Dit artikel demonstreert een efficiënte chirurgische aanpak om acute ischemie vast te stellen bij muizen met een kleine incisie. Deze aanpak kan door de meeste onderzoeksgroepen worden toegepast zonder laboratoriumupgrades.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een gewijzigd chirurgisch model van ischemie van de achterpoten in ApoE-/- Muizen met behulp van een miniatuurincisie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het doel van deze studie is het introduceren en evalueren van een aangepaste chirurgische aanpak om acute ischemie bij muizen te induceren die in de meeste dierlaboratoria kan worden geïmplementeerd. In tegenstelling tot de conventionele benadering voor dubbele ligatie van de dijbeenslagader (DLFA), werd een kleinere incisie op het rechter inguinale gebied gemaakt om de proximale femorale slagader (FA) bloot te leggen om DLFA uit te voeren. Vervolgens werd de incisie met behulp van een 7-0 hechting naar het kniegebied gesleept om de distale FA bloot te leggen. Magnetische resonantiebeeldvorming (MRI) op bilaterale achterpoten werd gebruikt om FA-occlusie na de operatie te detecteren. Op 0, 1, 3, 5 en 7 dagen na de operatie werd het functionele herstel van de achterpoten visueel beoordeeld en beoordeeld met behulp van de Tarlov-schaal. Histologische evaluatie werd uitgevoerd na het euthanaseren van de dieren 7 dagen na DLFA. De procedures werden met succes uitgevoerd op het rechterbeen bij tien ApoE-/- muizen, en geen muizen stierven tijdens de daaropvolgende observatie. De incisiegroottes bij alle 10 muizen waren minder dan 5 mm (4,2 ± 0,63 mm). MRI-resultaten toonden aan dat de FA-bloedstroom in de ischemische kant duidelijk geblokkeerd was. De resultaten van de Tarlov-schaal toonden aan dat de functie van de achterpoten na de procedure aanzienlijk afnam en langzaam herstelde in de volgende 7 dagen. Histologische evaluatie toonde een significante ontstekingsreactie aan de ischemische kant en verminderde microvasculaire dichtheid in de ischemische achterpoot. Concluderend introduceert deze studie een aangepaste techniek met behulp van een miniatuurincisie om ischemie van de achterpoten (HLI) uit te voeren met behulp van DLFA.
Inleiding
Er is een onvervulde behoefte aan preklinische diermodellen voor onderzoek naar vaatziekten zoals perifere arterieziekte (PAD). Ondanks de geavanceerde ontwikkelingen in diagnose en behandeling, waren er in 2018 meer dan 200 miljoen patiënten met PAD1, en hun aantal neemt voortdurend toe. Hoewel verschillende nieuwe therapeutische benaderingen2,3,4,5,6,7 zijn beschreven, blijft een succesvolle vertaling van deze therapeutische modaliteiten in klinis....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
OPMERKING: Alle experimentele procedures zijn uitgevoerd volgens de EG-richtlijn EC 2010/63/EU en zijn goedgekeurd door de lokale Duitse wetgeving (35-9185.81/G[1]239/18). Tien mannelijke ApoE-/- muizen met de C57BL/6J achtergrond, met een gewicht van 29,6-38,0 g, werden gehuisvest op een 12 h licht/donker cyclus en kregen een westers dieet (1,25% cholesterol en 21% vet) en water ad libitum gedurende 12 weken vanaf de leeftijd van 8 weken. HLI werd uitgevoerd op 20 weken oude muizen zoals hieronder beschreven.
1. Inductie van HLI in ApoE-/- muizen
- Bereid de benodigde apparatuur en gereedschappen voor....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Kenmerken van ApoE-/- muizen
DLFA-operaties werden met succes uitgevoerd op 10 muizen om het HLI-model vast te stellen, en geen van de muizen stierf na de procedure. Om veranderingen in lichaamsgewicht te volgen, werden muizen gewogen vóór de DLFA-procedure (Pre-DLFA) en 7 dagen na de DLFA-operatie (Post-DLFA). Pre-DLFA-gewichten varieerden van 29,6 tot 38,0 g (gemiddeld 34,74 ± 2,47 g) en post-DLFA-gewichten varieerden van 26,5 tot 34,1 g (gemiddeld 30,77.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze studie rapporteert een aangepaste, vereenvoudigde en chirurgisch efficiënte aanpak om een HLI-model vast te stellen in ApoE-/- muizen met behulp van dubbele ligatie in de proximale en distale regio's van de FA via een incisie van 3-4 mm zonder vereiste laboratoriumupgrades. Het belangrijkste kenmerk van deze methode is de kleinere omvang van de incisie in vergelijking met eerder gerapporteerde studies die HLI-modellen van muizenbeschrijven 8,9,
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat de inhoud van het artikel is samengesteld bij afwezigheid van commerciële of financiële relaties die kunnen worden opgevat als een potentieel belangenconflict.
