Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Regenwormen zijn een nieuw ongewerveld in vivo bench-top model voor vaatonderzoek. We presenteren technieken en apparatuur die efficiënte chirurgie en micro-injectie in het vaatstelsel van de regenworm mogelijk maken. Chirurgische protocollen, micro-injectietechnieken en de procedure voor het vervaardigen van op maat gemaakte micropipetten worden beschreven.
Hoewel gewervelde dieren onmisbaar zijn voor biomedisch onderzoek, worden studies vaak beperkt door factoren zoals kosten, langdurige interne beoordeling en ethische overwegingen. We presenteren de regenworm als een alternatief, goedkoop, ongewerveld dier dat van toepassing is op bepaalde voorlopige vaatziekten. Vanwege de chirurgische beschikbaarheid van de dorsale vaten, ventrale vaten en vijf paar pseudo-harten van de regenworm, zijn regenwormen gemakkelijk toegankelijk, bieden ze goedkoop onderhoud en vereisen ze toediening van slechts kleine doses van een bepaalde verbinding. Het regenwormmodel biedt een eenvoudig gesloten vasculair bloedsomloop met een hemoglobinestructuur die lijkt op menselijk bloed. Er is een protocol opgesteld voor het verdoven van de regenwormen en het uitvoeren van chirurgische incisies om relevante bloedvaten bloot te leggen. Micropipetten voor de toediening van verbindingen worden gevormd door glas te verhitten en te trekken met een pipettrekker en door een afschuinsysteem te gebruiken om een fijne naaldpunt op micronschaal te creëren. De tips worden vervolgens gebruikt met een micropositioner en micro-injector om willekeurige verbindingen in het vasculaire systeem van een regenworm te injecteren, herhaalbaar, met de beschikbaarheid van grote monstergroottes en kleine samengestelde volumes. Details over de fijne kneepjes van de injectieprocedure worden verstrekt. De kleine vatgrootte van de regenworm is een uitdaging, vooral in het geval van het ventrale vat; Beheersing van de gepresenteerde technieken biedt echter een hoge herhaalbaarheid als een goedkope oplossing, waardoor studies met een zeer grote steekproefomvang praktisch zijn.
De regenworm is gebruikt als een belangrijke bio-indicator en bioassay voor eerdere wetenschappelijke toepassingen 1,2,3,4,5,6; Het is een ideaal organisme voor het beoordelen van biologische risico's van gevaarlijk en giftig afval in terrestrische omgevingen voor in situ- en bioaccumulatiestudies, zoals biociden (insecticiden) in de bodem en nadelige ecotoxicologische effecten 7,8,9,10.....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
1. Bereiding van de micropipet: glas trekken en afschuinpunt
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De volgende representatieve resultaten zijn gebaseerd op een reeks specifieke parameters, waaronder de instellingen die worden gebruikt om aan de glazen pipet te trekken, de grootte van de pipetopening gevormd vanuit een bepaalde afschuinhoek en de druk en tijd van de micro-injecties. In figuur 1 wordt een schema van de stroom weergegeven die het proces van begin tot eind weergeeft.
Op basis van de geselecteerde parameters van de .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Hoewel de regenworm voor 10% uit ethanol bestaat, vooral als de regenworm ouder is, kunnen er ongewenste effecten zijn voor blootstellingstijden langer dan 30 minuten; De darmen zullen beginnen te verslechteren en wanneer de regenworm operatief wordt geopend, verspreiden zijn inwendige darmen zich. Daarom wordt het aangemoedigd om regenwormen van jonge tot middelbare leeftijd te gebruiken. Tijdens het doorknippen van de huid van de regenworm is het absoluut noodzakelijk dat er geen volle.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dit werk werd gefinancierd door de NSF-FDA Scholar-in-Residence Fellowship (NSF-FDA SIR, #1641221), de Chief Scientist Challenge Grant (FDA OCS) van het Amerikaanse Food and Drug Administration Office (FDA OCS), het Integrative Graduate Education and Research Traineeship van de National Science Foundation (NSF IGERT, #1144646) en ondersteund door het Office of Science and Engineering Laboratories (OSEL) van de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 3M Vetbond Tissue Adhesive | 3M Vetbond | 084-1469SB | 3mL fles veterinair hechtmiddel - vloeibare pleister |
| 40x Stereo Microscope | Sutter Instrument Co. | BV-10-D | Niet nodig, kan worden toegevoegd aan andere microscopen |
| 500 Large Worms | Windsor Wholesale Bait | 500 Large | |
| Beveler pedaal olie | Sutter Instrument Co. | 008 | |
| Blades | Ted Pella, Inc | 121-2 | |
| Borosilicate Glas met Filament | Sutter Instrument Co. | BF150-86-10 | |
| Camera | AmScope | MU500 | |
| Camera | AmScope | MU1803-CK | 8MP USB3.0 Microscoop Digitale Camera |
| Elektrode Impedantie Meter | Sutter Instrument Co. | BV-10-C | |
| Ethanol | Sigma Aldrich | E7023-1L | Pure ethanol |
| Filament | Sutter Instrument Co. | FT315B | trough filament |
| Slijpplaat | Sutter Instrument Co. | 104D | Fine Plate |
| Ziekenhuiskwaliteit Saline | Baxter Healthcare Corporation | 2F7124 | 0.9% Natriumchloride Irrigatie |
| Joystick Micromanipulator | Narishige | MN-151 | |
| KimWipes Kimtech Science | Kimberly-Clark Professional | 34155 | |
| Leafgro | LeafGro | 589252 | 1.5-cu. ft. |
| Metalen Hub Naald | Hamilton | 91024 | Luer Lock Metalen Naald |
| Micro Vaat Clips | WPI | 501779-G | |
| Microinjector | TriTech Research | MINJ-D | |
| Micropiette Puller Model P-97 | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| Micropipette Beveler | Sutter Instrument Co. | BV-10-B | |
| Microscoop | AmScope | SM-8TPW2-144S | 3.5X-225X Simul-Focal Articulating Microscoop |
| Naaldhouder | TriTech Research | MINJ-4 | |
| NeverWet | Rust-Oleum | NeverWet | |
| Pyrex Glas | Corning | 08747A | Fisher Manufacturer |
| Roestvrij Micro-Lineaal | Ted Pella, Inc | 13635 | Micro-Lineaal gemonteerd op een handvat, 10mm schaal, met lijnen op 0.01mm intervallen |
| Chirurgische Grips | Ted Pella, Inc | 53073 | Forceps, Hemostat |
| Chirurgische schaar | Ted Pella, Inc | 1320 | Fine Iris Schaar, Recht |
| U.S.P. Minerale Olie Smeermiddel Laxerend | Swan | Mineral Oil |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dit artikel is gepubliceerd
Video binnenkort beschikbaar