie 3,4,5,6. Bovendien hebben....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
OPMERKING: Deze studie is goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (goedkeuringsnummer: 20170125001, datum: 25 januari 2017) van het Samsung Biomedical Research Institute (SBRI) in het Samsung Medical Center. Als geaccrediteerde faciliteit van de Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International handelt de SBRI in overeenstemming met de richtlijnen van het Institute of Laboratory Animal Resources.
1. Bereiding van van menselijke Wharton's gelei afgeleide MSC's
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Om de werkzaamheid van intraspinale holte-injectie van MSC's te evalueren, werden in de huidige studie DiD-gelabelde MSC's gebruikt. Alvorens MSC's in de ruggenmergholte te injecteren, werd de werkzaamheid van de etikettering in vitro beoordeeld met behulp van optische beeldvorming en fluorescentiemicroscopie (Figuur 1). Na het kleuren van de MSC's met het DiD-labelingreagens met behulp van de procedure beschreven in protocolsectie 3.1, werden optische beeld.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De optimale toedieningsweg voor behandeling met MSC's moet worden gekozen afhankelijk van de doelziekte, de toestand van de patiënt en het type geneesmiddel dat moet worden toegediend. Bij celtherapieën, waaronder MSC-therapie, moet directe injectie van stamcellen in de hersenen of intrathecaal via de CSF worden overwogen, aangezien de cellen de BBB19 niet kunnen passeren. Intraspinale holte-injectie is relatief niet-invasief en veroorzaakt geen neuronale schade i.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
Deze studie werd ondersteund door subsidies van het Basic Research Program via de National Research Foundation of South Korea (NRF), gefinancierd door het Ministerie van Onderwijs (NRF-2017R1D1A1B03035940), en een subsidie van het Korea Health Technology R&D Project via het Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), gefinancierd door het Ministerie van Volksgezondheid en Welzijn, Republiek Korea (subsidienummers: HI14C3484 en HI18C0560). We willen Editage (www.editage.co.kr) bedanken voor het bewerken van de Engelse taal.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 0.25% Trypsin-EDTA | Gibco-invitrogen | 25200114 | Celcultuur |
| Fetal bovien serum | biowest | S1520 | Cultuurmediumsupplement |
| gentamicin | Gibco-invitrogen | 15710-072 | Cultuurmediumsupplement |
| Gentra Puregene Tissue Kit | QIAGEN | 158689 | gDNA-isolatie |
| MEM, geen glutamine, geen fenol rood | Gibco | 51200038 | WJ-MSC formulering voor injectie |
| Miminum Essential Medium alpha | Gibco-invitrogen | 12571063 | WJ-MSC-kweekmedium |
| Power SYBR Green PCR Master Mix | Applied Biosystems | 4368577 | Reagens voor kwantitatieve real-time PCR |
| QuantStudio 6 Flex Real-Time PCR System | Thermo fisher | 4485694 | Kwantitatieve real-time PCR |
| trypan blauw | Gibco | 15250061 | Injectie |
| Vybrant DiD Cell-Labeling Solution | invitrogen | V22887 | Stamcellenlabelingoplossing |
| Xenogen IVIS Spectrum system | Perkin Elmer | 124262 | Optisch beeldvormingsapparaat |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dit artikel is gepubliceerd
Video binnenkort beschikbaar