Dankbetuigingen
Auteurs bedanken Viktoria Skude, Alexander Schlund en Felix Hörner voor de uitstekende technische ondersteuning.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 10x Phosphate buffer saline | Roth | 9143.1 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring en immunohistologische kleuring |
| 30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| 6-0 absorbable sutures | PROLENE | 8776H | Gebaten voor het naaien van de huid |
| 6-0 absroable suture | PROLENE | EP8706 | Gebaten bij Chirurgie |
| 7-0 absorbable sutures | PROLENE | EH8021E | Gebaten voor het binden van de slagader |
| 7-0 absroable suture | PROLENE | EP8755 | Gebaten bij Chirurgie |
| Acetic acid | Roth | 6755.1 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring |
| Albumin Fraktion V | Roth | 8076.2 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Gebaten voor de sterilisatie van de chirurgische instrumenten |
| Axio vert A1 microscope | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Gebaten voor het bekijken en nemen van de foto's van hematoxyline en eosin kleuring en immunohistologische kleuring |
| Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Scan de blokkade van de femorale slagader |
| Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Gebaten in postoperatief pijnbeheersing. Dosis - 0,1 mg/kg lichaamsgewicht elke 8 uur gedurende 48 uur na de operatie |
| CD31 antibody | Abcam | ab28364 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| Eosin Y solution 0.5 % in water | Roth | X883.1 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring |
| Epitope Retrieval Solution pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| Ethanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring en immunohistologische kleuring |
| Fentanyl | Cayman Chemical | 437-38-7 | Gebaten voor anesthesie |
| Fine point forceps | Medixplus | 93-4505S | Gebaten voor het scheiden van de slagader van zenuw en ader |
| Glass bead sterilisator | Simon Keller | Type 250 | Gebaten voor sterilisatie van de chirurgische instrumenten |
| Graefe iris forceps curved | VUBU | VUBU-02-72207 | Gebaten voor het doffe scheiden van huid en onderhuids weefsel |
| Hair Remover cream, Veet (with aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Haar verwijderen van achterste ledematen van muizen |
| Heating plate | STÖRK-TRONIC | 7042092 | Houd de temperatuur van muizen constant |
| Hematoxylin | Roth | T865.2 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring en immunohistologische kleuring |
| Leica surgical microscope | Leica | M651 | Vergroot het gezichtsveld om de operatie te vergemakkelijken |
| Liquid DAB+Substrate Chromogen System | Dako | K3468 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| Male ApoE-/- mice | Charles River Laboratories | N/A | Gebaten voor het vestigen van het muismodel voor perifere arteriële ziekte |
| Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Gebaten voor anesthesie |
| Micro Needle Holder | Black & Black Surgical | B3B-18-8 | Houd de naald vast |
| Micro suture tying forceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Gebaten om te helpen bij het knopen tijdens de chirurgie |
| Microtome | Biobase | Bk-Mt268m | Gebaten voor weefselsneden |
| Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Gebaten voor anesthesie |
| MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025 | SA Instruments | N/a | bewaken van de vitale functies van dieren tijdens MRI-scan |
| Octeniderm farblos | Schülke & Mayr GmbH | 180212 | Gebaten voor desinfectie van de huid |
| Ointment for the eyes and nose | Bayer AG | 1578675 | Houd de ogen vochtig onder de anesthesie |
| Paraformaldehyde | Roth | 0335.1 | Gebaten voor fixatie van het weefsel |
| Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Gebaten voor anesthesie |
| Saline | DeltaSelect | 1299.99.99 | Gebaten voor anesthesie |
| Spring handle scissors with fine, sharp tips | Black & Black Surgical | B66167 | Gebaten voor het snijden van de slagader |
| SuperCut Scissors | Black & Black Surgical | B55992 | Gebaten voor het snijden van de huid |
| Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Gebaten voor immunohistologische kleuring |
| Western diet, 1.25% Cholesterol | ssniff Spezialdiäten GmbH | E15723-34 | Dieet voor de muizen |
| Xylene | Roth | 4436.3 | Gebaten voor hematoxyline en eosin kleuring en immunohistologische kleuring |
Referenties
- Shu, J., Santulli, G. Update on peripheral artery disease: Epidemiology and evidence-based facts. Atherosclerosis. 275, 379-381 (2018).
- Tateishi-Yuyama, E., et al. Therapeutic ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
